1金银花化学成分及质量控制研究进展【关键词】 金银花；化学成分；质量控制；综述金银花 ,又名忍冬花,具有清热解毒、疏散风热的功效,是最常用的中药之一。其名始见于本草纲目忍冬项下。忍冬始载于名医别录, 列为上品。 2005 版中国药典将灰毡毛忍冬 Lonicera macranthoides Hand.-Mazz、红腺忍冬 Lonicera hypoglauca Miq 或华南忍冬 Lonicera confusa DC.列于山银花 Flos Lonicerae名下, 以有别于金银花 Flos Lonicerae japonicae。1 化学成分1.1 挥发油金银花中的挥发油是其疏散风热主要物质基础之一。研究学者主要应用气-质联用(GC-MS)技术,从干花、鲜花成分比较、不同来源样品、不同提取方法、不同药用部位等对金银花挥发油成分进行了分析和测定。张氏等1研究认为, 金银花 Flos Lonicerae japonicae干、鲜花化学成分差异很大。从干花挥发油中鉴定出 65 个化合物,占挥发油的 94.42%,其中棕榈酸占 26.36%,十八碳二烯酸乙酯占9.86%,二十四碳酸甲酯占 8.44%；从鲜花挥发油中鉴定出 52 个化2合物, 占 90.46%,其中 -TIN M 烯为 21.52%,芳樟醇为 14.15%,芳樟醇氧化物为 10.46%。鲜花中含量最高的 -TIN M 烯在干花中未测出, 可能在干燥过程中损失。其他化学成分为醇、醛、酯、酮、烷、烯、炔等有机化合物。姚氏等2采取超临界 CO2 萃取法(SFE-CO2)所得萃取物进行 GC-MS 分析, 经人工解析及计算机检索确定化学结构, 共鉴定出绿叶醇等 20 种化合物, 萃取物得率为 3.25%。童氏等3采用 GC-MS 研究湖南金银花主流品种灰毡毛忍冬花蕾中挥发油的化学成分。3 种不同来源的灰毡毛忍冬花蕾中的挥发油均含有芳樟醇(Linalool)、香叶醇(Geraniol)、- 松油醇(-Terpineol)、辛烯醇(1-Octen-3-o1)、二十一烷醇(3-Henen-1-ol)等 26 个相同成分,其中芳樟醇的百分含量最高,在隆回、溆浦、新宁产灰毡毛忍冬花蕾中所占相对含量分别为15.77%、28.85%、31.88%。狄氏等4 采用 GC-MS 进行分析, 水蒸气蒸馏法(SD)和 SFE 所提金银花挥发性成分,前者中共鉴定出 27种成分,后者中共鉴定出 24 种成分, 其中有 11 种成分为共有成分。SFE 法所提的挥发油中主要含有饱和烷烃( 二十八烷 30.49%、十九烷 14.60%)等, 而 SD 法所提的挥发油中以有机酸和有机酸酯 (十六酸29.10%、十六酸酯 9.26%)等为主。侯氏等 5用蒸馏-萃取法提取金银花中挥发性物质,测得金银花挥发油的含量为 2.52%。从金银花挥发油中分离并确定出 50 种化学成分。其中主要成分酸类化合物占挥发油总量的 59.76%,其次酮类化合物占 15.58%,醇类化合物占12.85%,萜类化合物占 1.57%,萜类氧化物占 1.32%,醛类化合物占31.74%,烷烃化合物占 7.18%,共占金银花中挥发油总量的 98.44%。李氏等6用 GC-MS 对忍冬不同药用部位挥发油成分进行分析比较,从金银花、忍冬藤中共分离鉴定了 36 种成分。其中从金银花中鉴定出 28 种,从忍冬藤中鉴定出 26 种,两者共有成分 18 种,分别占各自挥发油总量的 85.23%、93.42%,含量较高的化合物均为棕榈酸(40.94%、42.41%) 和亚油酸(16.02% 、25.94%) 。表明金银花、忍冬藤中挥发油成分具有高度相似性。1.2 黄酮类黄酮类化合物有抗菌抗病毒的药理作用,其中木犀草素- 7-0-D-半乳糖苷已作为 2005 版中国药典中金银花 Flos Lonicerae japonicae 的一个质量控制指标。研究者通过色谱分离和光谱鉴定的方法,对忍冬和山银花中的黄酮类化合物进行了确定。邢氏等7从忍冬花蕾中分离得到 11 个化合物,分别是木犀草素 ()、5-羟基-7,3,4,5-四甲氧基黄酮() 、5- 羟基-7,4-三甲氧基黄酮() 、5-羟基-7,4一二甲氧基黄酮()、槲皮素()、忍冬苷() 、胡萝卜苷() 。化合物 ()为首次从该属植物中发现 ,化合物 V、和 X 为首次从该植物的花蕾中发现。柴氏等8又从山银花中分离得到黄酮类化合物 8 个,经鉴定为木犀草素(I),槲皮素(), 苜蓿素(), 苜蓿素- 7-0-D-葡萄糖苷(),木犀草素-7-0-D- 半乳糖苷(), 芦丁(),金圣草素-7-O-新橙皮糖苷(),苜蓿素-7-O-新橙皮糖苷() 。其中4、为从本属中首次分离得到,其它均系首次从该种中分离得到。李氏等9用色谱法和光谱技术也分离鉴定出木犀草素、槲皮素等。1.3 有机酸、醇、酯类有机酸类被认为是金银花清热解毒的药理基础,目前常以绿原酸作为金银花的质量控制指标。研究人员开始转向同属的细毡毛、山银花等未涉及领域。李氏等9用色谱法和光谱技术分离鉴定其化学成分,对细毡毛忍冬花蕾进行化学成分研究,分离鉴定出咖啡酸、3,5-二咖啡酰奎尼酸、绿原酸、棕榈酸等,均系首次从该植物中分离得到。柴氏等10 用相同的方法从山银花中分离得到 4 个酚酸类化合物, 经鉴定为：咖啡酸(caffeic acid)(),绿原酸(chlorogenic acid)(),绿原酸甲酯(methyl chlorogenate)() 和 5-咖啡酰基奎宁酸丁酯(5-O caffeoyl quinic acid butyl ester)()。化合物为从本属中首次分离得到,其它均系首次从该种植物中分离得到。据该研究组统计, 至此 ,包括绿原酸类和奎宁酸以及它们的酯类化合物,已从忍冬属各植物中分离得到了 21 种酚酸类成分。1.4 皂苷类柴氏等11从山银花乙醇提取物的正丁醇萃取部分中分离得到 75个常春藤皂苷类化合物,其中常春藤皂苷元-28-O- D-吡喃葡萄糖基(61)-O-D-吡喃葡萄糖基酯()为首次从忍冬属植物中分离得到, 常春藤皂苷元-3-O-a-L- 吡喃阿拉伯糖基(21)-a-L-吡喃鼠李糖基-(31)-O-D-吡喃葡萄糖苷()、常春藤皂苷元-3-O-a-L-吡喃阿拉伯糖基(21)-O-a-L-吡喃鼠李糖基-(31)-O-D-吡喃葡萄糖基(41)-0-D-吡喃葡萄糖苷()在忍冬属中仅见水解产物,其它均系从该植物中首次分离得到。1.5 环烯醚萜苷类李氏等12从金银花 Lonicera japonica Thunb.中分离得到一个新的裂环环烯醚萜苷,命名为 dehydromorroniside。该化合物为忍冬属中发现的第 3 个 morroniside-型裂环环烯醚萜苷。2 质量控制 质量控制方面的研究多集中于不同品种、不同产地金银花有效成分的含量测定, 并越来越倾向于同时测定多种成分。 GC、GC-MS、 HPLC 和核磁共振的指纹图谱方面也有了初步探索。认为HPLC 和 GC 指纹图谱方法可用于金银花药材、提取物品质及其伪品的鉴定。62.1 有效成分的含量测定王氏等13采用高效液相色谱梯度洗脱法同时测定了金银花中绿原酸、咖啡酸、3,5-二咖啡酰奎尼酸含量,并对 4 个产地 3 种金银花中上述 3 种化合物进行定量分析。结果西南地区金银花药材主流商品灰毡毛忍冬、细毡毛忍冬干燥花蕾中绿原酸、咖啡酸、3,5-二咖啡酰奎尼酸含量高于山东、河南产金银花。白氏等14采用 HPLC测定四地产金银花药材中绿原酸的含量,并与对照药材相比,结果对照药材中绿原酸含量为 25.84 mg/g,山东省为 24.10 mg/g,河北省为24.48 mg/g,河南省为 23.10 mg/g,安徽省为 22.08 mg/g。认为金银花中绿原酸含量测定可以作为判定金银花药材品质的指标之一。黄氏等15 用 HPLC 分析方法 ,同时测定金银花不同种 (忍冬、山银花、红腺忍冬、灰毡毛忍冬、细毡毛忍冬)中芦丁、金丝桃苷、木犀草素-7-O-D 半乳糖苷、忍冬苷、苜蓿苷、金圣草素-7-O-新橙皮糖苷、苜蓿素-7-O-新橙皮糖苷、槲皮素 8 种黄酮的含量。结果线性范围内 8 个黄酮化合物的标准曲线呈良好的线性关系,芦丁在忍冬和山银花中含量高,而在红腺忍冬中痕量存在, 甚至在细毡毛忍冬检测不到。相反, 芦丁、木犀草素-7-O-D-半乳糖苷和忍冬苷在忍冬中含量相对较高(100 g/g),而山银花中含芦丁、木犀草素 7-O-D 半乳糖苷相对较高；而红腺忍冬、灰毡毛忍冬、细毡毛忍冬中只有木犀草素-7-O-D-半乳糖苷的含量较高。72.2 指纹图谱的研究指纹图谱是目前提出的最符合中药自身特点的质量控制方法,在其可行性方面已有了不少探索。田氏等16以芳樟醇为参照物,采用GC 法对 11 批忍冬 Lonicera japonica Thunb.花蕾进行分析, 找出特征指纹峰,建立了 GC 指纹图谱, 获得 24 个共有指纹峰。王氏等17应用 GC 色谱法建立了鱼金注射剂(鱼腥草、金银花)的指纹图谱,结果注射剂标准 GC 指纹由 17 个特征峰组成,并对不同批注射剂进行了相似度比较,相关系数的 RSD 小于 2%。王氏等18还应用 GC 法建立了金银花的指纹图谱,利用相似度计算软件,建立了药材 GC 指纹图谱共有模式,并对不同批药材进行了相似度的比较。阳氏等19以绿原酸为参照物,用 HPLC 方法建立金银花甲醇提取物的指纹图谱, 药材有 15 个共有峰,其参数符合 “中药注射剂指纹图谱技术要求 ”的有关规定。刘氏等20采用 HPLC 梯度洗脱法,确定了金银花药材有 11个共有峰,认为此方法可靠, 可为提高金银花药材质量控制标准提供参考。冯氏等21 以绿原酸为参照物, 应用 HPLC 分别对忍冬药材、提取物各批样品进行检测,得出的指纹图显示,药材、提取物均有 6 个共有峰。白氏等22 采用 HPLC 法获得色谱指纹图谱, 据此图谱对金银花质量进行分析,得出的结果是：山东、河北、河南、安徽 4 个产地8金银花指纹图谱主要特征大致相同,金银花主要成分之一绿原酸含量与对照药材相比无显著性差异(P0.05),产地金银花品质与对照药材基本相同。王氏等23采用 254 nm 检测波长, 采用醋酸- 甲醇线性梯度洗脱法,建立了忍冬药材 Flos Lonicerae.Japonica 的 HPLC 指纹图谱,10 个样品中得到 11 个特征指纹峰。林氏等 24建立了山东产金银花乙醇提取物 HPLC 和核磁共振(NMR)的指纹图谱,认为NMR 指纹法可作为中成药内在化学成分特征及相对之间含量的差异检测手段。3 讨论目前, 金银花化学成分的研究领域已经扩展到不同品种,而且不断有新的化学成分在金银花中被发现。化学成分的深入研究为金银花的质量控制提供了依据。在金银花的质量控制方面,有效成分含量测定已经有了比较成熟的方法,金银花的指纹图谱也有了初步探索,但依然停留在学术方面,并没有建立起鉴别真伪和判断质量优劣指纹图谱的数据库和配套分析软件并应用到实际商品检验的质量控制中。应用数理统计和计算机检索、计算功能统计各样品中各成分含量的分布关系,从而建立具有各样品抽象特征的中药材、提取物及制剂的指纹图谱,使 GC 或 HPLC 等指纹图谱与化学成分、成分含量及各9成分药效建立相应的量化关系都是有待探索和研究的课题。【参考文献】1 张 玲,彭广芳,单卫华,等. 山东金银花干花及鲜花挥发油成分比较研究J.西北药学杂志 ,1998,13(6)：249250.2 姚育法,雷正