KKME-专业医学搜索引擎 http:/www.kkme.net/临床感染常见病原体检测分类其他中文名称临床感染常见病原体检测正文【诊断学。陈文彬、潘祥林，人民卫生出版社，2009 年】描述为： 感染性疾病(infectiousdiseases)指各种生物性病原体 (病原微生物、寄生虫)寄生人体所引起的传染性感染疾病(communicableinfectiousdiseases)和非传染性感染疾病 (non-communicableinfectiousdiseases)。随着现代医学技术的迅猛发展，新的医学诊疗技术的广泛应用，大量老年人群及慢性疾病患者的存在，抗菌素抗生素滥用所导致的细菌变异耐药株的增多，使当今感染性疾病的特点已经发生了一定的变化。因此，了解现代感染性疾病的流行病学，对于完善感染性疾病的实验室诊断，指导临床合理应用抗病原体药物，及时控制感染性疾病的流行具有重要意义。 KKME-专业医学搜索引擎 http:/www.kkme.net/一、流行病学和临床类型 (一)流行病学目前，感染性疾病的流行病学具有下述特点： 疾病谱发生变迁，新传染病陆续被发现，近 20 年来在全球范围内先后发现了 3o 多种新传染病，如嗜肺军团菌(Ligionellapneumohpillia)引起的军团病(Legionnairesdisease)、汉坦病毒(Hantavirus，HV；Hanntaanvirus)引起的汉坦病毒肺综合征(Hantaviruspulmonarysyndrome，HPS)、埃博拉病毒 (Ebolavirus)引起的埃博拉出血热(Ebolahaemorrhagicfever，EBO)、尼巴病毒(Nipah)引起的马来西亚脑炎、朊病毒(prion)引起的牛海绵状脑病(bovinespongiformencephalopathy，BS ；俗称 “疯牛病”)、SARS 冠状病毒(severeficuterespira-torysyndromeassociatedeoronavirus，SARS-CoV)引起的急性重症呼吸道综合征(severeacuterespiratorysyndrome，SARS)等，而已绝迹的老传染病死灰复燃，如梅毒、结核病、霍乱等。 多重耐药株的出现，导致抗感染治疗的困难。 器官移植、抗肿瘤化疗和放疗的开展，减弱了机体的免疫防御功能，造成医院感染及条件性致病菌感染的增加。由于人们对新传染病认识和准备的不足，人群对之尚无免疫力，使感染性疾病传播快、范围广、传播途径多，可造成巨大的经济和社会影响。 (二)临床类型可导致人类感染性疾病的病原体约 500 种以上，包括病毒、衣原体、立克次体、支原体、螺旋体、细菌、真菌和寄生虫等。目前，细菌感染仍然是发病率较高的感染性疾病，病原种类以革兰阴性条件致病菌、凝固酶阴性葡萄球菌、耐甲氧西林葡萄球菌和耐药的白色念珠菌为主。病毒性感染是人群KKME-专业医学搜索引擎 http:/www.kkme.net/发病率最高的感染类型，随着广泛疫苗接种，麻疹、脊髓灰质炎和乙型脑炎等大幅度下降。近年来，随着肿瘤的放射治疗、化学治疗、广谱抗生素以及免疫制剂的广泛应用，使真菌感染的发病率显著增高，在器官移植受者和恶性肿瘤患者中真菌感染的患病率高达2O%4O%，而且往往是致命的感染；在高度免疫抑制的病人中，由不常见的致病真菌引发的感染概率越来越高，而且多为致病真菌的混合感染。 二、检查项目和临床应用 (一) 细菌感染细菌感染性疾病的诊断，除个别因有特殊临床症状不需细菌学诊断外(如破伤风引起的典型肌痉挛等)一般均需进行细菌学诊断以明确病因。然而自标本中分离到细菌并不一定意味该菌为疾病的致病菌，因此应根据病人的临床情况、采集标本的部位、获得的细菌种类进行综合分析。细菌感染性疾病的检查主要可以从三个方面着手： 检测细菌或其抗原主要包括直接涂片显微镜检查、培养、抗原检测与分析。 检测抗体。 检测细菌遗传物质一主要包括基因探针技术和 PCR 技术。上述多种检查手段中，细菌培养是最重要的确诊方法。根据细菌形态、菌落特点、生化反应、血清学鉴定、动物接种等可综合鉴定病原菌。目前，一些微量鉴定系统及自动化细菌培养与鉴定系统已经应用于临床细菌感染性疾病的诊断，大大提高了检查报告的速度与准确性。 (二) 病毒感染病毒是只能在易感细胞内以复制方式进行增殖的非细胞型微生物，因此，其检验程序不同于细菌。病毒感染的实验室检查包括病毒分离与鉴定、病毒核酸与抗原的直接检出，以及特异性抗体的检测。I 临床医师根KKME-专业医学搜索引擎 http:/www.kkme.net/据流行病学资料、患者症状与体征综合判断可能为何种病毒感染，留取适宜的标本送检。分离病毒首先要采集含足量病毒的临床标本，然后接种到敏感动物、鸡胚或培养细胞，使其生长增殖，再加以鉴定。细胞培养是最常用的病毒分离方法，细胞培养液是含血清、葡萄糖、氨基酸、维生素的平衡溶液(pH7274)，并根据宿主细胞对病毒的敏感性和病毒的嗜性来选择适当的组织细胞。病毒的最初鉴定可根据临床症状、流行病学特点、标本来源、易感动物范围、细胞病变特征确定何种病毒。再在此基础上，对已分离的病毒和已知参考血清作中和试验、补体结合试验、血凝抑制试验作最后鉴定。显微镜检查也是病毒实验诊断不可忽视的手段，如光学显微镜检查感染组织或脱落细胞中的特征性病毒包涵体，电镜检查病毒颗粒等，均是早期诊断手段之一。病毒分离鉴定和血清学诊断一般需要较长时间，近年来发展起来的利用核酸杂交技术和 PCR 技术检测标本中病毒核酸，或用免疫荧光标记技术、化学发光技术检测组织细胞内的病毒抗原和胞外游离病毒抗原是一种快速的早期诊断手段，并明显优于显微镜早期诊断手段。 (三)真菌感染真菌是以腐生或寄生方式摄取养料的真核细胞型微生物。真菌的微生物学诊断手段主要包括直接检查、培养检查、免疫学试验和动物试验。由于各种不同真菌一般具有各自的典型菌落形态和形态各异孢子与菌丝，因此，形态学检查是真菌检测的重要手段。真菌能在人工培养基上生长，培养温度 2528，深部真菌 37，但其培养一代时间较长，分离标本孵育至少 4 周，常采用点滴法、不锈钢小培养法，并在显微镜KKME-专业医学搜索引擎 http:/www.kkme.net/下直接观察经培养后菌体在自然位置状态下的形态结构(菌丝和孢子) ，以利于真菌的菌种鉴定。真菌的抗原检测只适合于检测血清中和脑脊液中隐球菌、念珠菌、荚膜组织胞浆菌。真菌的血清学诊断适用于深部真菌感染的标本。基因组核酸电泳核型分析技术、随机引物扩增 DNA 多态性(RAPD)技术、荧光定量 PCR 技术、rDNA 序列测序、核酸杂交技术等是近年来发展起来的可快速诊断真菌感染的新型手段，但这些方法自身还存在一些局限性，且不能帮助判断检测的阳性结果是感染还是定植，在检测过程中易出现假阳性和假阴性等，因此，其结果判读需要结合临床全面分析。 (四) 寄生虫病寄生虫是单细胞或多细胞体，当其侵入宿主后，可在宿主体内寄生、发育而导致感染。寄生虫对人体都是有害的，所引起的感染性疾病统称为寄生虫病。寄生虫实验诊断是诊断寄生虫的主要依据，实验诊断包括病原学诊断、免疫学诊断和其他实验室常规检查。由于每种寄生虫均在其特定的生活阶段以一定方式排离宿主，以求得转换宿主个体而延续宗系，因此，根据寄生虫生活史的特点，从病人的血液、组织液、排泄物、分泌物或活体组织中检查寄生虫的某一发育虫期，这是最可靠的诊断方法，广泛用于各寄生虫病的诊断。但是，病原学诊断方法检出率较低，对轻度感染需要反复检查，以免漏诊；而对于在组织中或器官内寄生而不易取得材料的寄生虫，可考虑采用免疫学诊断方法。免疫学方法诊断寄生虫在临床上广泛应用，除了经典的凝集试验、沉淀试验、补体结合试验等，近几年建立的酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)、KKME-专业医学搜索引擎 http:/www.kkme.net/免疫酶染色试验(immunoenzymicstainingtest，lEST)、免疫印迹试验(immunoblot，Westernblot)、免疫荧光法(immunofluorescentmethod，IF)等使试验的敏感性和特异性大大提高。近年来国内外发展起来的高新技术方法，如 DNA 探针技术和PCR(聚合酶链反应，polymerasechainreaction，PCR)技术为寄生虫病的诊断或寄生虫分类提供新的高敏感的检测方法，有广泛应用前景。(五) 其他病原体感染 1支原体检测支原体是一群介于细菌与病毒之间，可通过滤菌器、无细胞壁，能在无生命培养基中生长繁殖的最小原核微生物。已知有 50 多种，其中 14 种有病原性。与人类疾病有关的是肺炎支原体、唾液支原体、口腔支原体、人型支原体、发酵支原体和微小株支原体。支原体因缺乏细胞壁，呈高度多形性，革兰氏染色不易着色，直接显微镜检测一般无临床意义。分离培养是支原体感染的确诊依据。不同种支原体在培养基中生长速度不一，如解脲脲原体和人型支原体生长较快，利用培养后所见的典型菌落形态可作出初步鉴定，再以特异性抗血清作生物抑制试验或代谢抑制试验即可作出确诊。肺炎支原体和生殖道支原体初次分离较慢，一般需 10 天左右才生长出“荷包蛋”状菌落，故而不适合于临床快速诊断。DNA 探针技术和荧光定量 PCR 技术目前已用于临床实验室的检测。 2螺旋体检测螺旋体是一群细长、柔软、运动活泼、呈螺旋状的微生物。将标本置于暗视野显微镜下检查运动活泼、具有特殊形态的螺旋体具有诊断意义。除钩端螺旋体外，其他螺旋体如梅毒螺旋体、伯氏疏螺旋体、回归热螺旋体等尚不能人工培养，KKME-专业医学搜索引擎 http:/www.kkme.net/因而，血清学诊断广泛应用于临床实验检测。显微镜凝集试验、间接凝集试验、酶联免疫吸附试验检测患者血清中的特异性抗体是常用的血清方法。用性病研究实验室玻片试验(VDRI) 或快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)对梅毒患者血清进行过筛试验，出现阳性者再用荧光密螺旋体抗体吸附试验(FTAABS)或抗梅毒螺旋体微量血凝试验(MHATP)作确诊试验。PCR 检测可快速检测出螺旋体特异核酸片段，目前。已逐步成为常用的检测方法。 3立克次体检测立克次体是一类严格细胞内寄生的原核细胞型微生物，在形态结构、化学组成及代谢方式等方面均与细菌类似：具有细胞壁；以二分裂方式繁殖；含有 RNA 和 DNA 两种核酸；由于酶系统不完整需在活细胞内寄生；对多种抗生素敏感等。立克次体病多数是自然疫源性疾病，且人畜共患。取血液或组织进行立氏立克次体血清学试验，分离培养和鉴定，通过荧光染色从皮肤或其他组织中找到病原体有助于确定诊断。血清学诊断需取 3 份血清标本，即发病第 1 周、第2 周、第 46 周。PCR 通过检测立克次体特异性核酸可进行早期诊断。外斐试验为非特异性血清学诊断试验，用于斑疹伤寒、斑点热和恙虫病的确诊，特异性血清学试验有免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验和补体结合试验等。 4衣原体检测衣原体是不活动的专性细胞内寄生物，有化学上与革兰阴性菌相似的细胞壁，具有核糖体，可出现胞质内包涵体。直接显微镜检查细胞质内的典型包涵体对衣原体感染诊断有参考价值。衣原体的分离培养与病毒培养一样，在鸡胚卵黄囊内生长良好，还可采用动物接种和细胞培养法。过去KKME-专业医学搜索引擎 http:/www.kkme.net/采用传统的组织培养分离衣原体的方法，技术难度大，特异性和敏感性均不理想，且费时费钱。目前应用较多的是荧光标记单克隆抗体的直接荧光抗体法，可快速确定系何种血清型衣原体感染。DNA探针技术和荧光定量 PCR 技术目前已