1降香总黄酮提取工艺的正交设计实验优选【摘要】 目的优选提取降香中总黄酮的最佳工艺。方法采用正交实验设计，以总黄酮提取量为指标，对降香总黄酮提取条件进行优选。结果最佳提取工艺为 10 倍量 70%乙醇在 90提取 3 次，1.5h/次，测得总黄酮平均提取量为 92.13mg，平均含量为 4.61%。结论该提取工艺条件简单、稳定、提取效率高。 【关键词】 降香总黄酮; 正交实验; 提取方法中药降香是豆科植物降香檀 Dalbergia odorifera T.Chen 的树干和根的干燥心材。降香的功效为行气活血，止痛，止血，用于治疗脘腹疼痛，肝郁胁痛，胸痹刺痛，跌扑损伤，外伤出血1。降香的主要成分为挥发油和黄酮类化合物，其中，降香檀药材中总黄酮的含量为 2.51%5.82%2。黄酮类化合物具有抗炎、镇痛、抗氧化、中枢神经作用及心血管方面的作用3。本课题组对降香进行了系统研究，建立了一个适合降香总黄酮的含量测定方法4。本文应用该含量测定方法，以降香总黄酮提取量为考察指标，通过正交设计实验进行工艺优化，对提取总黄酮的条件和影响因素进行了探讨，为降香总黄酮的提取工艺提供了科学依据。1 仪器与材料21.1 仪器 UV-2450 紫外可见分光光度仪 (SHIMADZU)，电子分析天平(BP211D)，HH-4 型恒温水浴锅(江苏省金坛市宏华仪器厂)， RE 52-98 型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)。1.2 试剂乙醇(分析纯，汕头市西陇化工厂)，甲醇钠(新制)。1.3 药材和对照品降香药材( 广州市药材公司中药饮片厂，产地海南)，柚皮素对照品( 实验室自制，经 UV、1H-NMR 鉴定结构，HPLC 检测计算，纯度大于 98%)。2 方法2.1 降香总黄酮含量测定方法及工作曲线的确定精密称取柚皮素对照品 0.001 43 g，用 70%乙醇溶解并定容至 50 ml 备用。分别精密吸取对照品溶液0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00，6.00 ml 于 10 ml 容量瓶内，准确加入 1 ml 甲醇钠，用 70%乙醇定容至刻度，摇匀，放置40 min，在 410 nm 处测定其吸光度。计算得回归方程为 Y=3.242 2X-0.019 3，r=0.999 8，线性范围是 0.014 30.085 9 mg。2.2 正交实验设计根据影响总黄酮的提取因素，在预试验的3基础上，选取提取时间(A)，提取次数(B)，提取温度(C) ，乙醇浓度(D)作为考察因素，每个因素设定 3 个水平，以总黄酮提取量为考察指标，采用 L9(34)表安排正交实验。结果见表 1。表 1 正交实验因素和水平2.3 样品溶液的提取及含量测定将干燥的降香药材粉碎，精密称量 2 g/份，按照 L9(34)正交实验表的工艺条件加入 10 倍量乙醇进行回流提取。提取液合并蒸干后用 70%乙醇定容至 25 ml，取1 ml 各提取液稀释至 10 ml，再取 1 ml 稀释液按对照品测定方法测量其吸光度并计算总黄酮提取量。结果见表 2。表 1 L9(34)正交实验设计和结果2.4 方差分析上述实验所用正交表无空白列作对照，所以将离差平方和中最小的项来近似作为误差的估计，用于计算各因子列的 F 比值5，本实验采用“提取时间(因素 A)”项作为误差来源项，对表 2 的总黄酮含量进行方差分析。结果见表 3。表 3 方差分析2.5 最佳提取工艺的验证精密称取 3 份降香粉末各 2 g，按最佳提取工艺条件平行操作，提取液定容至 25 ml，按“2.3” 项下方法测定吸光度并计算总黄酮提取量和提取率。结果见表 4。表 4 最佳提取工艺验证3 结果4本实验得出的最佳提取工艺为 10 倍量 70%乙醇在 90提取3 次，1.5 h/次，测得总黄酮平均提取量为 92.13 mg，平均含量为4.61%。该提取工艺具有稳定性好、黄酮得率高、操作简单且成本较低的特点。4 讨论实验先用石油醚索氏提取除去部分脂溶性杂质，再用乙醇提取总黄酮。发现是否使用石油醚脱脂对总黄酮含量测定结果影响不大，故省去石油醚脱脂而直接使用乙醇提取。正交实验前考察了乙醇用量对于总黄酮提取量的影响，采用5，8 ，10 ，15 ，20 倍量乙醇进行提取，实验结果表明乙醇用量超过 10 倍以上则总黄酮提取量无显著性差别，故以 10 倍量乙醇进行提取。【参考文献】1 国家药典委员会 .中国药典，部S.北京：化学工业出版社,2005:158.2 肖省娥，林 励.不同来源的降香药材中总黄酮含量测定 J.基5层中药杂志,2000,14(6):12.3 Zhao Q,Guo J,Zhang Y.Chemical and pharmacological research progress of Chinese drug “JiangXiang”(Lignum Dalbergiae Odoriferae)J.Journal of Chinese pharmaceutical sciences,2000,9(1):1.4 郭丽冰，王 蕾. 降香总黄酮含量测定方法的研究J.中药材,2008,31(5):68.5 于立芬 .数理统计方法M.上海:上海科学技术出版社,1985: 173.