实验二槐花米中芸香苷的提取及槲皮素的制备与检识目的要求学习和掌握芸香苷的提取及检测 技术学会利用芸香苷的水解作用制备 糖类及苷元实验原理芸香苷俗称芦丁。广泛存在于植物界中，现 已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为 植物槐树的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高， 可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由槲皮素（Quercetin）3位上的羟基 与芸香糖脱水缩合形成的苷。芸香糖（Rutinose ）为葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖。 实验原理纯品为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三 分子的结晶水，熔点为 174-178。微溶于水， 易溶于醋酸乙酯等, 不溶于丙酮、乙醚、氯仿、石 油醚，溶于碱而呈黄色。 实验原理芦丁具有维生素P样作用。有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性，主要用作防治高血压病的辅助治疗（但不能降压）剂 ，亦可防治因缺芦丁所致的其它出血症。 多作口服，也可作注射用。实验原理提取芦丁的方法很多，目前我国多采 用碱提取- 酸沉淀法。该法的提取原理是依据芦丁结构中含有酚羟基，能与碱反应生 成盐而溶于水中，向此盐溶液中加入酸， 则芦丁游离析出。此外，还可以采用水或 醇提取法。芸香苷的提取 方法：水提取法 槐花米粗粉20g 加10倍量沸水煮沸20min，反复2 次，趁热脱脂棉滤过 药渣 滤液 静置过夜，滤过 滤液 芸香苷粗品 方法 ：碱溶酸沉法 芸香苷的提取 （粗提）槐花米粗粉20g 加0.4硼砂水200ml，石灰乳调pH89 煮沸30min，趁热抽滤或4层纱布过滤 滤液 药渣 放冷至6070，浓盐酸调 pH23，冰箱中析晶，抽滤 滤液 沉淀 室温下晾干 芸香苷粗品 芸香苷粗品2g 加蒸馏水400ml，煮沸 溶解15min趁热抽滤 滤液 药渣 滤液 静置析晶，抽滤 结晶 精制芸香苷 室温下晾干芸香苷的提取（精制） 槲皮素精制品 精制芸香苷 加2硫酸50ml，加热回流40min，至沉 淀不再增加为止，放冷抽滤 沉淀 滤液 用少量水洗去余酸，晾干 加氢氧化钡中和至中性，滤过 槲皮素粗品 硫酸钡沉淀 滤液 95乙醇 重结晶 浓缩至干，加2 3ml乙醇溶解 糖供试液 芸香苷的水解芸香苷、槲皮素及糖的检识 实验名称 实验试剂 现象芸香苷 槲皮素Molish反应 10%-萘酚乙醇 紫色环 无现象溶液-浓硫酸 盐酸-镁粉反应 盐酸-镁粉 红色紫红色醋酸镁反应 1醋酸镁甲醇 黄色荧光（紫外灯）溶液（滤纸）三氯化铝反应 1三氯化铝乙 黄色荧光醇溶液（紫外灯） 锆-柠檬酸反应 2二氯氧锆甲醇溶液 黄色并 黄色2柠檬酸甲醇溶液34滴 褪色 不褪色芸香苷、槲皮素及糖的检识 1、酸性试验：取小试管8支，每4支一组，第一组每管中加 入芸香苷1mg，第二组每管中加入槲皮素1mg，每 组四管中分别加入稀氨水、5%碳酸氢钠水溶液、 5%碳酸钠水溶液、1%氢氧化钠水溶液各2 ml，振摇后观察各管溶解情况。溶解的溶液应呈黄色 。再加浓盐酸数滴酸化，黄色褪去或变浅，并有 沉淀析出或产生混浊。芸香苷、槲皮素及糖的检识 2、Molish反应：取试样1 mg置小试管中，加乙醇0.5 ml溶解，加- 萘酚试剂12滴，摇匀。倾斜试管，沿管壁徐徐注 入浓硫酸约0.5 ml静置。观察两层溶液的界面变化，出现紫色环者为阳性，表示样品分子中含有糖 的结构（糖和苷类均呈阳性反应），比较芸香苷 和槲皮素的不同。芸香苷、槲皮素及糖的检识 3、盐酸-镁粉反应：取芸香苷1 mg，加乙醇2 ml，在水浴上加热 溶解，加镁粉约50 mg，滴加数滴浓盐酸，溶液由黄色渐变红色者表示有黄酮类化合物。以同法试 验槲皮素。如用锌粉代替镁粉，则芸香苷（3-羟基与糖结合成苷）仍有作用，而槲皮素（黄酮醇类）不呈 还原显色反应。因此可区别两者。芸香苷、槲皮素及糖的检识 4、三氯化铝反应：取样品1 mg溶于甲醇中，加1%三氯化铝甲醇溶液 23滴，黄酮类呈鲜黄色，并有荧光。5、锆-柠檬酸反应：取样品1 mg，加甲醇2 ml，在水浴上加热溶解， 再加2%二氯氧锆甲醇溶液34滴，凡有3-羟基或5 -羟基的黄酮即呈鲜黄色。然后加2%柠檬酸甲醇 溶液34滴，有3-羟基的黄酮黄色不褪。比较芸香苷和槲皮素的不同。芸香苷、槲皮素及糖的检识 6、Fehling试验：取试样数mg，溶于0.5 ml热水中，加斐林氏试剂 甲、乙等量混合液2 ml，沸水浴上加热，如产生氧化亚铜的暗红色或黄色沉淀表示有还原糖或其 它还原性物质。充分加热作用后滤去沉淀，滤液 滴加浓盐酸酸化，在水浴上加热水解，水解液以 10% NaOH 中和，再进行斐林氏试验，此时显阳性反应者表示样品为糖苷化合物。比较芸香苷和 槲皮素的不同。注意事项1在提取前应将槐花米略捣碎，使芸香苷易于被热水溶出。 2在提取过程中，加入硼砂的目的是使其与芸香苷分子中的邻二酚羟基发生络合，既 保护了邻二酚羟基不被氧化破坏，又避免了邻 二酚羟基与钙离子络合（芸香苷的钙络合物不 溶于水），使芸香苷不受损失，提高收得率。 1、计算芦丁的得率2、计算槲皮素的得率3、记录芦丁的检测结果实验结果3本实验直接用沸水由槐花米中提取芸香苷，收得率稳定，且操作简便。如用碱溶酸 沉法提取，加入石灰乳可以达到碱性溶解的目 的，又可除去槐花7米中所含的大量粘液质， 但应严格控制其碱性pH89，不可超过pH10。 如pH值过高，加热提取过程中芸香苷可被水解 破坏，降低收得率。加酸沉淀时，控制pH3 4,不宜过低，否则芸香苷可生成yang盐而溶于 水，也降低收得率。 注意事项1、苷类水解有几种催化方法？2、黄酮类化合物还有哪些提取方法？芸香苷的提取还可用什么方法？3、酸水解常用什么酸？为什么用硫酸比用盐酸水解后处理更方便？思 考