1霉茶总黄酮在大鼠体内的药代动力学作者：王桂红，刘丹，吴杰，邴飞虹，张国斌，郑国华【摘要 】 目的研究霉茶总黄酮在大鼠体内的药代动力学。方法以蛇葡萄素为指标，高效液相色谱法(HPLC)测定给药后大鼠血清中蛇葡萄素的浓度。结果大鼠灌胃 0.5 h 后血清中即可检测出蛇葡萄素，霉茶总黄酮在大鼠体内呈一室模型分布，且药物在高、中、低剂量时的药物浓度变化比较一致。结论 HPLC 法适用于测定大鼠体内霉茶总黄酮血药浓度，总黄酮在大鼠体内吸收很快，浓度对药物的体内代谢行为没有明显影响。 【关键词】 霉茶总黄酮； 蛇葡萄素； 药代动力学； 大鼠； 高效液相色谱法霉茶系葡萄科蛇葡萄属植物大叶蛇葡萄Ampelopsis.megalophylla Diels et. Gilg 的枝叶加工而成，其主要活性成分为霉茶总黄酮，临床上用于降血压、降血脂1 。有关霉茶总黄酮的药代动力学研究报道较少，为了进一步了解霉茶总黄酮的降压机制，本实验对霉茶总黄酮在大鼠体内的药代动力学进行了研究。21 材料与仪器1.1 药品与试剂霉茶总黄酮、蛇葡萄素对照品（自制） ，乙腈(色谱纯)，霉茶总黄酮用 4% CMC-Na 溶液加热溶解成所需浓度。1.2 动物SD 大鼠，体重 200250 g，雌雄各半，由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供，许可证号：SCXY（鄂）2004-00070。室温 1820，实验期间饲以该中心提供的固体饲料，自由饮水。1.3 仪器LG16-W 型离心机（北京医用离心机厂） ；XW-80A 旋涡混合器（上海医科大学仪器厂） ；Agilent-1100 系列高效液相色谱仪（四元泵） 、紫外检测器及配套色谱工作站；Mettler-Toledo AG285 型分析天平。2 方法32.1 色谱条件色谱柱为 Aichrom Bond-AQ C18（5 m，4.6 mm250 mm） ； YWG-C18 保护柱，检测波长为 292 nm，流动相为乙腈-0.2%磷酸水（ 2575） ，流速为 1.0 mlmin-1；柱温：30 ；进样量：5 l。2.2 血液样品的制备与处理 2取 36 只大鼠，禁食过夜，随机分为霉茶总黄酮高、中、低3 个剂量组（灌胃剂量分别为：360 ，180，90 mgkg-1） ，每只大鼠取 6 个时间点、3 个平行，单次灌胃给药后分别于0.5，1.0，1.5，2.0，3.0 ，4.0 ，5.0，6.0，7.0 ，8.0，10.0，12.0 h 眶静脉取血 0.5 ml，4 000 rmin-1 离心 10 min，分离出血浆，定量吸取血浆 0.2 ml，加 0.6 ml 乙腈沉淀蛋白，涡流混旋 10 min，4 000 rmin-1 离心 10 min，取上清液，滤膜滤过 (0.45 m)，进样 5 l，以峰面积进行定量。2.3 对照品系列溶液的制备分别精密称取蛇葡萄素对照品适量，以甲醇溶解并稀释至刻4度配制成不同浓度的对照品储备液（1 200， 800， 600，400，200 gml-1） ，4保存备用。精密吸取蛇葡萄素对照品储备液适量，加甲醇定容，梯度稀释为800， 200， 120，80，40，8，4 gml-1 的对照品溶液。2.4 对照品系列模拟血浆样品的制备分别精密吸取上述稀释的系列对照品溶液各 0.1 ml，然后用大鼠空白血浆分别定容至 1 ml，使血浆浓度分别为80，20，12，8，4，0.8，0.4gml-1 的对照品溶液。2.5 数据处理 药物代谢动力学参数由 MCPKP 软件计算3 。3 结果3.1 标准曲线的建立含药血浆按前述“2.2” 项下方法进行操作，分别进样0.002，0.004，0.02，0.04，0.06 g，测定并记录蛇葡萄素的峰面积。以进样量为横坐标（X） ，峰面积为纵坐标（Y） ，标准曲线如下：Y= 3 258X- 1.236，R = 0.999 9，线性范围 0.0020.06 g，最低检测限为 0.000 4 gml-1。53.2 方法回收率和精密度的考察按照含药对照品系列溶液配制方法，配制不同浓度的血浆对照品溶液，依次为 12，8，4gml-1。然后按照 “2.2”项下同法操作，精密进样 5 l，记录蛇葡萄素的峰面积。按照外标法，代入线性方程计算蛇葡萄素的血浆药物浓度，计算所得浓度与实际浓度的比值，并计算日内精密度。方法的回收率分别为：91.83%，93.75%，86.25%，日内精密度为：7.56%，6.40%，5.68%。连续 3 d 测定上述浓度样品，结果日间精密度为：8.02%，7.08%，6.72%。符合生物样品中药物定量分析研究的方法学要求。3.3 稳定性实验取与回收率实验用同样血浆对照品溶液 9 份，浓度为 12，8，4 gml-1，每个浓度 3 个平行。按照血液样品制备方法预处理后室温放置 4 h，24 h 和经 3，5，7 d 3 次冷冻-解冻循环后蛇葡萄素的稳定性，RSD 分别为：1.97%，2.90%，2.60% 。不同浓度的含药血浆样品在放置 7 d 之内 RSD3%，表明样品在 7 d 内基本稳定。63.4 蛇葡萄素的血药浓度测定霉茶总黄酮高、中、低剂量组大鼠体内的蛇葡萄素血药浓度均在 1.52.5 h 达高峰， 2.5 h 后开始下降。血药浓度-时间数据由MCPKP 软件处理，各项动力学参数见表 1，血药浓度变化见图 1。表 1 药动学参数（略）4 讨论霉茶总黄酮的体内药物代谢符合一室模型。药物在高、中、低剂量时的药物浓度变化比较一致。整个药物的体内代谢符合一室模型，且药物均有一定的肝肠循环，在体内的生物半衰期时间为4.55.5 h 左右，血药浓度较快到达最大值，但是会持续一个时间段，可能与蛇葡萄素的结构有相关性。对于大部分的黄酮类化合物，肝脏和消化道是药物代谢的主要场所，药物在胃肠道内即发生代谢、吸收，进入体内的是其代谢产物而非原形成分4 。据文献报道5 ，小鼠灌胃给药 180 mgkg-1，血清中仅有痕量蛇葡萄素。本实验在霉茶总黄酮最大耐受量6范围内按 360，180，90 mgkg-1 给药，0.5 h 后即可检测出蛇葡萄素，与以往报道不同。至于霉茶总黄酮在大鼠胃肠道内是否完全代谢分解，有待进一步研究。7【参考文献】1陈晓军. 显齿蛇葡萄总黄酮降脂作用的研究J.广西中药, 2001,24(5):53.2马小林, 李英伦, 崔恒敏, 等. 盐酸左氧氟沙星在前列腺炎大鼠体内的药代动力学研究J. 时珍国医国药 ,2008,19(6):1329.3夏文江, 成章瑞. MCPKP 药物动力学室分析的一种微机程序J. 中国药理学报, 1988,9(2) :188. 4李卫中, 马 燕. 黄酮类化合物药物动力学的研究进展J. 现代食品与药品杂志, 2007,17(1) :19.5罗 曼, 刘德育. 高效液相色谱法测定小鼠血清中蛇葡萄素及药动学J. 中国医院药学杂志, 2003, 23(8):471.6钟正贤, 覃洁萍, 周桂芬, 等 .广西藤茶总黄酮保肝作用的实验研究J. 广西科学, 2002,9(1): 57, 63.