1青皮及醋青皮饮片质量标准研究作者：李先端，顾雪竹，马志静，程立平，朱景宁，林淑芳, 毛淑杰【摘要 】 目的研究建立青皮、醋青皮饮片质量标准。方法采用高效液相色谱法测定青皮炮制品中 4 种成分。结果对青皮饮片的质量作了系统的研究，包括鉴别、检查、含量测定等。结论该研究系统、规范，数据准确、可靠，方法稳定、简单，可为国家制定青皮、醋青皮饮片质量标准提供科学依据。 【关键词】 醋青皮； 橙皮苷； 辛弗林； N-甲基酪胺青皮为橘 Citrus reticulata Blanco 及其栽培变种的幼果或未成熟的果皮，具有疏肝理气、消积化滞的功效。用于治疗肝气郁滞之肝郁胸胁胀痛、乳房胀痛、寒疝疼痛、食积气滞、胃脘胀痛及癥瘕积聚等。青皮中主要含有挥发油和黄酮类成分，其中挥发油中主要含有右旋柠檬烯、芳樟醇、月桂烯、-蒎烯等；黄酮类成分中有橙皮苷、柚皮苷、柚皮芸香苷等，另还含有辛弗林等成分。橙皮苷是青皮中的主要有效成分，辛弗林是青皮升压的有效成分。目前对青皮饮片的质量标准研究未见有详细报道。2005 年版中国药典仅收载了青皮药材的薄层鉴别及高效液相法测定橙皮苷含量，但醋2青皮饮片质量标准没有规定。同时我们在按药典法测定橙皮苷时，发现样品中成分提取不够完全，因此，对青皮饮片的质量作了系统的研究，并对 HPLC 法测定橙皮苷等进行了详细的方法学研究，对药典法进行了改进，以期为制定青皮、醋青皮饮片质量标准提供科学依据。现报道如下。1 材料1.1 原材料购买个青皮，产地为浙江杭州、湖北宜昌、湖北及市售品；四花青皮，产地为四川、浙江、江西、福建，经鉴定为芸香科植物橘 Citrus reticulata Blanco 及其栽培变种的干燥幼果或未成熟果实的果皮。1.2 炮制辅料米醋，恒立牌镇江米醋，镇江市润州区恒运酱醋厂出品，总酸度为 3.5%。1.3 炮制品制备1.3.1 药典法炮制品制备取青皮片或丝，以每 100 kg 加醋15 kg 的比例拌匀，闷透，置锅内，炒至微黄色，取出，放凉。1.3.2 本研究新法炮制品制备（中试样品）3净制：将个青皮、四花青皮挑去发霉、破瓣杂质等不合格药材。切制：将净四花青皮药材放入洗药机内，用慢速洗 2 min 左右，放入筐内闷润，其间再用水冲 13 次，闷 1 h 后切 2 mm 左右丝。个青皮：取净个青皮放洗药机内慢速洗涤，取出放筐内闷润 4 h左右，其间用水冲 3 4 次，然后切 23 mm 厚片。醋炒青皮：将个青皮片和四花青皮丝分别称重，加 15%米醋拌匀，闷 710 min 左右。四花青皮以投药底锅温 140左右炒 10 min。个青皮以投药底锅温 145150分别炒 10 min 左右，出锅，阴凉处晾晒。以上样品均放通风处阴干。1.4 仪器及试剂惠普 1100 单泵高效液相色谱仪，Waters600 单泵高效液相色谱仪。橙皮苷、辛弗林、N-甲基酪胺（中国药品生物制品检定所提供） ，硅胶 G（自制） ，甲醇为色谱纯及分析纯，其他试剂均为分析纯。42 方法与结果2.1 青皮饮片性状研究2.1.1 青皮药材个青皮：呈类球形，直径 0.52 cm。表面灰绿色或黑绿色，微粗糙，有细密凹下的油室，顶端有稍凸起的柱基，基部有圆形果柄痕。质硬，断面果皮黄白色或淡黄棕色，厚 12 mm，外缘有油室 12 列。瓣囊 810 瓣，淡棕色。气清香，味酸、苦、辛。四花青皮：果皮剖成 4 裂片，裂片长椭圆形，长 46 cm，厚12 mm。外表面灰绿色或黑绿色，密生多数油室；内表面类白色或黄白色，粗糙，附黄白色或黄棕色小筋络。质稍硬，易折断，断面外缘有油室 12 列。气香，味苦、辛。2.1.2 青皮饮片性状生四花青皮丝：类半圆形薄片或成规则丝状。表面黄白色或淡黄棕色，外缘有油室 1 2 列。外表面灰绿色或黑绿色。气清香，味苦、辛。5生个青皮片：个青皮饮片多为直径 0.52 cm 环形薄片，表面黄白色，外缘有油室 12 列，可见瓤囊，周边灰绿色或黑绿色。气清香，味酸苦、辛。2.1.3 醋青皮形如青皮丝或片，色泽加深，微有醋气。2.2 粉末显微特征2.2.1 青皮饮片粉末淡灰棕色。中果皮薄壁组织众多，细胞形状不规则，壁稍增厚，有的作连珠状。果皮表皮细胞表面观多角形或类方形，垂周壁增厚，气孔长圆形，直径 2028 m，副卫细胞 57 个；侧面观外被角质层，靠外方的径向壁稍厚。草酸钙方晶存在于近表皮的薄壁细胞中，呈多面形、菱形或方形，直径828 m，长 2432 m。橙皮苷结晶棕黄色，呈半圆形、类圆或无定形团块。螺纹、网纹导管细小。其中个青皮果皮表皮细胞壁较薄。2.2.2 醋青皮与生品差异在于部分表皮细胞壁呈棕色。显微特征图省略。2.3 薄层鉴别取个青皮、四花青皮生品、炮制品粉末各 0.3 g（大生产 10 批样品） ，加甲醇 10 ml，超声 20 min，滤过，取滤6液 5 ml，浓缩至约 1 ml，作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液 2 l，对照品溶液 10 l，点于同一用 0.5氢氧化钠溶液制备的硅胶 G 薄层板上，以醋酸乙酯 甲醇 水（1001713）为展开剂，展至约 3 cm，取出，晾干，再以甲苯醋酸乙酯 甲酸 水（201011）的上层溶液为展开剂，展至约 8 cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，至紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图12 。2.4 检查2.4.1 水分测定按 2000 年中国药典附录 IX H53 页。测定青皮生品、炮制品结果见表 12。2.4.2 总灰分及酸不溶性灰分测定按 2000 年中国药典附录 IX J54 页。总灰分测定、酸不溶性灰分测定结果见表 12。2.4.3 浸出物测定7按 2000 年中国药典附录 XA 63 页。测定结果见表12 。表 1 个、四花青皮生品中总灰分、酸不溶性灰分、水分、浸出物含量（略）表 2 醋个、四花青皮中试品中总灰分、酸不溶性灰分、水分、浸出物含量测定（略）2.4.4 重金属及农药残留测定重金属测定，农药残留量测定，微生物检查由北京谱尼理化分析测试中心测试，方法略。结果见表3。表 3 醋个、四花青皮中试品中重金属、农药残留量、微生物测定（略）2.5 含量测定橙皮苷测定方法见文献1 ；辛弗林和 N-甲基酪胺测定方法见文献2 。2.5.1 高效液相色谱条件色谱柱：填料为 Kromasil-C18，5 m，4.6 mm250 mm（北京分析仪器厂填装） ；橙皮苷 流动相：甲醇-水-醋酸乙酯（35612 ） ；柱温 35；检测波长 284 nm；流速 1.0 ml/min。辛弗林 N-甲基酪胺 流动相：甲醇- 水-十二 烷基硫酸钠（55450.1） ；检测波长 275 nm；流速 1.0 ml/min。2.5.2 对照品溶液的制备橙皮苷 精密称取橙皮苷对照品 2.57 8mg，置于 25 ml 容量瓶中。精密量取 3 ml 置 10 ml 容量瓶中，50%甲醇定容，备用。辛弗林、N 甲基酪胺 取对照品适量，加 30%甲醇，配成辛弗林、N-甲基酪胺浓度均为 0.02 mg/ml，备用。2.5.3 供试品溶液制备橙皮苷 ：取不同产地，不同品种青皮样品粉末(过 80 目)约 30 mg，精密称定，置 50 ml 锥形瓶中，精密加甲醇 25 ml，超声处理 30 min。放冷，过滤，精密量取续滤液3 ml，置于 10 ml 容量瓶中， 50%甲醇稀释至刻度，摇匀，用微膜（0.45 m）滤过。测量不同产地青皮生品、炮制品中橙皮苷的含量。辛弗林、N- 甲基酪胺 ：取样品约 0.1 g，精密称定。准确加30%的甲醇溶液 25 ml，称定，超声 30 min，补至原重，混匀，过滤（0.45 m） ，取续滤液即得。2.5.4 测定分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各 20 l 注入液相色谱仪，测定峰面积，计算含量，测定结果见表 45 。表 4 中试青皮生饮片中各成分的含量（略）9表 5 中试醋青皮中各成分的含量（略）3 讨论青皮炮制前后在饮片性状和粉末显微特征方面的主要区别在于，炮制后醋青皮饮片色泽加深，呈微黄色，有焦斑，并微有醋香。炮制后醋青皮粉末颜色较生品加深，呈灰棕褐色，部分表皮细胞壁呈棕色。四花青皮与个青皮饮片差异在于，个青皮饮片可见瓤囊（心皮室隔组织） ；显微镜观察粉末个青皮果皮表皮细胞壁较薄。四个成分含量测定表明，青皮醋制品中挥发油比生品下降 10%左右，其它成分，生制品含量基本变化不大。本研究新建立的两个成分含测方法，具简便、准确、重复性好的特点，可为制定青皮、醋青皮质量标准提供依据。【参考文献】1李先端，顾雪竹，林 生，等. HPLC 测定青皮生品及炮制品中橙皮苷的含量J.中成药，2004，26（9）：724.102李先端，马志静，林 生，等.高效液相色谱法测定青皮中辛弗林和 N-甲基酪胺的含量J . 中国中药杂志，2004，29 （ 6）：537.