第七章 免疫学诊断与预防第一节 免疫诊断 一、抗原与抗体的检测二、淋巴细胞的测定三、诊断方法的应用第二节 免疫防治一、免疫学预防二、免疫学治疗第一节 免疫诊断一、抗原与抗体的检测1、抗原抗体反应的特点：特异性可逆性比例性阶段性一、体外免疫学检测1、抗原抗体反应的特点：特异性、可逆性、比例要适宜抗体过剩比例适当抗原过剩抗原抗体的比例与其形成免疫复合物大小的关系2、常见检测法（1）凝集反应间接凝集和间接凝集抑制试验（2）沉淀反应单向琼脂扩散试验双向琼脂扩散试验对流免疫电泳 -+（3）补体结合反应补体结合反应（4）免疫标记技术免疫荧光直接法免疫荧光间接法a、免疫荧光技术b、免疫酶技术1、包被抗体洗2、加抗原洗3、加酶标抗体洗4、加底物显色1、包被抗原洗2、加抗体洗 3、加酶标抗球蛋白洗4、加底物显色ELISA双抗体夹心法ELISA间接法C 放射免疫测定法（RIA）放射免疫测定法（RIA）是将放射性核素分析的灵敏性 和抗原抗体反应的特异性结合的测定技术。具有灵敏、精确 、特异性高、易规范化及自动化等优点的一种先进的免疫标 记技术。D：免疫印迹法：Western印迹法(1)外周血单个核细胞的分离l采用葡聚糖泛影葡胺（分离液）密度梯度离心法（二）淋巴细胞检测一、淋巴细胞的类别鉴定(2) 淋巴细胞亚群的分离l尼龙棉分离法lE花环分离法l洗淘法l流式细胞术是一种在功能水平上对单细胞或其他生物 粒子进行定量分析和分选的检测手段，它可以高 速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得 多个参数，与传统的荧光镜检查相比，具有速度 快、精度高、准确性好等优点，成为当代最先进 的细胞定量分析技术。l磁分离技术流式细胞仪的工作原理 光学系统激光光源光收集系统 液流系统流动室液流驱动系统 电子系统光电转换数据处理系统 细胞分选系统二、淋巴细胞的功能测定T细胞功能测定增殖试验3HTdR掺入法MTT法细胞毒试验皮肤试验以特异性抗原或有丝分裂原注入皮内，剌激体 内致敏T细胞分化增殖，释放淋巴因子，引起局 部皮肤的IV型超敏反应淋巴细胞转化试验T 细胞在体外培养时，受到非特异性有丝分裂原(如PHA、 ConA)或特异性抗原刺激后，可出现代谢旺盛、蛋白质和核酸 合成增加、细胞体积增大并能进行分裂的淋巴母细胞，此称为 淋巴细胞转化现象。淋巴细胞转化率的高低，可以反映机体的细胞免疫水平，因 此，可作为测定机体免疫功能的指标之一。正常值6080。 B细胞功能检测l抗体形成细胞的测定溶血空斑试验溶血空斑实验是体外检测单个抗体形成细胞 （B淋巴细胞）的一种方法，即将经绵羊红细胞 （SRBC）免疫过的家兔淋巴结或小鼠脾脏制成细 胞悬液，与一定量的SRBC结合，于37作用下， 免疫活性淋巴细胞能释放出溶血素，在补体的参 与下，使抗体形成细胞周围的SRBC溶解，从而在 每一个抗体形成细胞周围，形成肉眼可见的溶血 空斑。每个空斑表示一个抗体形成细胞，空斑大 小表示抗体生成细胞产生抗体的多少。该试验可 检测机体产生抗体的能力。免疫诊断方法的应用一、疾病诊断1、感染性疾病 各种病原体感染后，体内能检出特异 抗体或抗原，因此抗原抗体反应广泛用于感染的确定、 传染病的诊断、传染后免疫力的确定等。2、免疫缺陷病 免疫细胞的鉴定、计数以及功能试验 可帮助免疫细胞缺陷的诊断。3、肿瘤，自身免疫疾病 二、免疫学监测 感染性疾病的免疫学监测有助于疾病的 转归与预后判定，如监测乙型肝炎病毒抗原与抗体的消 长有助于乙型肝炎的预后判定，HIV感染者的CD4细胞 计数有助于艾滋病的诊断、病情分析、疗效判定。第二节 免疫学防治免疫学防治是使用免疫学的方法，借助生物 制品的作用，增强机体免疫功能，从而达到 防治疾病的目的。 人工自动（主动）免疫 （疫苗、类毒素）人工被动免疫 （抗毒素、丙种球蛋白等）免疫预防免疫治疗免疫增强疗法免疫抑制疗法免疫防治一、 人工自动免疫人工自动免疫：是给机体输入疫苗或类毒素等抗原物质，剌激机体产生特异性免疫力。死疫苗：用物理或化学的方法将病原微生 物杀死制备而成的制剂。又称灭活疫苗。 活疫苗：用人工变异或从自然界筛选获得 的减毒或无毒的活的病原微生物制成的制 剂。又称减毒活疫苗。 新型疫苗：亚单位疫苗、合成疫苗、基因 工程疫苗1、疫苗死疫苗和活疫苗的比较区别点 死疫苗 活疫苗制剂特点死、强毒株活、弱毒或无毒接种剂量及次数较多，2-3次较少，1次副作用较大较小保存及有效期易保存，1年不易保存4数周免疫效果较差，维持数月至 2年较好，维持3-5年或 更长（1）亚单位疫苗（Subunit Vaccine） 是去除病原体中与激发保护性免疫无关的甚至有害的成分， 保留有效免疫原成分制作的疫苗。 优点：免疫效果高， 不良反应少 （2）合成肽疫苗 (synthetic peptide vaccine) 将具有保护性免疫力的人工合成肽与适当载体结合后，再加入 佐剂制成的疫苗。乙肝病毒多肽疫苗（3）基因工程疫苗DNA 疫苗（DNA Vaccine）是用编码病原体有效免疫原的基因与细菌质粒构建的重组体 直接免疫机体，转染宿主细胞，使其表达保护性抗原，从而 诱导机体产生特异性免疫的疫苗 优点：体内可持续表达，免疫效果好，维持时间长。 缺点：其机制和安全性尚不完全清楚，一些问题有待解决。新型疫苗我国推行的儿童基础免疫程序年 龄 疫 苗 年 龄 疫 苗出生时卡介苗、乙肝疫苗8个月麻疹疫苗2个月三价脊髓灰质炎疫苗11.5-2岁百白破43个月三价脊髓灰质炎疫苗2， 百白破14岁三价脊髓灰质炎疫苗44个月三价脊髓灰质炎疫苗3， 百白破27岁卡介苗、麻疹疫苗、白 破二联疫苗5个月百白破312岁卡介苗（农村）2、类毒素（Toxid）l细菌外毒素经0.3-0.4%甲醛处理，使其毒 性减弱而保留其免疫原性。白百破：白喉类毒素+ 百日咳杆菌死疫苗 +破伤风类毒素人工被动免疫：是给机体输入抗体或细胞因子，使机体获得 特异性免疫力。可立即获得，但免疫维持时间短，2-3周，多用 于治疗或紧急预防。1、抗毒素：是抗细菌外毒素的抗体。多为马血清 制剂，具有抗体性和免疫原性。2、胎盘球蛋白和血浆丙种球蛋白分别由健康产妇胎盘血和正常人血浆中提取的丙种 球蛋白制成的生物制品3、抗菌血清或抗病毒血清：来源于恢复期病人及含高价特异性抗体供血者血浆， 或免疫动物血清。4、细胞免疫制剂（干扰素、转移因子)二、人工被动免疫人工自动免疫和人工被动免疫的比较项 目 人工自动免疫 人工被动免疫输入物质抗原抗体产生免疫力时间慢（2-3周）快（输注即生效）免疫力维持时间数月至数年2-3周主要用途预防治疗或紧急预防针对机体低下或亢进的免疫状态，人为地增强或 抑制 机体的免疫功能以达到治疗疾病的治疗方法。 常使用免疫增强剂和免疫抑制剂等生物制品来进行治 疗。 、免疫增强疗法 主要用于治疗感染、肿瘤、免疫 缺陷等免疫功能低下的疾病。、免疫抑制疗法 主要用于治疗超敏反应、自身免 疫性疾病、移植排斥、炎症等。 二、免疫学治疗1、免疫增强剂免疫增强剂（IPA）：是增强、促进和调节机体 免疫功能的生物或非生物制剂。主要用于恶性肿 瘤、免疫缺陷病和传染病的辅助治疗。 抗体，分子疫苗 细胞因子：IL2，干扰素 生物应答调节剂：能促进或调节免疫功能的生物制剂转移因子：存在于人和动物白细胞中的可透析小分子物质 ,能将供 体所具有的细胞免疫功能转移给受体 ,从而提高 受体的免疫功能。TF属多肽类物质卡介苗胸腺肽真菌多糖 中草药免疫抑制剂：是一类抑制机体免疫功能的生物或非生物制剂。 主要用于预防移植排斥反应和自身免疫疾病的治疗。常见免疫抑制剂种类分 类 举 例抗生素环孢霉素A、FK-506单克隆抗体制剂抗TC及亚群、抗MHC、抗IL和IL受体激素糖皮质激素烷化剂环磷酰胺 抗代谢药硫唑嘌呤、5-氟尿嘧啶 2、免疫抑制剂