第五章 凝集反应和沉淀反应（P37）凝 集 反 应(agglutination reaction)概念：细菌、细胞等颗粒性抗原悬液加 入相应抗体，在电解质存在下，两者 特异性结合，出现肉眼可见的凝集现 象。Ag 凝集原 agglutinogenAb 凝集素 agglutinin颗粒性抗原：颗粒性抗原：光镜下可见，肉眼观呈浑浊悬液，如细菌光镜下可见，肉眼观呈浑浊悬液，如细菌 、RBCRBC等。等。可溶性抗原：可溶性抗原：光镜无形态，肉眼观呈澄清透明，如血清光镜无形态，肉眼观呈澄清透明，如血清 蛋白溶液、多糖抗原等。蛋白溶液、多糖抗原等。凝集反应凝集反应沉淀反应沉淀反应凝集反应实验中为使抗原抗体比例 （数量）恰当，应稀释Ab凝集反应分类：直接凝集反应 direct agglutination间接凝集反应 indirect agglutination orpassive agglutination一.直接凝集反应（direct agglutination) :细菌、螺旋体、细胞等颗粒性抗原（抗原 是细胞表面结构）在适当电解质参与下，直接 与相应抗体结合，出现肉眼可见的凝集现象。直接凝集反应分类：（一）玻片凝集试验 用已知抗体检测未知抗原玻 片 凝 集 试 验于玻片上先加已知抗体，再加入待测物（未知 抗原？），混匀。如发生凝聚，说明待测物中 含有与抗体相对应的抗原定性试验用途：ABO血型鉴定菌种鉴定（二）试管凝集试验用已知抗原检测未知抗体的效价属半定量试验1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 试 管 凝 集 试 验方法：19号试管分别加不同稀释度待检血清（容量相同，Ab ），10号加NS（对照），各管再加已知定量（浓度、容量一样 ）的颗粒性Ag。结果：以出现明显凝集的血清最高稀释度（即可以判为+者） 作为该血清（Ab）的凝集效价。用途：病原微生物感染的免疫学诊断1.肥达氏反应(Widal test)-诊断伤寒2.外斐氏试验(Weil-Felix test) -诊断斑疹伤寒二.间接凝集反应 (indirect agglutination or passive agglutination)将可溶性抗原或抗体吸附在某种颗粒 性载体(carrier)微球上，使之成为颗粒性 抗原或抗体，然后再与相应的抗体或抗原 结合，出现载体微球的凝集现象（一）载体要求与种类要求：不干预免疫反应颗粒大小均匀常用载体种类：红细胞（绵羊、家兔、人O 型 )活性炭粒、明胶颗粒聚苯乙烯胶乳颗粒（人工合成 高分子材料）等细菌致敏微粒或致敏颗粒：吸附有抗原或抗体的载体颗粒间接凝集试验命名根据载体不同而命名血凝试验（以RBC为载体）乳胶凝集试验（以胶乳颗粒为载体）（二）间接凝集试验的分类 ：1.正向间接凝集反应原理：将已知的可溶性抗原吸附于颗 粒性载体上，检测未知抗体。反应数min凝集为阳性。2.反向间接凝集反应原理：将已知抗体吸附于颗粒性载体 上，检测未知抗原反向间接血凝试验结果判定3.间接凝集抑制反应方法：待测样本（可溶性Ag？）+已知Ab +已知致敏Ag颗粒（已成为颗粒性Ag） 观察是否有凝集现象凝集为阴性，说明标本中无相应Ag; 不凝集为阳性，说明标本中有相应Ag如：用胶乳凝集抑制试验检测尿液中绒毛膜促性腺激素（HCG） 若用抗体致敏的载体及相应的抗原 来检测待测标本中的抗体，则称反 向间接凝集抑制反应。4 协同凝集反应 （co-agglutination)原理：实质为反向间接凝集反应葡萄球菌A蛋白（Staphylococcus protein A, SPA)能非特异地与IgG的Fc段结合,当与特异 性抗原相遇时，IgG的Fab段与抗原结合， 出现金葡菌的凝集现象（属特殊间接凝集 试验）协同凝集试验协同凝集试验实际是用已知 抗体检测未知抗原，可用于的 细菌、病毒的直接检测5 明胶凝集试验（gelatin-gglutination ,GAT)l属正向间接凝集反应 l方法：粉红色明胶颗粒吸附病毒抗原（称为致敏 Ag颗粒）+待测血清观察有无凝集现象。凝集为阳性，说明血清中含相应的病毒Ab;不凝集为阴性，说明无相应Ab。 l 用途：常用于抗HIV-1抗体及抗精子抗体的 检测（三）抗球蛋白参与的血凝试验1.直接coombs试验 l 直接Coombs试验用于检测已吸附于红细胞表面 的不完全抗体。 l 不完全抗体，即能与抗原牢固结合，但因分子量 较小，不能起到由于桥联作用而形成的可见凝集 现象。 l 将抗人球蛋白抗体试剂直接加入经生理盐水充分 洗涤后的受检红细胞，室温放置15min后，离心 观察结果。出现凝集为阳性，表明红细胞表面已结合有不完 全抗体 。 l 用途：常用于新生儿溶血症、自身免疫性溶血性 贫血和医源性溶血性疾病的检测。2.间接coombs试验l 间接 Coombs 试验用于检测游离于血清中的不完 全抗体。 l 方法：待测血清标本与具有相应抗原特异性的红 细胞混合，再加入抗人球蛋白抗体，若出现可见 的红细胞凝集，证明待测血清中含有游离的不完 全抗体 l 用途：本试验多用于检测母体 Rh(D) 抗体，有助 于尽早发现和避免新生儿溶血症的发生，也可对 因红细胞不相容输血而产生的血型抗体进行测定 。思考题：1.玻片凝集试验和试管凝集试验的区 别2.反向间接凝集试验、间接凝集抑制 试验的原理及实例3.协同凝集试验的原理4.比较沉淀试验和凝集试验的异同