保健食品安全性毒理学评价仲伟鉴 主任医师 上海市疾病预防控制中心2018/7/191主要内容一、审评基本要求 二、毒理学试验项目的选择 三、实验动物的选择 四、样品的预处理原则 五、各试验项目应注意的要点 六、审评结论 七、毒理学安全性评价时应考虑的问题2018/7/192一、审评基本要求1.配方 原（辅）料、用量、理化性质 2.剂量 食用方法及用量 3.工艺 规格化产品 符合配方、工艺、质量标准 4.批号 注意批号是否一致,益生菌、奶制品等保质期短的除外2018/7/193二、毒理学试验项目的选择1.毒理学评价的四个阶段 2.普通食品及药食同源的原料 3.可用于保健食品的原料 4.新原料2018/7/1941.毒理学评价的四个阶段第一阶段：LD50,联合急性毒性，一次最大耐受量试验 第二阶段：遗传毒性试验、30天喂养试验、传统致畸试验其中，遗传毒性试验的组合应该考虑原核细胞与真核细胞、体 内试验与体外试验相结合的原则。 第三阶段：亚慢性毒性试验90天喂养试验、繁殖试验、代谢试验。 第四阶段：慢性毒性试验（包括致癌试验）2018/7/1952.以普通食品及药食同源的原料生产的保健食品分以下情况：v以下情况免做毒理学试验 （1）以传统工艺加工而成，食用方法与传统方式相同。 （2）以水提物配制，服用量与常规用量相同，有关资料未提示其不 安全。 （3）列入营养强化剂或营养补充剂名单的化合物，其原料来源、生 产工艺、质量符合国家相关要求，配方中含量也符合有关规定。v在生产加工过程中用水提工艺以外的需做毒理学试验 （1）服用量与常规用量相同急性毒性、三项致突变试验 （2）服用量大于常规用量 还需加做30天喂养试验，必要时进行传统致畸试验和第三阶 段毒性试验2018/7/1963.可用于保健食品的原料一般只要求做急性毒性、三项致突变试验、30天喂养试验， 特殊情况除外。特殊情况：孕妇、乳母单一成份，人参、西洋参、蜂王浆等 4.新原料 （1）定义：以普通食品和可用于保健食品范围以外的动植物或提取 物、微生物、化学合成物等物品的原料简称新原料。 （2）毒理学试验原则：对新原料及该原料生产的保健食品分别进行 毒理学安全性评价，单一新原料生产的保健食品可替代。2018/7/197（3）试验项目选择无食用史 需做四阶段试验局部地区有食用史 需做三阶段试验其中 ，100倍15 乙醇浓度应调至15 （2）需浓缩的受试物乙醇浓度15 浓缩后调至15乙醇浓度在进行乙醇浓度调整时必须用原酒基 5.膨胀系数较高的受试物选择可溶性介质给受试物的方法：灌胃其最高浓度最大灌胃量时达不到人体推荐量的100倍，按实际达到的 倍数标明受试物的膨胀系数 2018/7/19126.益生菌等微生物类保健食品在进行 Ames试验或体外细胞试验时需将受试物灭活。需浓缩的应采用低温干燥法或由企业提供所需浓度的受试物（附方法 、技术参数）。 7.以食品为载体的受试物（1）有营养价值 按设计量进行饲料的营养成份调整，提供详细的说明 。（2）大豆蛋白、乳清蛋白如质量、工艺等符合食品标准和安全要求，允许去除。如仅以该原料生产的，可申请免做毒理学试验。 8.详细说明受试物处理方法，浓度配制情况，核对受试物的给予剂量2018/7/1913五、各试验项目应注意的要点1.急性毒性试验动物：大鼠或小鼠体重：大鼠180200g，小鼠1822g适应环境35天试验前应空腹（一般禁食16h左右，不限制饮水）剂量：一次性给予受试物或一日多次给予（间隔46h，24h不 超过3次，合并1次剂量计算），设计剂量应达到人体可能摄入量 100倍以上。2018/7/19142.骨髓细胞微核试验 （1）动 物：一般选用小鼠712周龄，体重2530克，两种性别 ，至 少各5只，环境适应35天。 （2）剂量设计：能求出LD50 ，高、中、低剂量分别为1/2,1/4,1/8 LD50 ，低剂量 组不应该出现任何毒性表现。求不出LD50 ，高剂量 10g/kgBW人可能摄入量的100倍一次最大灌胃剂量再下设中、低剂量组，另设溶剂对照、阳性对照组 （3）阅片：盲法阅片，计算微核率应计数1000个以上PCE，同时计 算PCE/RBC的比值。PCE/RBC：是评价细胞毒性的指标，它的比值不低于阴性对照组 的20。2018/7/19153.小鼠精子畸形试验 （1）实验动物：成年雄性小鼠 68周龄，体重2535克，适应环 境35天，每组至少5只存活动物。 （2）剂量：剂量设计原则同微核试验 （3）时间：动物的处死一般在首次给样量后第35天 （3）试验结果：应详细列出畸形类型畸形类型：无钩、香蕉形、胖头、无定形、尾折叠、双头、双 尾等阴性对照组的精子异常率为0.83.42018/7/19164.哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验 （1）实验动物、剂量设计同微核试验 （2）每只动物分析100个中期相细胞，每个剂量组不少于1000个中 期相细胞。 （3）观察项目：染色体数目的改变 非整倍体、多倍体、内复制染色体结构的改变断裂、微小体、有着丝点环、无着丝点环、单体互换、双 微小体、裂隙等。2018/7/19175.小鼠睾丸染色体畸变试验（1）实验动物、剂量设计同精子畸形试验。（2） 各组均于第一次给予受试物后的第1214天将受试动物处死、制片 。v注意：性染色体早熟分离、常染色体早熟分离、细胞染色体结构畸变必 须分别列表计算，其中细胞染色体结构畸变是最重要的观察指标。 6.Ames试验 (1) 试验菌株 TA97 TA98 TA100 TA102 自发回变菌落数(+S9) 90180 3050 120200 240320 (2)剂量设计：要求有5个剂量组，外加阳性对照、阴性对照、溶剂对照。 最高剂量组 5mg/皿、饱和浓度、对细菌产生最小毒性浓度。对最高剂量组5mg/皿的正确理解 最低剂量组 0.2g/皿 每剂量组间隔5）或掺入糖类及其它 营养素应考虑调整各剂量组饲料与对照在热量、营养素等方面一 致，且各种营养素的含量应符合动物饲料的有关要求。对生理需要量与毒作用剂量相近的人体必需营养素（如VA、硒等 ），在按其推荐量设计剂量时，如该物质的剂量达到已知的毒作 用剂量，在原有剂量设计的基础上，增设去除该物质或降低该物 质剂量（如降至NOAEL），联合毒性作出评价。推荐量大的受试物可根据配方去除辅料或有资料证明安全的原料 ，说明处理方法、理由，且与生产工艺一致。 （4）实验操作：严格按照保健食品检验与评价技术规范（2003年 版）执行，首选饲料掺入法，单笼饲养。2018/7/1921（5）观察指标：动物生长、活动的一般状况观察。动物的体重、增重、每周进食量、总进食量、每周食物利用率。体重、进食量、食物利用率三项指标密切相关，需综合分析与判断 指标的改变是否为受试物的毒性表现。血液学和血生化指标血液学必测指标包括血红蛋白、红细胞计数、白细胞计数及分类， 必要时测定血小板数和网织红细胞数等。血生化各项必测指标包括：谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、 肌酐、血糖、血清白蛋白、总蛋白、总胆固醇和甘油三酯。其中血糖受 禁食时间的影响较大，动物应隔夜禁食；与人相比大鼠的白蛋白/球蛋 白比值变异较大，以该指标判断产品的安全性需谨慎。2018/7/1922（6）大体解剖及组织病理学检查大体解剖观察：应对所有动物进行大体解剖观察，观察异常表现 。脏器重量及脏器相对重量: 肝、肾、脾、睾丸的绝对和相对重量 为必测指标；主要审查脏器的相对重量。绝对重量和相对重量均 改变，则有重要的生物学意义。应使用动物处死时的体重作为计算脏器体重比。组织病理学检查:报告中应该是描述性的，应包括正常组织和异 常组织的详细病理学描述。其它指标观察：根据受试物的性质及所观察到的毒性反应，判定 是否增加其它敏感指标，如增加神经毒性指标的观察。2018/7/1923六、审评结论的判定1.认可毒理学试验：试验设计合理，操作规范，试验结果能够证明 受试物的安全性。 2.属以下几种情况之一，补充资料后建议批准： （1）检验报告格式不规范，需要重新出具检验报告毒理学试验报告 。 （2）数据偏离历史对照较大，需检验机构做出解释。 （3）未提供某些试验数据，需要补充提供。 3.重做试验，大会再审，属以下几种情况之一： （1）由于实验操作不规范，根据提供的检验报告无法评价产品的安 全性，需要做除30天/90天喂养试验以外的毒理学试验； （2）已有数据提示可能存在安全性问题，但难以下结论，需要重复 试验。2018/7/19244.对产品的安全性不予认可的情况如下： （1）毒理学评价的结果表明产品在推荐剂量下对人体具有一定的毒 性，存在安全性问题。 （2）产品的原料、配方存在明显的安全性问题，如配方含有“可用 于保健食品的原料”名单以外的原料，且未进行新资源食品安全 性毒理学评价。 （3）选择安全性毒理学试验不符合程序规定，未完成相应阶段的毒 理学试验。 （4）毒理、功能、兴奋剂与卫生学、稳定性试验样品的批号不一致 。 （5）未按规定提供安全性毒理学评价资料的。 （6）30天/90天喂养试验剂量设计不合理或某些指标异常，结果不 可信。2018/7/1925七、毒理学安全性评价时应考虑的问题1.试验指标的统计学意义和生物学意义在分析试验组与对照组指标统计学上的显著性时，应根据其 有无剂量反应关系及与本实验室的历史性对照值范围比较的原则 来综合考虑指标差异有无生物学意义。 2.生理作用与毒性作用对实验中某些指标的异常改变，在结果分析评价时要注意区 分是生理学表现还是受试物的毒性作用。 3.时间-毒性效应关系对由受试物引起的毒性效应进行分析评价时，要考虑在同一 剂量水平下毒性效应随时间的变化情况。 4.特殊人群和敏感人群对孕妇、乳母或儿童食用的保健食品，应特别注意其胚胎毒 性或生殖发育毒性、神经毒性和免疫毒性。2018/7/19265.人的可能摄入量较大的保健食品应考虑给予受试物量过大时，可能影响营养素摄入量及其生 物利用率，从而导致某些毒理学表现，而非受试物本身的毒性作 用所致。 6.含乙醇的保健食品对实验中出现的某些指标的异常改变，在结果分析评价时应 注意区分是乙醇本身还是其它成分的作用。 7.动物年龄对试验结果的影响对实验中出现的某些指标的异常改变，要考虑是否因动物年 龄选择不当所致。 8.安全系数鉴于动物、人的种属和个体之间的生物学差异，安全系数通 常为100。2018/7/19279.人体资料在评价保健食品的安全性时，应尽可能收集人群食用受试物 后反应的资料。 10.综合评价在对保健食品进行最后评价时，必须综合考虑受试物的原料 来源、理化性质、毒性大小、代谢特点、蓄积性、接触的人群范 围、食品中的使用范围、人的可能摄入量及保健功能等因素，确 保其对人体健康的安全性。 11.保健食品安全性的重新评价随着科学技术的进步和研究的不断发展，有必要对已通过 评价的受试物进行重新评价，做出新的科学结论。 2018/7/1928谢谢！2018/7/1929