微生物基本检验技术华中科技大学同济医院检验科 致病菌的检验程序直接涂片镜检 涂片镜检 标本分离培养可疑菌落 生化反应 血清学鉴定分子生物学技术 药敏试验动物试验细菌形态学检查n1、不染色标本检查n2、染色标本检查显微镜显微镜n n普通光学显微镜普通光学显微镜n n暗视野显微镜暗视野显微镜n n相差显微镜相差显微镜n n荧光显微镜荧光显微镜n n电子显微镜电子显微镜普普 通通 光光 学学 显显 微微 镜镜最为常用的一种显微镜，普通显微镜用 油镜可放大1000倍，可将0.25m的微粒 放大到肉眼可见的0.25mm,一般细菌大于 0.25m，故用普通光学显微镜可见。暗暗 视视 野野 显显 微微 镜镜n多用于检查不染色的活细菌 和螺旋体的形态及运动观察 。相相 差差 显显 微微 镜镜n主要用于检查不染色活细菌的形态及 内部结构。荧荧 光光 显显 微微 镜镜扫扫 描描 电电 子子 显显 微微 镜镜 n放大倍数可达数万至数十万倍，能分辨 1nm的物体，可观察细菌表面和内部超微 结构。不染色标本检查n应用：主要用于检查生活状态下细菌的动力及运动状况n常用方法：压滴法、悬滴法、暗视野显微镜检查不染色标本检查-压滴法载玻片细菌悬液盖玻片不染色标本检查-动力观察n动力+：可看到细菌自一处移至另一处， 有明显的方向性位移n动力-：受水分子撞击细菌呈现布朗运动 ，只在原地颤动而无位置的改变。染色标本的检查-常用染料n碱性染料 电离后显色离子带正电荷，易与带负电荷的被染 物结合。细菌的等电点在pI25之间，易与带正电荷的染料结合 而着色。常用的染料有碱性复红、结晶紫、亚甲蓝等。n酸性染料:电离后显色离子带正电荷，易与带负电荷的被染 物结合。 通常用来染细胞质，而很少用于细菌的染色。常用的染 料有伊红、刚果红等。n复合染料（中性染料）及荧光染料 复合染 料是碱性染料和酸性染料的复合物，如瑞氏染料（伊红亚甲蓝） 、姬姆萨染料（伊红天青）等；荧光染料如荧光标记的抗体，荧 光素常用异硫氢基荧光素。用于某些特殊的染色技术。n脂溶性染料 如Sudan black。染色标本的检查染色方法的种类n单染法:采用一种染料染色n复染法（鉴别染色）:采用两种或两种以 上的不同染料进行先后染色，使不同种 类的细菌、同种细菌的不同结构，分别 染上不同的颜色，以便鉴别细菌。步骤：结果:阳性菌紫色 阴性菌红色 结晶紫初染碘液媒染乙醇脱色复红复染涂片固定由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立。革兰染色法（Gram Stain）Figure 1 - A Gram stain of Gram + Staphylococcus cells. Figure 2 - Gram stain of Gram - E. coli cellsFigure步骤：步骤：涂片固定涂片固定酸性复酸性复红红红红初染初染3%3%盐盐酸酒精脱色酸酒精脱色美美蓝蓝蓝蓝复染复染镜检镜检镜检镜检抗酸染色法抗酸染色法 结果结果: :抗酸菌抗酸菌红红红红色色； 非抗酸菌非抗酸菌蓝蓝蓝蓝色色。步骤：步骤：涂片固定涂片固定金胺金胺OO染色染色盐盐酸酒精脱色酸酒精脱色复染复染镜检镜检镜检镜检荧光染色荧光染色结果结果: :抗酸菌抗酸菌明亮橘黄色明亮橘黄色； 非抗酸菌非抗酸菌- -无无荧荧荧荧光光 特殊染色荚膜染色特殊染色负染色 （墨汁染色）特殊染色小 结n1、细菌形态学检查方法：不染色标本检查；染色标 本检查n2、常用染色方法：1）革兰染色2）抗酸染色3）荧光染色