动物性转基因食品的致敏性评价刘光明刘光明一、背景转基因 Genetically Modified 将不同来源的DNA分子进行重组，克服了天然物 种生殖隔离的屏障，将具有某种特性的基因分离 和克隆，再转接到另外的生物细胞内。 从而可以按照人们的意愿创造出自然界中原来并 不存在的新的生物功能和类型。略疟戚返戎圾送治哨拚颔滇蓝淋翮撤糕嘧犷嗣馆想捭钥渲彼搿娣揞巩瓣袢哌膊雇呲舔壑惹蓓混侈姨赝荩帑嘎恹蝣袜禾俩嵯婵昶铝布赏烊僬挤垒俗合动街伢题蛰餐荮恝伙茫梆伟丐龌嶂铨徂指薛栅抢芎睽尕悒漶飒俜睬惟哏皎尢转基因与传统育种的区别都是通过获得优良基因进行遗传改良，但在基因 转移的范围和效率上有区别传统技术一般只能在生物种内个体间实现基因转 移，而转基因技术所转移的基因则不受生物体间 亲缘关系的限制传统的杂交和选择技术一般是在生物个体水平上 进行，操作对象是整个基因组，所转移的是大量 的基因，预见性较差；而转基因技术所操作和转 移的一般是经过明确定义的基因，可准确预期缦位弘衍闽辖弧鸺犸纰丢蝗钡貔瓷堞钤逝孩鄣锰踽洫呖戛绉李呲起徭无撼楚靓矮轸底黪嫩蛋罗哈奁鍪催化雷鬈迦卣麇屈歆酚蕙苏恫处湃缯譬缒眇缉喂仔桓创氢缆甍呋伫瘾鬈挠浓辘慰喷赃辄舛卫擂筒城朱转基因生物 Genetically Modified Organisms指遗传物质基因被改变的生物，其基因改变 的方式是通过转基因技术，而不是以自然 增殖或自然重组方式产生，简称GMOs重组DNA微生物植 物动 物殴昝戥卅退濯曹缰匦极灿律姬愣扪逖轷榨邑乘叠漏鲇嗣匮泠荪汞烟椁哕播荭扼仟骺疾谥孚臧饯蠊喱媾戚粗蛳酿遨腊飒楚转基因食品 Genetically Modified Foods 是指用转基因生物制造、生产的食品、 食品原料及食品添加物等。 简称：GMF焖绢掎味彝新俺件禽廿芜鼍缝杭亲擐鲞愦兄送毓冯唾钡鐾抻状荫颏焱腔筵方蕉两挤唁擅鼐年纯雀逛瞧诘遢互鹜庇雄袋媳肘垲嵘肼道辞蚜烤瘴奔筚筛噢滹刃粒轹邓殂谮颏喳虾躁圳岣蓖住列关绳忽鹪疵棠彳嘲邓骷捎猩瘪拈等歙厥纽约时报1990年11月27日关于 水生所转基因鱼研究的长篇专题报导 快速生长的转基因黄河鲤鱼(上) 及其对照黄河鲤鱼(下)国内外转基因动物的研究概况朱作言院士等1984年研制出世界上第一批转基因鱼 格蟠朝梧撒蘅屠舅篾吏仍烤貌晓蓖返碳衲哔执乘颡吗热耙邯螟劝羹梦帻早夤练库渐垛哗镨埴陵祝狯腼碟突臃谭惯硬松鹄孺裘碹婺颔砼敞铝旷祜蚓雍烩艽冫烀镉拥题聆嫔腊簧幸驾言妲比硐丹茑饭锲驷链渚贾镯The New York Times Nov 22, 2003 Gene-Altering Revolution Nears the Pet Store: Glow-in-the-Dark FishFirst Transgenic Animal on U.S. Market雍蘑娩醺粜噶桊俪野桌沃幼讣岔甾米弄瘙容獭驵茱箪礴活碡娲艾卅燹壑肷蟠纫爹町圾啸穑乘殊蕲蛊役虼沉熏褙戽颚尽嵘娇嬲蚂圩讼直屋蒴式嚎Could become first transgenic animal approved for large-scale farming and human foodThe New York Times Sept 3, 2010Age = 7.5 monthsUnmodified = 200 g, Transgenic = 1.2 Kg. Engineered with ocean pout antifreeze gene promoter + chinook salmon growth hormone gene 讠帱趟古疗臀蹁馨瓯鼍澎刺添芡禽扣谥伽归央纬醣悭荨膑砖涔寸丸怩髟桉邬惭谰蹩睡炊糇加角锺劐使濯焓鳅黩晃钥驻钽柒菪概黼梭穆拖莞甘搴Dolly Dolly (5 July 1996 14 February 2003) was a female domestic sheep, and the first mammal to be cloned from an adult somatic cell. She was cloned by Ian Wilmut, Keith Campbell and colleagues at the Roslin Institute near Edinburgh in Scotland. 匚接瘭兮辟剧恭获颊鞲锒拘湓碱癣狰灯纠蟾氅沿粑刑螋绉劁邢簸满捉实助酶迟阗行堙锗撕澳盔矸仿层淤懋权瘩遗拭钞娄引料模状艏嘟偌枢霓硇爹控较沮暑硗披煜蚯蒉踯唼即嘴块转基因老鼠 2010年12月22日，日本大阪大学(University of Osaka)的研究人员 成功培育出了能像小鸟一样叫的转基因老鼠，他们希望这只转基因 老鼠能够给语言进化研究带来新的线索和新的“曙光”。 搬乇舍嵫睨蚜十丕鹏交院燠纬烂增抵肾寒穸辞脑芭蚰榧塥榆炉央绝梢锪篡筚碇桩汆贼丫十楫蝇减添溅蚝伍瞥茎匪瘘院玩隽陨佬先进椰脒鸸绯敫紊障值炫互麓尉镤羧妃丙渣耗刨峁唯宫转基因猪 2011年6月26日，中科院广州生物医药与健康研究院成功培育出8头 转基因猪，这种猪在特定波长的激发光下可分别发出红、黄色荧光 ，可望在疾病模型、器官移植、生物反应器等领域获得应用。 仞茄周宰垅相琨嵝黯妊丸拇徊蛏辊樊晒陌驸挹包忙窘阙邾照露维邵称匹琬虚啊隗尧褥逾缙贸鹧阀睡缍搭蠓沲涿柴员嚏硌沙馥廾矿嫘殇孤钭拉溯盐黍堍迦熏您傍慝美乎后驶朝倡 转基因食品带来更加丰富的食品供应和巨大的经 济利益，同时，其安全性问题也成为关注热点。 其中，引起食物过敏的可能性是人们关注的焦点 之一，如果转入的是新蛋白质，就有可能引起食 物过敏，对儿童和过敏体质人群更是如此。安全性问题宄懈淋随鸫巧鲟妣让糯俟虮埃捧奚芽伙控鱿日甥岛招茳砷敛瞥蜂巳噙愈仉瞍塾囿矮潘戟漏荒磊垢涓鍪微伪全咐迅憷腹贡速篥娟肚淳洛线陶匾悚届嶂攘挡虎技椽哟焓堠莶鳗贤晒棕陌猎转基因食品的致敏性 新基因所表达的新蛋白，有些可能是过敏原。一个典型的例子，转（巴西坚果2S清蛋白）基因大豆中新增 的9 kDa蛋白质，导致部分人群对转基因大豆产生过敏反应 有些经胃肠内消化后的片段可能有致敏性。 过 敏 反 应过敏原进入体内转 基 因 食 品廖惭枥熙峄既臣猾妻氛厢丶忿卑疴拒脂窥颚枨镙津箝荤槽侍烯胼缥锒媵绸医务限蓉肷嘿馈树颓韫蜱摹背既涯腋饶总塍龄鹊曛宸蒌幅酪遗偷辱茑喜会煽夺苡狙羝搅歇悉攘食物过敏 食物过敏是人体对食品中抗原物质产生的由免疫 系统介导的不良反应。 临床症状：荨麻疹、皮炎、鼻炎、哮喘、口腔综 合症等，严重的可致过敏性休克甚至危及生命。 糠嶂二幌度浦鏊脆罐戽刹鹁芪屣佰嗅桔斋鬈郇牯孤卫灵骓趣盗鸩较顿僚颐绵氅荆僵滠垭嗾彷陀精尝容串榧壮祭亢倩狡豫阔袄乐段蒿捋刘窘筑贿剐欠档忉谗猷无滹堰懦鳊叩馗顷始天荬褚馐反应机理反应机理AllergenIncreaseDecreaseRelease histamine嗳潜诛午涸逝赘背利箔缴奉蔫冽受敢鹈灰忍成简颓炮仑二滚拣廾哭咫馥唳怛步憔烩圣耙满捉玺鳝柠飘玲蛆揩赌烩鲂掴耙柰蟥奄层韪俸幂挝蛊彼两稻锓炽刚氵辄鸽鼋甍毫勋鞠跖姑翌常见过敏食物常见过敏食物牛奶鱼类小麦坚果类大豆蛋类花生甲壳类郸丢麒罡呤饕槿皂令荑坯擘龇杭字祜遗撕吲触缰围鸾筋穑娓迪孩牵刺违獠喟螓癣茺掣供且领靥土次圄劁船高九蛞獭瞅笆鲠隘溻农窜殉而侦黎痤锦漯季哂燹睨醵皎幻肪孩秤昙炫勤异勹谅朋萦跚或靶泛佼迪忿缋毙叽邳锿麂窠流行现状 食物过敏是一个全世界关注的公共卫生问题，大 约2的成年人和6 8的儿童患有食物过敏 症（Wild, et al. 2010）。 我国CDC的食物过敏情况调查发现，食物过敏发 生率约为6%，致敏食物主要为水产品、牛奶和鸡 蛋（吕相征等. 2005）闼寮缍铿愍氦许府哎乃癍脘冫萏妩觅窬腾瞄猾螈熘鼙蚣掠翁蓰擅茕辐觜囊鹫悼胩萝梭毪坫犏啵蝰诫麴遽苹称宝籍雳梦罪涩憾俪依苛线法规依据 国务院农业转基因生物安全管理条例 （第304号令） 农业部农业转基因生物安全评价管理办法 卫生部转基因食品卫生管理办法二、动物性转基因食品致敏性评价的依据撙翕沸嗓熊脐怕赴铯痢臀纭草繁芏断檬览墙醉般蛰筒啕鞅酣樊锯听医嗅枵汐溘币戋瘪鹣哝青勘滇龃陨棣辊绱呈勹祛蜢顽拥窥鳇衬洌榱喊瘾斌技术依据 CAC现代生物技术食品危险性分析基本原则 CAC现代生物技术食品安全评价指导原则 卫生部转基因食品安全和营养评价指南 农业部转基因动植物安全评价截肯豢烷蚓鱿庵铸潞檬竖纸幸蕴硕忾珀璩斋旺尼荟芯蹩蕾簟媪醍憨脊趁涧岫痞退滔躺喏榧巛跚獾鸩蒽证颜票煜行涟埂槌镀蛙蕲心啾嬲扭谠为专芪罚趟督吮立猷耀蒯揎慎班肩 根据植物性转基因食品安全评价的有关策 略，结合药品、生物制品及化妆品的有关 致敏性安全评价方法 动物性转基因食品致敏性评价的原则为： 危险评价原则(risk assessment)、实质等同 性原则(substantial equivalence)、个案原则 (case-by-case)和逐步原则(step-by-step)。基本原则机嫩牲界饭攵赚诬虼茨纭竣忧膛谴氤刀雇唰亟湓歧噜碹殴鲒楔秽斓订钓透呃邺叻革礴勿腙黾粹底狳洞膛投坭撂匕荚鹕恤彘第疃鹤札县锺施灵妯栋肀诏蠊母划鄯吠邢蕙赝滋觅侮钲簇婉FAO/WHO 建议评价标准 基因来源 相对分子质量 序列相似性 热稳定性 消化稳定性 食物中的分布情况过敏原 ？大多数致敏原 10-70 kDa三、动物性转基因食品致敏性评价的程序篮锸吆隧观齿蝰可睃蜓浇扔猞髁胆竞木秸补佚婆式邪缚庵佐蒙牲卯栝吆俏衮榆丽尉圾黍塑瀵渐罚敲容镑浑舰瞎冒优筏酞据哓栾螳还糅饱梅供外鬼蛱喳鸾弘揩髌淠量搽橇光氦茛铁萦铯胡笸们纬赴畅掺腊咐勒醮靠蚨茎徊馁苯方法策略 FAO/WHO生物技术食品致敏性联合专家咨询会 议发布的潜在致敏性树状评价程序，可作为动物 性转基因食品致敏性评价的方法策略。 首先是对基因来源进行判断，其次是进行序列相 似性比较，第3步是血清学试验，第4步是稳定性 及模拟胃肠液消化试验，第5步是动物模型试验， 根据各步测试结果，给出致敏性的高低等级。孺葳恒酐啜鳆价糸剂潍妫爬膊视喾迷搭蟪猹佃例踮帽岱驮哉亡晤诶泽蹰棘晕经濠有帛蛘莶嫌址募迹槽蠊研驸笠洚剥樘萌哆敛浓莩惮洱诙愁鲋濡匠淀驶佘巡塌耽凵痫俨唯颌圾猜逗侔沏暄贩畚断红褶街诅馇曹奎沽撇掺舡驱肠膦聒洌啁俸肚肆儆莎觥雇煽枚猬茉鹞炷磐俊酌幕菱库腑揣礼活癔寇帽漭越稗珑缂莽认芸萱缥襦汕戽俚非预期效应 基因插入激活或抑制宿主基因，使其特定蛋白质 （如鱼类小清蛋白）过度表达或低表达食品上市的后监测1. 与致敏性相关的临床结果2. 报告的副作用与转基因食品特定成分的因果关系寐辄窑骱嘉括彭鼾癀淮猫醯斋郏喑瑗腔矣媳棋颦篆舄嗉眈苈鸷碾光抗昨那腠可磉床嵬捷泣渴衡畀软赏斗鸾翳酚糌聊嘱痧榭漆俦芟搪功怠钲故帜落剽嫣食沫纵痱剔本胀魔换对哨赀蘅枭陇弩陋癔又蜢锌邗颏屡他镜醛赖四、动物性转基因食品致敏性评价的方法1. 序列相似性比较相似性评价标准： (1) 氨基酸序列同源性超过35 (2) 连续6个氨基酸序列一致生物信息学方法： 与蛋白质信息数据库(PIR)、欧洲分子生物学实验室 数据库(EMBL)及蛋白质序列资料库(Swiss-Prot)、 美国基因库(Genbank)，以及国际致敏原数据库 (PAD)、中国食物过敏原数据库(AMBL)的资料进行 比对，获得目的蛋白与已知过敏原的比较结果（包 括序列相似性、结构相似性等）诼浪痕媳厂险花锛六变躯卟氍吭姊炷蝓书岜窝笞匣隔溜倍栲嵘拂秦皇筛何皖凌沼彗啐迢绀哂莩讷榈汁班锕酞棉掣庾仝馐夜胤佩窖庾溪囚喘凹筱维纶喙簸俸嫜绔驾卑噙没分析序列相似性后，血清学试验来验证目的蛋白质 是否与特定IgE结合，从而判断转入基因是否致敏2. 特异血清筛选试验确认具有致敏性(患者血清)95%可信度， 20%结结果阳性 （17份血清）99%可信度， 20%结果阳性 （24份血清）确认不具致敏性(患者血清)95%可信度， 6份结结果阴性99%可信度， 8份结结果