2008 Waters Corporation 12008 Waters Corporation四极杆系统的校正2008 Waters Corporation 2校正 硬件 vs 软件 硬件的校正是由原厂和维修工程师进行的，可以保证名义质量数的准 度。 对于某些应用，硬件校正是足够的。 对于需要最高的质量准确度的情况，用户可以通过Masslynx 软件进 行软件校正，并将系统的质量校正变得更为精确。 在识别未知物以及MRM 和 SIR 分析时，确认选择了准确的质量数， 这是非常有用的。2008 Waters Corporation 3校正中的可变因素 环境的改变 温度或者湿度的改变 随着时间变化而发生的电源变化 改变了分辨率设置 在仪器的校正范围内工作是非常重要的! 如同您不愿意在定量曲线之外进行定量计算一样，您也不希望在您的质 量数校正曲线之外工作。2008 Waters Corporation 4仪器的校正曲线（Calibration Curves） 一台三重四极杆的仪器需要有三种校正曲线：对于MS1和 MS2, 有六 条校正曲线 静态校正（Static calibration）可以使四极杆质量分析器准确地定位于 感兴趣的特定质量数上。 (例如 调谐，SIR和MRM). 扫描校正（Scanning calibration） 保证在扫描采集中峰采集的质量数 准确性。 (例如 全扫描 Full Scan). 扫描速度补偿（Scan speed compensation calibration）：当仪器快 速扫描是，补偿系统中的“滞后时间” 。 质谱仪的每一种校正都需要参考溶液。不过，MassLynx 可以在一个 步骤中执行所有必须的校正。2008 Waters Corporation 5校正步骤 每个参考溶液的质谱图都是已经采集好的。采集过的质谱图中的峰与 储存于参考文件表格中的预期理论质量数相匹配。A mass spectrum of a reference solution is acquired. The peaks in the acquired spectrum are matched against a table of expected theoretical masses which are stored in a Reference File. 参考文件中的每一个峰与采集的质谱图中对应的峰相匹配。Each peak in the Reference File is matched to a corresponding peak in the acquired spectrum file. A calibration curve is created that adjusts the masses of the experimantal spectral peaks to the theoretical masses of peaks as listed in the reference file. 一般注射泵Typically a Syringe Pump capable of delivering a slow, steady flow rate of 5 or 10 L/min is used with an Infusion Kit consisting of a fused silica capillary tubing with appropriate fittings.2008 Waters Corporation 6参考溶液（Reference Solutions） 参考溶液用于在一个宽mass 范围内产生多离子。 质谱仪可以在此范围内被校正。 常用的参考溶液: PEG, PPG NaI/CsI, NaI/RbI Horse Myoglobin, Poly Alanine 在此章节的最后有一些常用的参考溶液的配制方法。2008 Waters Corporation 7参考文件Reference File 参考文件中包括参考溶液产生的质谱峰的信息，Masslynx软件将在 校正过程中对其进行搜索并匹配之。 该文件既有mass（ m/z ）信息，也有这些峰预期的强度。强度信息 在校正 LC/MS 系统时，通常是不用的。 参考文件置于Masslynx软件的Ref 文件夹下。 参比文件都是 text 文本文件，可以用Notepad 写字板浏览之。 参比文件必须具备一个“.ref” 的扩展名。2008 Waters Corporation 8MS 校正的方式 从调谐页面进入，选择校正仪器校正 使用自动调谐中的校正功能 对于SQD、TQD，可以使用IntelliStart Instrument Setup功能 进行仪器校正2008 Waters Corporation 9校正仪器Calibrate Instrument2008 Waters Corporation 10校正窗口 2008 Waters Corporation 11校正的参考文件Examples of Calibration Reference Files -Myo.refMyo1500.refMyo1500n.refMyoneg.refMyotrp.refPigb.refNaics.refNaics1.refNaics2.refNaics3.refNaics4.refNaineg.refNairb.refPegh.refPegh1000.refPegh2000.refpeghna.refpeghnam.refpeghnh4.refppghna.refppghnh4.ref Horse Myoglobin and PigNaI with Cs or RbPEG or PPGCalibration Reference Files Are Stored in: C:MASSLYNXREF2008 Waters Corporation 12Note: Na+ = 22.9898 Cs+ = 132.9054I- = 126.9045 Na(NaI)+ = 173 Na(NaI)2+= 322 Na(NaI)3+= 472校正的参考文件2008 Waters Corporation 13NaI 参考溶液的特性 NaI 基质的溶液有Na、I的优势，并有单一同位素。系统不必区分来 自于不同同位素的各组峰。 solutions have the advantage of sodium and iodine being monoisotopic. There are no sets of multiple peaks from different isotopes that the system has to differentiate between. 使用NaI/RbI 溶液校正低于85 amu，使用NaI/CsI 溶液校正低于 133 amu时，存在问题。There may be a problem with calibrating below 85 amu with NaI/RbI and 133 amu with NaI/CsI. 完成了校正，在将所有的NaI 清除出系统之前，可以看到ESP- 的灵 敏度降低，同时ESP+ 可以看到一系列Na 的加合物You may see a decrease of sensitivity in negative ESP and increased formation of sodium adducts in positive ESP right after you calibrate till all of the NaI washes out of your system. NaI 溶液生成的离子可以高达 4000 amu。2008 Waters Corporation 14Magnified by 450XMagnified by 5XNaI RbI 质谱图2008 Waters Corporation 15PEG/PPG 参考溶液的特性 PEG/PPG 基质的溶液形成来源于不同同位素(主要是C)的多个峰。 这些同位素峰组可以检查质谱仪的分辨率。 PEG/PPG 溶液非常容易 电离。 PEG (或者 PPG) 的混合物可以在一个宽质量数范围内产生离 子 (高达 2500)。 PEG/PPG 溶液产生的碎片可以用于形成离子低至50 amu 之下。 PEG/PPG 可能变得很“粘稠”，清洗出系统可能需要一些时间。 在确定的条件下，PEG/PPG 溶液可以产生一系列的多电荷离子，也 可以产生一系列的单电荷离子。 这些系列可以交叠并导致在一定质量 数范围内的校正困难。2008 Waters Corporation 16PEG 1000 质谱图实例2008 Waters Corporation 17单电荷的铵加合物双电荷的铵加合物PEG 1000 和醋酸铵2008 Waters Corporation 18马心肌红蛋白（Myoglobin/PigB）参考溶 液的特性 当分析蛋白和多肽时，质谱仪常常测定多电荷离子的 m/z .对于一些 化合物，电荷状态可以轻易地多达50。 当校正分析多电荷离子的四极杆系统时，校正通常是在能产生多电荷 离子的校正溶液基础上进行的。When calibrating quadrupole systems that are analyzing multiply charged species, the calibration is often performed on a reference solution that produces multiply charged ions. 这类应用中的参考溶液的代表是马心肌红蛋白以及猪和/或牛血清蛋 白。2008 Waters Corporation 191715141312 11 109 18851816192021222324多电荷化合物的质谱图2008 Waters Corporation 20Mass 校正概述 选择并准备参考溶液（reference solution）。 设置针/泵（syringe/pump）与正确的源。 清除现有的任何软件校正。 对质谱仪进行调谐，找到参考溶液最佳灵敏度的参数。 检查Mass校正中用到的参数。 开始mass 校正步骤。 必要时，查看并编辑校正。2008 Waters Corporation 21The Calibration Uncal.cal should be a blank calibration (no software calibration) which you can load in (use “File/Open” menu item).未校正的参考文件Uncalibrated Reference File2008 Waters Corporation 22清除当前的校正 2008 Waters Corporation 23选择一个参考文件 2008 Waters Corporation 24质量分析器的设置2008 Waters Corporation 25质谱仪的调谐2008 Waters Corporation 26设置峰显示的参数 从校正范围内选择四个代表性的峰并输入到Mass 一栏中。确认选