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1第十一单元第十一单元 现代生物科技专题现代生物科技专题单元过关检测(十)(时间:45 分钟,分值:90 分)1(10 分)(2018江西鹰潭模拟)请根据现代生物工程技术回答下列问题:(1)基因工程技术中对已获得的目的基因,常采用 PCR 技术大量扩增。该技术的基本过程是:目的基因 DNA 受热变性后解链为单链,_与单链相应互补序列结合,然后在 DNA 聚合酶的作用下进行_,如此重复循环多次。(2)限制酶Sma 能识别下图所示核苷酸序列,并在图中箭头位置切断 DNA。用限制酶Sma 切割获取的目的基因需用_酶构建基因表达载体。(3)培育转基因小鼠除利用基因工程技术之外还需用到_、_等技术。(4)制备单克隆抗体通常选用细胞融合技术,使_细胞与_细胞融合,融合成功的细胞经过筛选就是所需要的_细胞。解析:(1)利用 PCR 技术大量扩增目的基因的基本过程是:目的基因 DNA 受热变性后解链为单链,引物与单链相应互补序列结合,然后在 DNA 聚合酶的作用下进行延伸,如此重复循环多次。(2)题图显示:用限制酶Sma 切割得到的是平末端,因此获取的目的基因需用T4DNA 连接酶构建基因表达载体。(3)培育转基因小鼠时,利用基因工程技术得到的转基因小鼠受精卵,还需用到早期胚胎培养和胚胎移植等技术,才能将其培育成转基因小鼠。(4)制备单克隆抗体通常选用细胞融合技术,使经抗原刺激的 B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合,融合成功的细胞经过筛选就是所需要的杂交瘤细胞。答案:(1)引物 互补链的合成(或延伸)(2)T4DNA 连接(3)早期胚胎培养 胚胎移植(4)(经抗原刺激的)B 淋巴 骨髓瘤 杂交瘤2(10 分)启动子探针型载体是一种有效、经济、快速分离基因启动子的工具型载体,其结构如图所示,据图回答下列问题:2(1)限制性核酸内切酶的作用特点是_。(2)将切割产生的 DNA 片段群体与无启动子的探针载体重组,需要用_。(3)若把重组混合物转化给大肠杆菌,为提高转化效率,常用的方法是_。(4)若插入片段中所含的编码区序列的碱基对数目不能被 3 整除,报告基因能否正常表达?为什么?_。(5)若克隆位点插入了启动子序列,且其中不含编码区序列,但报告基因仍不能正常表达,可能的基因是_。答案:(1)识别并切割特定的脱氧核苷酸序列(2)DNA 连接酶(3)用 Ca2处理大肠杆菌,以增大细胞壁的通透性(4)不能。mRNA 中相邻的三个碱基决定一个氨基酸,若插入片段中所含的编码区序列的碱基对数目不能被 3 整除,则报告基因不能编码出正确的氨基酸序列(5)启动子插入方向不正确3(10 分)(2017高考天津卷)玉米自交系(遗传稳定的育种材料)B 具有高产、抗病等优良性状,但难以直接培育成转基因植株,为使其获得抗除草剂性状,需依次进行步骤、实验。.获得抗除草剂转基因玉米自交系 A,技术路线如图。(1)为防止酶切产物自身环化,构建表达载体需用 2 种限制酶,选择的原则是_(单选)。Ti 质粒内,每种限制酶只有一个切割位点G 基因编码蛋白质的序列中,每种限制酶只有一个切割位点3酶切后,G 基因形成的两个黏性末端序列不相同酶切后,Ti 质粒形成的两个黏性末端序列相同A BC D(2)下表是 4 种玉米自交系幼胚组织培养不同阶段的结果。据表可知,细胞脱分化时使用的激素是_,自交系_的幼胚最适合培养成愈伤组织作为转化受体。2,4D(2.0 mg/L)6BA(0.5 mg/L)IBA(2.0 mg/L)激素结果自交系愈伤组织形成率(%)芽的分化率(%)根的诱导率(%)甲991390乙858087丙888312丁168583(3)农杆菌转化愈伤组织时,TDNA 携带插入其内的片段转移到受体细胞。筛选转化的愈伤组织,需使用含_的选择培养基。(4)转化过程中,愈伤组织表面常残留农杆菌,导致未转化愈伤组织也可能在选择培养基上生长。含有内含子的报告基因只能在真核生物中正确表达,其产物能催化无色物质 K 呈现蓝色。用 K 分别处理以下愈伤组织,出现蓝色的是_(多选)。A无农杆菌附着的未转化愈伤组织B无农杆菌附着的转化愈伤组织C农杆菌附着的未转化愈伤组织D农杆菌附着的转化愈伤组织(5)组织培养获得的转基因植株(核 DNA 中仅插入一个 G 基因)进行自交,在子代含 G 基因的植株中,纯合子占_。继续筛选,最终选育出抗除草剂纯合自交系 A。解析:(1)G 基因或 Ti 质粒被限制酶切割后自身环化的主要原因是 G 基因或 Ti 质粒被切割后形成了相同的黏性末端,所以为了防止酶切产物自身环化,应确保切割 G 基因或 Ti 质粒后形成的两个黏性末端不同;为防止 Ti 质粒被切成多个片段,失去其应有的功能,因此 Ti质粒内的每种限制酶只有一个切割位点。限制酶的作用对象是 DNA 而不是蛋白质。(2)脱分化的结果是形成愈伤组织,从表格中可以看出,愈伤组织的形成率主要与 2,4D 有关。从表格中可以看出,自交系乙的愈伤组织形成率、芽的分化率及根的诱导率都较高,所以该自4交系的幼胚最适合作为培养成愈伤组织的转化受体。(3)由于 G 基因是抗除草剂基因,所以检测目的基因是否进入受体细胞的方法是用含除草剂的培养基进行培养,如果愈伤组织能正常生存则说明转化成功。(4)根据题意可知,转化愈伤组织能使报告基因正确表达得到能催化物质 K 呈现蓝色的产物,无论这种愈伤组织是否附着有农杆菌。(5)由于核 DNA 中只插入了一个 G 基因,所以该转基因植株属于杂合子,相当于 Gg(g 表示未插入 G 基因),故其自交后含 G 基因的植株中纯合子占 1/3。答案:(1)A (2)2,4D 乙 (3)除草剂(4)BD (5)1/34(10 分)青蒿素是从青蒿植物组织细胞中提取的一种代谢产物。下图为青蒿细胞中青蒿素的合成途径,其中,FPP 是合成青蒿素必需的前体物质,它在青蒿细胞和酵母细胞中都存在,而 ADS 酶、CYP71AV1 酶只存在于青蒿细胞中。请回答下列问题:FPP青蒿酸青蒿素ADS酶青蒿酸 前体CYP71AV1酶(1)如图体现了基因通过_,进而控制生物的性状。如果利用基因工程技术培育能产生青蒿素的酵母细胞,理论上还需要向酵母细胞中导入_等基因。(2)青蒿素是青蒿细胞的一种代谢产物,可以利用植物组织培养实现青蒿素的工厂化生产。下面的简式表示植物组织培养的大致过程:外植体愈伤组织完整植株实现青蒿素的工厂化生产,需要进行的过程是_(填序号和名称),从物理性质上考虑,应选择_培养基。(3)在实践中,还可利用单倍体育种来培育能稳定遗传的高产的青蒿。分离青蒿的花药,通过_培养获得单倍体植株,之后用_或_处理单倍体幼苗,使其染色体数目加倍,从而获得所需要的纯合的优良品种。答案:(1)控制酶的合成控制代谢 ADS 酶基因、CYP71AV1 酶基因(2)脱分化 液体(3)花药离体 低温 秋水仙素5(12 分)(2018湖北调研)利用细胞工程技术制备抗人绒毛膜促性腺激素(HCG)单克隆抗体,其主要流程如下:取免疫 后的淋巴 细胞与骨 髓瘤细胞 融合用HAT 选择培养基 筛选出杂交 瘤细胞将杂交 瘤细胞接 种到多孔 细胞培养 板上,筛 选出抗体 检测阳性 细胞体外培养 获得抗HCG 单克隆抗体5回答下列问题:(1)制备抗 HCG 单克隆抗体过程中,用到的动物细胞工程技术有_和_。(2)细胞 DNA 合成有 D 和 S 两条途径,其中 D 途径能被氨基嘌呤阻断。在 HAT 培养基中加入了氨基嘌呤,杂交瘤细胞能连续增殖,未融合细胞以及同种融合细胞因不能增殖而死亡。由此可判断骨髓瘤细胞 DNA 合成存在_(填“D” “S”或“D 和 S”)途径。(3)步骤需对选择培养的杂交瘤细胞进行克隆化培养及抗体检测,该过程一般在多孔细胞培养板上进行。先将细胞悬液稀释到 710 个细胞/mL,再在每个培养孔中滴入 0.1 mL 细胞稀释液,其目的是_。(4)用抗 HCG 单克隆抗体作诊断试剂,能在妊娠初期即可作出诊断,主要是因为该抗体具有_的优点。解析:(1)制备单克隆抗体过程中,用到的动物细胞工程技术有动物细胞融合和动物细胞培养。(2)免疫后的 B 淋巴细胞不能分裂增殖,鼠骨髓瘤细胞能不断分裂增殖。在 HAT 培养基中加入氨基嘌呤,阻断了细胞 DNA 合成的 D 途径,但 DNA 合成的 S 途径没有被阻断,结果未融合的细胞(包括骨髓瘤细胞和淋巴细胞)以及同种融合细胞(包括骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞融合、淋巴细胞与淋巴细胞融合)因不能增殖而死亡,由此可判断骨髓瘤细胞 DNA 合成存在D 途径。(3)在多孔细胞培养板上对选择培养的杂交瘤细胞进行培养时,先将细胞悬液稀释到 710 个细胞/mL,再在每个培养孔中滴入 0.1 mL 细胞稀释液的目的是使每个孔内不多于一个细胞,从而实现单克隆培养。(4)单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的优点。答案:(1)动物细胞融合 动物细胞培养(2)D(3)使每个孔内不多于一个细胞,达到单克隆培养的目的(4)特异性强、灵敏度高6(12 分)tPA 是机体在凝血平衡调节中发挥关键性作用的蛋白质,如图是利用奶牛乳腺生产 tPA 的图解,据图回答下列问题:(1)tPA 基因在体外迅速扩增需用到_酶。要使 tPA 基因在奶牛的乳腺细胞中特异性表达,需在其前面加上_。(2)过程是_,未受精的卵细胞应培育至_期,转基因牛的培育成功证明了_6_。(3)过程胚胎移植中用于移植的胚胎是_。移入的胚胎能够在受体母牛体内存活的原因是_,同时能够在子宫内建立正常的生理和组织上的联系。(4)乳腺生物反应器生产医用人体蛋白比工程菌有优势,是由于乳腺细胞有较强的_
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