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1随堂真题演练随堂真题演练 4040 微生物的培养与应用微生物的培养与应用(2016高考全国卷)空气中的微生物在重力等作用下,可以一定程度地沉降。某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物,以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。实验步骤如下:配制培养基(成分:牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O);制作无菌平板;设置空白对照组和若干实验组,进行相关操作;将各组平板置于 37 恒温箱中培养一段时间,统计各组平板上菌落的平均数。回答下列问题:(1)该培养基中微生物所需的氮来源于_。若要完成步骤,该培养基中的成分 X 通常是_。(2)步骤中,实验组的操作是_。 (3)若在某次调查中,某一实验组平板上菌落平均数为 36 个/平板,而空白对照组的一个平板上出现了 6 个菌落,这种结果说明在此次调查中出现了_现象。若将 30(即 366)个/平板作为本组菌落数的平均值,该做法_(填“正确”或“不正确”)。解析:(1)牛肉膏和蛋白胨都含有蛋白质的水解产物,都可以作为氮源;观察菌落需利用固体培养基,因此可推知若要完成步骤,该培养基中的成分 X 通常是凝固剂,如琼脂。(2)实验组的各组构成对比实验,设计要依据单一变量原则,结合实验目的:欲用平板收集教室空气中的微生物,以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况,可知步骤中,实验组的操作是将各实验组平板分别放置在教室不同高度的位置上,开盖暴露一段时间。(3)若在某次调查中,某一实验组平板上菌落平均数为 36 个/平板,而空白对照组的一个平板上出现了 6 个菌落,这种结果说明在此次调查中出现了污染现象。该污染菌可能对空气中的其他微生物的生长无影响也可能有影响,因此将 30(即 366)个/平板作为本组菌落数的平均值,该做法不正确。答案:(1)牛肉膏、蛋白胨 琼脂(2)将各实验组平板分别放置在教室不同高度的位置上,开盖暴露一段时间(3)污染 不正确(2015高考全国卷)已知微生物 A 可以产生油脂,微生物 B 可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题:(1)显微观察时,微生物 A 菌体中的油脂通常可用_染色。微生物 A 产生的油脂不易挥发,可选用_(填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”)从菌体中提取。2(2)为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物 B 的单菌落,可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样,并应选用以_为碳源的固体培养基进行培养。(3)为了确定微生物 B 产生的脂肪酶的最适温度,某同学测得相同时间内,在 35 、40 、45 温度下降解 10 g 油脂所需酶量依次为 4 mg、1 mg、6 mg,则上述三个温度中,_条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度,应围绕_设计后续实验。解析:(1)生物组织中的油脂能被苏丹(或苏丹)染成橘黄色(或红色)。(2)为了筛选出能产生脂肪酶的微生物 B 的单菌落,我们应选用只能让该菌落生长的选择性培养基,因此只能选用以油脂作为唯一碳源的固体培养基。(3)温度影响酶的活性,在三个温度中,45 时需酶量最高,说明酶活性最低;在三个温度实验中 40 时所需酶量最少,35 时和 45 时所用酶量多,说明酶的最适温度介于 35 和 45 之间,因此应围绕 40 设计不同温度梯度,进行后续实验。答案:(1)苏丹(或苏丹) 萃取法 (2)油脂(3)45 40(高考全国卷)为了调查某河流的水质状况,某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量,并进行了细菌分离等工作。回答下列问题:(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前,随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间,这样做的目的是_;然后,将 1 mL 水样稀释 100 倍,在 3 个平板上用涂布法分别接入 0.1 mL 稀释液;经适当培养后,3 个平板上的菌落数分别为 39、38 和37。据此可得出每升水样中的活菌数为_。(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时,接种环通过_灭菌,在第二次及以后的划线时,总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是_。(3)示意图 A 和 B 中,_表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀,一部分进行静置培养,另一部分进行振荡培养。结果发现:振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是:振荡培养能提高培养液中_的含量,同时可使菌体与培养液充分接触,提高_的利用率。3解析:(1)为了确定培养基的灭菌是否合格,微生物学实验一般会设置空白对照:随机取若干灭菌后的不接种的培养基在相同条件下培养一段时间,观察培养基上是否有菌落生成,若无菌落生成说明灭菌合格;0.1 mL 稀释液中平均有(393837)/338 个活菌,则每毫升稀释液中活菌的数目为 38/0.1380,则稀释前每毫升水样中活菌数目为3801003.8104,则每升水样中活菌数目为 3.81041 0003.8107。(2)接种时接种环需要灼烧灭菌;在第二次及以后每次划线时,总是从上一次的末端开始划线,这样做的目的是通过划线次数的增加,使每次划线时菌体的数目逐渐减少,以便得到单个菌落。(3)由题图可知,B 图菌落分布相对均匀,应为稀释涂布平板法接种的结果。(4)振荡培养可以增加液体培养基的氧气含量,促进好氧型微生物的生长,另外振荡培养还可以使菌体与培养液充分接触,提高营养物质的利用率。答案:(1)检测培养基平板灭菌是否合格 3.8107(2)灼烧 将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落(3)B (4)溶解氧 营养物质课时作业1(2018武汉调研)如表所示为培养某种微生物的培养基配方,请回答有关问题:KH2PO4Na2HPO4MgSO47H2O葡萄糖尿素蒸馏水1.4 g2.1 g0.2 g10.0 g1.0 g定容至1 000 mL(1)该培养基只允许分解尿素的细菌生长,这种培养基称为_培养基。该培养基会抑制其他种类微生物生长,其原因是该培养基_。(2)若要通过统计培养基中菌落数来估计样品中的细菌数,上述培养基中还需要添加的成分是_,接种时应采用_法,该方法接种培养后的菌落,不可能是图中的_。(3)从土壤中分离出分解尿素的细菌后,要对其做进一步的鉴定,可在上述培养基中加入_指示剂,培养该菌后,如果指示剂变_,可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。(4)某同学用 0.1 mL 稀释液在稀释倍数为 106的平板中测得菌落数的平均值为 163,则每毫升样品中的细菌数是_个。答案:(1)选择 以尿素为唯一的氮源4(2)琼脂 稀释涂布平板 D(3)酚红 红(4)1.631092(2018黑龙江大庆中学模拟)回答与微生物实验室培养有关的问题:(1)在制备固体培养基时需加入的常用凝固剂是_。若培养基需调节 pH,则应在灭菌之_(填“前”或“后”)调节。(2)为防止外来杂菌入侵,对_等可采用干热灭菌法进行灭菌。(3)如图为平板划线法接种后的示意图。在划线接种的整个操作过程中,对接种环至少需进行_次灼烧灭菌。接种后盖上皿盖,将平板_放入恒温箱中培养,这样放置的目的是_。(4)用稀释涂布平板法统计活菌数目时,每隔一个“时间间隔”统计一次菌落数目,最后选取_作为结果,这样可以防止因培养时间不足而遗漏菌落的数目。解析:(1)制备固体培养基通常加入的凝固剂是琼脂。培养基若在灭菌后调 pH,可造成污染,故培养基调 pH 应在灭菌前进行。(2)灭菌的方法通常有高压蒸汽灭菌、干热灭菌和灼烧灭菌三种。采用干热灭菌的通常有玻璃器皿和金属用具。(3)平板划线法接种过程中需在接种前、每次划线后对接种环进行灼烧灭菌。图中共接种 5 个区域,故接种环至少需要进行 6 次灼烧灭菌处理。微生物培养过程中,易产生冷凝水,为防止水珠滴在培养基表面造成污染,培养时需将平板倒置。(4)用稀释涂布平板法统计活菌数目时,要以菌落数目稳定时的记录为最终结果,这样可以防止因遗漏而导致统计结果偏小。答案:(1)琼脂 前 (2)玻璃器皿和金属用具 (3)6 倒置 避免培养基被污染和防止培养基水分过快挥发 (4)菌落数目稳定时的记录3临床使用抗生素前,有时需要做细菌耐药实验。实验时,首先要从病人身上获取少量样本,然后按照一定的实验步骤操作,以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题:(1)为了从样本中获取致病菌单菌落,可用_法或_法将样本接种于固体培养基表面,经过选择培养、鉴别等步骤获得。(2)取该单菌落适当稀释,用_法接种于固体培养基表面,在 37 培养箱中培养 24 h,使其均匀生长,布满平板。(3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性,将分别含有 A、B、C、D 四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置,培养一段时间后,含 A 的滤纸片周围出现透明圈,说明该致病5菌对抗生素 A_;含 B 的滤纸片周围没有出现透明圈,说明该致病菌对抗生素B_;含 C 的滤纸片周围的透明圈比含 A 的小,说明_;含 D 的滤纸片周围的透明圈也比含 A 的小,且透明圈中出现了一个菌落,在排除杂菌污染的情况下,此菌落很可能是抗生素 D 的_。(4)根据上述实验结果,为达到抗菌目的,最好应选用抗生素_。解析:(1)实验室中对微生物纯化培养时,常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。(2)若让已经获得的单个菌落在固体培养基上大量且均匀繁殖,常用玻璃涂布器把稀释的菌液均匀涂满整个平板。(3)对某种抗生素越敏感的致病菌,在该抗生素存在的范围内,越不易生存,形成的透明圈就越大。但是,如果在透明圈中还有菌落生存,则说明这个菌落的细菌耐药性很强。(4)通过(3)可知,在应用时,要想杀死某致病菌,就得选择能使该致病菌大量死亡,即产生的透明圈大的那种抗生素。答案:(1)平板划线 稀释涂布平板 (2)稀释涂布平板(3)敏感 不敏感 该致病菌对 C 的敏感性比对 A 的弱 耐药菌 (4)A4(2018吉林长春模拟)下面是筛选抗链霉素大肠杆菌的实验步骤及相关图解。实验步骤:把大量对链霉素敏感的大肠杆菌接种在不含链霉素的培养基 1 的表面,进行培养。待其长出密集的小
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