6.46.4芳酸及其酯类药物的分析芳酸及其酯类药物的分析芳酸及其酯类药物系指分子结构中 含有取代苯基的一类羧酸化合物。苯环羧基-COOH 直接与苯环相连.如 水杨酸类、苯甲酸类药物;或羧基 为磺酸基或通过烃氧基与苯环相 连，如其他芳酸类。其他取代基：如酚羟基、氨基等一、典型药物的分类及理化共性w 本类药物多为固体，具有一定的熔点，除钠 盐溶于水外，一般溶于乙醇、乙醚等有机溶 剂，难溶于水，但含有游离羧酸的药物均可 溶于氢氧化钠溶液。苯甲酸类 水杨酸类 其他芳酸类1.典型药物结构一）水杨酸类水杨酸（salicylic acid）阿司匹林（aspirin)世界上应用最广泛的解热、镇痛、消炎药对氨基水杨酸钠（sodium aminosalicylate)双水杨酯（salsalate)贝诺酯（benorilate)1.酸性 水杨酸（pKa2.95)阿司匹林（pKa3.49）苯甲酸 （pKa4.25)碳酸（pKa6.3)。2. 溶解性: 均为固体，有一定溶点。除钠盐溶于水，其余 不溶。3. UV和IR光谱特性：分子结构中具有苯环、有UV和IR特 征吸收。4. 芳伯氨基和酚羟基特性：5. 水解特性：ASA、双水杨酯及其制剂应检查水杨酸、对 氨基水杨酸钠和贝诺酯检查间氨基酚和对氨基酚。2.主要理化性质1.典型药物结构苯甲酸及其钠盐 (benzoic acid ）二）苯甲酸类羟苯乙酯 (ethylparoben) 丙磺舒(probenecid) 甲芬那酸(mefenamic acid)2.主要理化性质1. 溶解性: 均为固体，有一定溶点。除钠盐溶于水，其 余不溶。2. UV和IR光谱特性：分子结构中具有苯环,有UV和IR特 征吸收。3. 分解反应特性：苯甲酸钠分解为苯甲酸；丙磺舒分解 为 SO2。4. 酸性：苯甲酸、丙磺舒和甲芬那酸有游离的羧基 ，可 用NaOH直接滴定测定其含量。5. 苯甲酸盐的中性溶液与三氯化铁反应生成赭色沉淀。三）其他芳酸类 1.典型药物结构氯贝丁酯（clofibrate）布洛芬（ibuprofen）（二）主要理化性质1、氯贝丁酯为无色或黄色油状液体，有特臭， 易溶于有机溶剂，难溶于水。可加碱水解。2、布洛芬为固体，具一定m.p。易溶于有机溶剂，难溶于水。3、均具有UV和IR特征吸收光谱。4、均可用氢氧化钠滴定液进行滴定。一）与三氯化铁反应含有酚羟基药物可与FeCl3反应。二 、鉴别试验Ar-OH + FeCl3紫堇色铁配位化合物pH461.水杨酸类水杨酸的三氯化铁反应在中性或弱酸性条件 下，水杨酸与试液生成配位化合物，在中性时呈红 色，弱酸性时呈紫色。本反应的适宜pH为4-6，在强酸性溶液中配位化合物分解。w 阿司匹林加热后也可与FeCl3试液反应呈紫堇色。w 对氨基水杨酸钠加稀盐酸呈酸性后，与FeCl3 试液反应呈紫堇色；w 贝诺酯加氢氧化钠试液煮沸后，加盐酸呈微 酸性后，与FeCl3试液反应呈紫堇色。w 水杨酸酯的稀溶液和FeCl3试液反应呈紫色。苯甲酸盐的中性溶液，与三氯化铁试液可生成碱式 苯甲酸铁盐的赭色沉淀。 丙磺舒与NaOH成钠盐后，在pH 5.06.0中与FeCl3 生成米黄色沉淀。2.苯甲酸类3.与羟胺、铁盐反应（其他芳酸类）u 布洛芬与高氯酸羟胺，N，N-双环基己羧二亚 胺及高氯酸铁反应，即显紫色JP（15）方法。u氯贝丁酯与盐酸羟胺，三氯化铁试液反应，生成 羟肟酸铁配位化合物。用于羧酸及其酯类的鉴别。二）重氮化-偶合反应（芳香第一胺反应）凡是分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基 的药物均可反应。碱性萘酚 偶氮染料1.对氨基水杨酸钠 NaNO2试液PAS-Na H+ 重氮盐 （无色）橙红色或猩红色 请问，贝诺 酯有该反应 吗？2. 水解后反应 贝诺酯具有潜在芳伯氨基3. 甲芬那酸与对-硝基苯重氮盐在NaOH介质中偶合 产生橙红色。+ K2Cr2O7 深蓝色 棕绿色甲芬那酸 + H2SO4黄色 绿色荧光JP(15)三）氧化反应甲芬那酸的硫酸溶液，加热后显黄色，并有绿色 荧光，与重铬酸钾试液反应，即呈深蓝色，随即变为 棕绿色。1.阿司匹林等芳酸酯 Na2CO3试液 水杨酸钠醋酸钠 H+化 水杨酸（白色）醋酸（臭味 ）ASA四）水解反应2.双水杨酯也有类似反应：双水杨酸和氢氧化钠溶液煮沸后，加稀盐酸酸化，生成白色水杨酸沉淀。3.羟苯乙酯的乙醇溶液煮沸后，可与硝酸汞试液反应生成沉淀，上清液呈红色。4. 氯贝丁酯加碱水解后，可与盐酸羟胺及三氯化铁生成紫色异羟肟酸铁。1. 丙磺舒加热分解，生成SO2气体，有臭味2. 丙磺舒与NaOH熔融分解成Na2SO3, 经硝酸氧化 成Na2SO4。 五）分解产物反应1. 测定max ；min。例如：布洛芬用0.4%NaOH溶液制备0.25mg/ml；max ： 265nm, 273nm; min。245nm, 271nm。2. 在max 处测定一定浓度供试液的吸收度A。例如：羟苯乙酯，5g/ml max =295nm; A = 0.483. 在max 处测定供试液的百分吸收系数。例如：贝诺酯在max =240nm; E1%1cm = 730760六）紫外吸收光谱法4. 在规定的波长测定吸收度比值（即双波长吸收 度比值法） 例如：对氨基水杨酸钠10g/ml; A265/A299 = 1.501.56 再例如：甲芬那酸14g/ml; A278280/A348352 = 1.151.30 本类药物的紫外吸收光谱特征七）IR吸收光谱中国药典（2005）采用此法用于大多数本 类药物的鉴别。37002900c m-1N-H、 O-H1640cm-1N-H1580cm-1 1500cm-1C=C1300cm-1C-N1188cm-1C-O对氨基水杨酸钠的红外吸收图谱（一）阿司匹林中特殊杂质的检查主要项目有：游离水杨酸、溶液澄清度、易碳化物。三、特殊杂质检查水杨酸的检查：ASA中SA的来源有： （1）生产过程中乙酰化不完全；（2）贮藏过程中水解产生。检查原理：利用阿司匹林结构中无酚羟基，不与高铁盐（ Fe3+)作用，而水杨酸则可与Fe3+反应生成紫堇色，在相同条件 下与一定量水杨酸对照液生成的色泽进行比较，不得更深，从 而控制游离水杨酸的限量。阿司匹林原料与其制剂（片剂、肠溶片、栓剂）均需作本项 检查，限量分别为0.1、0.3%、1.5%、1.0。溶液的澄清度检查酚类、苯酯类杂质。 原理利用杂质与阿司匹林在碳酸钠溶液中的溶解 度差异，规定一定量样品在碳酸钠溶液中应澄清。易炭化物的检查：检查易被硫酸炭化呈色的低分子有机杂质。 检查方法：取供试品0.5g，缓缓加入含硫酸（95.0%） 5ml的比色管中，振摇使其溶解，静置15分钟后观察，溶液 如显色，与对照液（取比色用氯化钴液0.25ml，比色用重 铬酸钾液0.25ml，比色用硫酸铜液0.40ml，加水使成5ml） 比较，不得更深。（二）对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查间氨基酚杂质的检查（1）合成原料中反应未完全留下；（2）在贮藏时受热受潮脱羧（CO2)产生。检查方法双相滴定法 中国药典（2005版）采用双相滴 定法进行。利用PAS-Na不溶于乙醚，而间氨基酚易 溶于乙醚性质，用乙醚萃取后，盐酸（0.1mol/L） 滴定，以消耗一定量盐酸滴定液来控制其限量。检查方法HPLC法 USP(24)采用离子对高效液相色谱法检 查间氨基酚的限量。甲芬那酸是以邻-氯苯甲酸和2，3-二甲基苯胺在Cu的催 化下缩合而成，因此成品药物中要检查铜盐及有关物质。合成工艺：（三）甲芬那酸中特殊杂质的检查铜盐检查法分光光度法：原子吸收分光光度法：取1g样品测定，以铜标 准液对照，限量10ppm。2000版药典方法中国药典（2005版）新方法HPLC法 w 色谱柱：C18 w 流动相：0.05mol/L磷酸二氢铵溶液（Ph5.0）-乙腈-四氢 呋喃（40-46-14） w 检测波长：254nm w 限度：供试品溶液的单个杂质峰面积不得大于对照 品溶液主峰面积的1/5，各杂质峰面积之和不得大 于对照品溶液主峰面积。（五）丙磺舒中杂质的检查检查氯化物、硫酸盐以及有关物质检查（TLC法）（四）氯贝丁酯中特殊杂质的检查对氯酚及挥发性杂质检查：GC、HPLC法（ 略）（六）苯甲酸中易氧化物的检查高锰酸钾氧化滴定法一）酸碱滴定法 1.直接滴定法 基于本类药物-COOH；可用碱直接滴定，如ASA的含量测定。四、含量测定原理：条件： 在中性乙醇中，以酚酞作指示剂；摩尔比为1:1。应用： 多国药典用于双水杨酯、苯甲酸、丙磺舒、布洛芬测 定；USP和BP还用于甲芬那酸的测定。示例：w中国药典（2005）中丙磺舒的含量测定：取本品约0.6g，精密称定，加中性乙醇50ml溶解 后，加酚酞指示剂数滴，用氢氧化钠（0.1mol/L）滴 定。每1ml氢氧化钠滴定液相当于28.54mg的 C13H19NO4S.其中f是滴定液的浓度校正因子，T是滴定度，mg/ml2.水解后剩余滴定法w 原理利用阿司匹林分子中的酯键，先加过量定量的NaOH溶液使之水解，然后用硫酸滴定剩余 的NaOH。例：阿司匹林含量的测定w取阿司匹林1.5040g，准确加入氢氧化钠滴定液（0.5mol/L, f=1.004 ）50.0ml，水浴上煮沸15min，放冷后以酚酞为指示 剂，用硫酸滴定液（0.25mol/L，）滴定，并将滴定结果用空 白试验校正，每1ml氢氧化钠滴定液（0.5mol/L）相当于 45.04mg乙酰水杨酸。样品消耗硫酸滴定液17.05ml，空白消 耗49.95ml，本品含量为？羟苯乙酯的含量测定3. 两步滴定法1. 阿司匹林片剂的含量测定第一步为中和ASA + NaOHASA-Na + H2O水解产物SA + NaOHSA-Na + H2O酸性稳定剂+ NaOH中性盐因片剂中加入了稳定剂酒石酸和枸橼酸，故不能采用直接 滴定法，而须采用先中和与供试品共有的酸（稳定剂及水杨酸 ），再将阿司匹林在碱性条件下水解后进行测定的方法。w 第二步：水解与测定2. 氯贝丁酯含量测定 第一步：中和酸性杂质第二步：水解与测定二）亚硝酸钠滴定法对氨基水杨酸钠有芳伯氨基，在HCl中与NaNO2发生重氮化反应Ar-NH2 + NaNO2 + 2HClAr-N2Cl + NaCl + 2H2O因此可用亚硝酸钠滴定法测定其含量，此 法在下节重点讨论。这是有机酸芳酸碱金属盐类常用的测定方法，在水相中 加入与水不相溶的有机溶剂（如乙醚），并置分液漏斗中用 标准酸进行滴定。例：苯甲酸钠的含量测定，以甲基橙为指示剂，用盐酸标准 液滴定至水层显橙红色。滴定过程中产生的苯甲酸不断萃取入有机溶剂层 中，使滴定反应完全，终点清晰，三）双相滴定法1.直接紫外分光光度法丙磺舒片的测定：Ch.P(2005) 在HCl中，采用百分吸收系数法。BP(1998)在盐酸-乙醇中,采用百分吸收系数法.USP(24)用氯仿提取后，采用对照品比较法。 四）紫外分光光度法2.离子交换-紫外分光光度法氯贝丁酯及其制剂 Ch.P(2000)采用酸碱滴定法；当含有酸性杂质对氯酚时，可 采用强碱性阴离子交换树脂吸附酸性杂质 。在甲醇溶液中，226nm波长处测定吸光度，采用标准品作对照。（三）柱分配色谱-紫外分光光度法阿司匹林胶囊的含量测定Ch.P(2005)阿司匹林肠溶胶囊、栓剂、及泡腾片、布洛芬缓释胶囊、滴剂、口服液、等的含量测定采用此法。五、HPLC法例：ASA栓剂的HPLC测定小 结1、芳酸及其酯类药物的结构特征