目的与要求：目的与要求： qq掌握掌握LowryLowry氏法测定蛋白质含量的氏法测定蛋白质含量的 原理及方法；原理及方法； q掌握分光光度法实验原理实验原理： qq 在碱性条件下蛋白质的肽键与在碱性条件下蛋白质的肽键与CuCu2+2+螯螯 合，形成蛋白质合，形成蛋白质- -铜复合物。（双缩脲反铜复合物。（双缩脲反 应应 Biuret ReactionBiuret Reaction） qq 蛋白质分子中带有酚基的酪氨酸极易蛋白质分子中带有酚基的酪氨酸极易 使酚试剂中的磷钼酸使酚试剂中的磷钼酸- -磷钨酸还原，生成磷钨酸还原，生成 钼蓝钼蓝- -钨蓝蓝色化合物，蓝色深浅与蛋白钨蓝蓝色化合物，蓝色深浅与蛋白 质含量成正比。利用蓝色深浅与蛋白质浓质含量成正比。利用蓝色深浅与蛋白质浓 度成正比的关系可绘制标准曲线，测定样度成正比的关系可绘制标准曲线，测定样 品中蛋白质含量。（还原反应）品中蛋白质含量。（还原反应）操作步骤操作步骤1.取三支试管分两组，按下表操作 试管编号 0 1 2 牛血清白蛋白标准 - 1.0 - 蒸馏水(mL) 1.0 - - 待测蛋白质溶液(mL) - - 1.02. 各管加入试剂甲5ml混匀放置10分钟。 3.各管加入试剂乙0.5ml后立即混匀，37 水浴30分钟后用500nm单色光比色测定。 4.计算 样品蛋白质含量（ug/ml）结果与计算结果与计算：根据测定管光密度值计算血清蛋白质根据测定管光密度值计算血清蛋白质 含量，含量，C C测测=A=A测测* *C C标标/C/C测测注意事项：注意事项： qq 各管加酚试剂时必须快速，并立即摇匀，不应出现 混浊。 q 移液管使用前要看清楚刻度和是否写着快、吹，如 有则需要用洗耳球吹出剩余液体 q 进行测定时，加F olin酚试剂时要特别小心，因 为该试剂仅在酸性pH条件下稳定，但上述还原反应只在 pH=10的情况下发生，故当Folin一酚试剂加到碱性的铜 蛋白质溶液中时，必须立即混匀，以便在磷钼酸磷 钨酸试剂 被破坏之前，还原反应即能发生。 q分光光度计使用前需预热，绝对调零和空白管调节透 光度为100%。