*1常见微生物标本的采集、保存与送检茂名市CDC流行病学培训班 麦充志 2011、3*2碗与筷子的关系*3标本采集l采集时间-何时采l采集种类-采什么l采集方法-怎么采l采集数量-采多少*4怎么采l样品采集程序采样用物品准备 采样程序方法 采样记录样品编号样品保存样品送检*5采多少l所有标本在采集时立即分装，一式 N 份(不同检验项目、重复实验、其它实验室复核、留样) *6l样本采集的一般需要量样品种类 检验目的 样品量l 饮用水 全分析及致病菌 5 ll 液体食品 致病菌或毒物分析 可疑食物200mll 固体食品 致病菌或毒物分析 可疑食物200gl 呕吐物 致病菌或毒物分析 50g(ml)l 洗胃液 致病菌或毒物分析 200mll 腹泻物 致病菌或毒物分析 50g(ml)l 血液 病原分离、抗体分析 5mll 脑脊液 病原分离 2mll 皮损分泌物 病原分析 灭菌生理盐水浸泡棉签涂取*7标本标签内容最小包装（每个标本）每个包装箱每批样本后要附上一个样本清单，详 细列出此批样本的名称、状态和注意 事项。*8样本编号唯一性样本来源从什么物质、材料中采集的，如病理采集的肝 脏就可标注为某某患者肝脏样本数量包装中样本的数量，如：此包装中同时采集了2 块肝脏样本，就要标注为2 采样时间：采样地点：采样人：样本处理情况：抗凝剂 、运送培养基、标本状况（开封食品 ）*9标本的保存、包装、运送样品的保存容器、介质、温度样品的包装感染性样本样品的运送标本应由专业人员专人运送，最好使用 专车交接手续*10怎么检l对重大事件的毒物鉴定或样本检测要同时 送数家具有鉴定检验资质的实验室同步开 展工作，避免因实验室管理和技术因素对 结果的影响。*11要达到有效控制疫情的目的，必须做到 v早期发现和报告可疑病例； v快速的流行病学调查； v实验室对病原体的快速确诊； v实施有效的控制措施。*12实验室诊断的目的意义l l识别暴发、确定病因识别暴发、确定病因 l l确定传染来源确定传染来源l l确定流行范围确定流行范围l l确定传播链确定传播链 l l发现特殊的毒株发现特殊的毒株l l判断院内交叉感染判断院内交叉感染l l疫苗实施项目的考核疫苗实施项目的考核 l l仲裁依据仲裁依据*13实验室对病原体的快速确诊依靠技术和试剂储备充分收集适当的、足够的标本正确的包装和快速运送到实验室适当的生物安全和消毒措施，以减少疾病 进一步扩散的可能。*14围绕病因假设,确定检验项目，采集标本l专业知识、经验l充分物质准备l高度的责任心*15在去现场之前，应考虑到以下的问题在进行临床和流行病学信息评估时，需考虑引 起暴发的潜在病原体； 地方性疾病谱和流行季节谱可进一步缩小可能 的因素； 同时还必须考虑到多种病原体感染可出现相似 的临床表现，因而需要采集多种类型的标本用 于定义暴发的原因。*16采样基本原则l尽早采集、根据可疑的病原体，选择不同采集 时机和标本种类、在抗生素应用前采集、遵守 无菌操作、正确保存和运送。l容器应密封不易碎，标本不得污染容器的口和 外壁。*17标本种类和采集时间血液标本l全血标本采集l血清标本采集l第一份血清应尽早（最好在发病后7天内）采集l第二份血清应在发病后第34周采集l在病愈出院或死亡前采集血标本1份*18血液标本的采集目的：血培养、分离血清l血培养：怀疑是细菌性疾病，特别是脑膜炎或 疑似菌血症的病人均要抽血。l在病人高热时可采取静脉血3ml，注入双相血 培养瓶（也可用盛有30ml葡萄糖肉汤的三角 瓶）内增菌培养。l分离血清用于抗体检测。在疾病急性期和恢复 期各采血2-3ml*19l血培养瓶含有0.025%SPS（聚茴香脑磺酸钠 sodium polyanethol sulfonate SPS），可以 起到抗凝、抗吞噬、抗鳌合的作用；还含有树 脂、炭颗粒，可吸收血液中的抗生素，提高细 菌培养的阳性率。l血量3ml时，将血分别放入两个血培养瓶， 若瓶子装血太多将降低降低阳性率。*20l用真空负压采血管采集血液标本5ml，室温静 置30分钟，15002000rpm离心10分钟，收 集血清于2ml无菌螺口塑料管中*21标本种类和采集时间呼吸道标本l上呼吸道标本：咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物 、咽漱液、深咳痰液l下呼吸道标本：呼吸道抽取物、支气管灌洗液 、肺组织活检标本l尽早采集上述标本，发病一至两周也可采集*22*23呼吸道标本*24拭子的选择 l应使用头部为合成纤维的拭子（例如， 聚酯纤维），用铝或塑料做柄。不推荐 棉拭子和木柄。 *25*26急性呼吸道综合症的可疑暴发可能的病原体白喉 链球菌性咽炎 猩红热汉坦 病毒 肺综 合症百日咳 嗜血流感杆菌 呼吸道合胞病毒肺链 军团 肺炭疽 肺鼠疫 支原体喉拭子 血清血清鼻咽拭子 血清血培养 血清 痰、尿 肺泡灌洗液流感 禽流感咽拭子 气管吸取物 血清*27需要准备的材料l运送培养基、拭子、压舌板l消毒的螺旋盖管、真空采血管、5ml注射器l75%酒精、压脉带、记号笔等。*28运送培养基的选择l维持活力，不增菌的非营养性半固体培 养基lStuarts, Cary-Blair, Amies, STGG 四种主要的运送培养基。*29127C Soft aluminum wire - green cap 软金属，易弯曲.143C Regular aluminum wire - orange cap 男性尿道拭子139C Double plastic swabs - red cap 咽拭子、阴道拭子、伤口和皮肤*30195C Flexible twisted wire - blue cap Designed specifically for nasopharyngeal sampling. Very flexible, will bend and yield when in contact with posterior nasopharyngeal wall. Features a safe loop shaped wire tip covered with soft rayon.鼻咽拭子标本*31*32Stuarts主要成分l甘油磷酸钠l硫代硫酸钠l氯化钙l亚甲兰l琼脂l炭粉*33Stuarts运送培养基*34Cary-Blair运送培养基l克服在运送肠道菌时，因这些菌含有甘 油磷酸脱氢酶，造成低度氧化，使细菌 能代谢而生长。l特别适合于运送含弧菌的标本。研究显 示，在28情况下，Cary-Blair可维持弧 菌活力22天，沙门氏、志贺氏菌49天； 7080副溶血弧菌可达35天。 *35Cary-Blair运送培养基*36100株菌 StuartsAmies时间菌株存活数 菌株存活数24 小时91 98 48小时79 87 72小时56 77 Amies运送培养基-Stuarts的改良产品（含活性炭）用磷酸盐缓冲液代替甘油磷酸钠等*37STGG运送保存培养基(Skim-milktrytone glucose glycerol, STGG）脱脂牛奶粉（Difco） 2g胰酶大豆肉汤(TSB,Oxoid) 3g葡萄糖 0.5g甘油 10ml消毒蒸馏水 100ml*38v鼻咽拭子插入STGG培养基后，可立即冻存标本 。报告显示，置冰上几小时后再放置-70，肺炎 链球菌、嗜血流感杆菌的活力仍能维持，在-20 环境可达8周。v置于-70的STGG中保存的鼻咽分泌物，其肺炎 链球菌的分离率与直接接种平板相似，保存于- 20分离率亦可接受,而4环境保存5天，分离 率不理想。 STGG运送保存培养基*39需要采集的标本上呼吸道感染：l鼻咽拭子l咽拭子l血 下呼吸道感染：l痰标本l支气管灌洗液l胸液l血*40上呼吸道可能的致病菌l-溶血性链球菌：A、B、C、G群链球菌等； l肺炎链球菌、嗜血流感杆菌、金黄色葡萄球菌 ；l白喉棒状杆菌、百日咳等*41下呼吸道感染性疾病可能的致病菌l肺炎链球菌l嗜血流感杆菌l肠球菌l肺炎克雷伯氏菌l-溶血性链球菌l军团菌l百日咳菌属 l金黄色葡萄球菌l脑膜炎奈瑟氏菌属l假单胞菌l肺炎支原体l肺炎衣原体*42咽拭子的采集l对健康人群或病人密切接触者进行带菌 检验时一般采咽拭子。l用无菌棉拭子擦取悬雍垂后之鼻咽部粘 膜数下，应避免接触口腔内其它部分， 直接接种到巧克力双抗平板或0.5%葡萄 糖增菌肉汤中。*43l干采l用2根聚丙烯纤维头 的塑料杆拭子同时擦 拭双侧咽扁桃体及咽 后壁，将拭子头浸入 含3ml采样液的螺口 管中，尾部弃去，旋 紧管盖。*44咽拭采集的正确与否 ？wrongright*45鼻拭子的采集l将1根聚丙烯纤维头的塑 料杆拭子轻轻插入鼻道 内鼻腭处，停留片刻后 缓慢转动退出。取另一 根聚丙烯纤维头的塑料 杆拭子以同样的方法采 集另一侧鼻孔。上述两 根拭子浸入同一含3ml 采样液的管中，尾部弃 去，旋紧管盖。*46鼻咽抽取物或呼吸道抽取物的采集用与负压泵相连的收集器从鼻 咽部抽取粘液或从气管抽取呼 吸道分泌物。将收集器头部插 入鼻腔或气管，接通负压，旋 转收集器头部并缓慢退出，收 集抽取的粘液，并用3ml采样 液冲洗收集器1次（亦可用小 孩导尿管接在50ml注射器上来 替代收集器）。*47咽漱液的采集l用10ml不含抗菌素的采样 液漱口。漱口时让患者头部 微后仰，发“噢”声，让洗 液在咽部转动。然后将咽漱 液收集于50ml无菌的螺口 塑料管中。无条件的可用平 皿或烧杯收集咽漱液并转入 10ml螺口采样管中。*48深咳痰液的采集l要求病人深咳后，将咳出的痰液收集于 50ml含3ml采样液的螺口塑料管中*49呼吸道灌洗液的采集l将收集器头部从鼻孔或气管插口处插入气管（ 约30cm深处），注入5ml生理盐水，接通负 压，旋转收集器头部并缓慢退出。收集抽取的 粘液，并用采样液涮洗收集器1次（亦可用小 孩导尿管接在50ml注射器上来替代收集）*50常用的病毒采样保存液成分lpH7.07.6的Hanks液或MEM/DMEM液或生理盐水。在采样液中需加入抗菌素，可用青霉素（终浓度为100U/ml）、庆大霉素（终浓度为1mg/ml）和抗真菌药物（终浓度为2g/ml）*51病毒采样盒咽拭子器具 *52出血点渗液接种0.5% 葡萄糖增 菌肉汤或 直接接种 含双抗巧 克力平板 和血平板接种增菌肉汤 或直接接种巧 克力平板和血 平板咽拭子血液接种血 培养瓶分离血 清检测 IgG涂片G 染色*53l患者站立或床上坐直，在收集前嘱咐患 者用开水含漱口腔；深呼吸，从深部咳 痰，将痰吐入已消毒的广口螺旋盖管（ 2550ml）内；痰量1-2ml，如不足 ，应重复上述步骤。痰标本的采集*54接种培养板的选择l根据所要检测的目的菌而定，一般选择 两种平板：血平板和巧克力平板l链球菌属：新鲜绵羊血（