人类染色体G显带标本的制 备 原理n常规制备的染色体标本经烤片后，用热碱、各 种蛋白酶、尿素、去垢剂或其它溶液等预处理 再以Giemsa 染色，在油镜下可看到染色体两 臂显示出着色深浅不同的横纹。最常用的是胰 蛋白酶法。n可能的机理是：G带区含有较丰富的A-T 对， 在间期核呈固缩状态，而且是DNA晚复制区之 一。Giemsa染料在G带区是与DNA结合，而且 与结合DNA的染色质非组蛋白有关。nGiemsa染料是噻嗪-曙红染料，染色体的着色有赖 于在原位形成噻嗪-曙红（21）的沉淀物。着色 首先取决于二个噻嗪分子同DNA结合，在此基础 上再结合一个曙红分子，其次取决于一个疏水环 境，以利于染料沉淀而着色。通过胰酶的显带预 处理可除去阴性G带区的疏水蛋白，或使它们的结 构变成更亲水状态。由此可知，在G显带中抽取的 蛋白往往是疏水的，且主要来自阴性G带区。试剂及器材n试剂：胰蛋白酶、0.4%酚红、5% NaHCO3、 Giemsa原液、pH7.4磷酸盐缓冲液，0.85%生理 盐水。 n器材： 37恒温水浴箱、染色缸、刻度吸管、滴 头。实验步骤n取胰酶25mg，溶解于盛有50 ml0.85%生理盐水的 染色缸中，置37恒温水浴箱中，加入0.4%酚红2 滴，混匀，以5% NaHCO3调节pH为6.6-7.0。 实验步骤n待胰酶液温度升至37后，将染色体标本片（ 37烘箱烤片）放入胰酶液中，并轻轻摆动，数 秒（视烤片时间而定）后取出，立即自来水冲洗 。实验步骤n染色：pH7.4磷酸盐缓冲液 4.5 mlGiemsa原液 0.5 ml染色8-10分钟。n自来水冲洗，空气干燥，镜检。 注意事项 n良好的培养效果为，标本片上中期分裂相要多， 且染色体分散要好。 n染色体长度应能适应显带分析技术的要求。nG显带成败之关键取决于胰酶液的浓度和处理时间 之搭配。 实验结果n低倍镜下可看到中期分裂相，进而转至高倍 镜及油镜下观察，可见23对染色体较为饱 满，分布均匀，着色较好，沿染色体长轴可 显出深浅不同的G带横纹。n人类染色体G带歌谣：一秃二蛇三蝶飘，四像鞭炮五黑腰；六号像个 小白脸，七盖八下九苗条，十号长臂近带好， 十一低来十二高；十三、四、五一二一；十六 长臂缢痕大，十七长臂带脚镣，十八白头肚子 饱；十九中间一点腰，二十头重脚飘飘；二十 一好象黑葫芦瓢，二十二头上一点黑；X染色 一担挑，Y染色长臂带黑脚。