微生物及其鉴定简述1微生物及其分类 定义：个体难以用肉眼观察的一切微小生 物之统称。 细胞机构分类分为原核微生物和真核微生 物 非细胞类：病毒和亚病毒。 特征：体小面大、吸多转快、生长繁殖快2 原核微生物(prokaryotic microbe)：指核质和 细胞质之间不存在明显核膜，其染色体由 单一核酸组成的一类微生物。 原核微生物包括古菌（即古细菌）、真细 菌、放线菌、蓝细菌、粘细菌、立克次氏 体、支原体、衣原体和螺旋体。 真核微生物：真菌球菌、藻类(部分)、原生 动物（部分）。3原核生物与真核生物的区别比较项目原核生物真核生物实例细菌、蓝藻、放线菌、衣原体、支原体（支原体细胞最小，且无细胞壁）酵母菌等真菌、衣藻、高等植物、动物细胞大小较小（110微米）较大（10100微米）细胞结构细胞壁不含纤维素，主要成分是肽聚糖；细胞器只有一种，即核糖体；细胞核没有核膜（这是最主要的特点）、没有核仁、没有染色质（体），但有核物质，叫拟核细胞壁的主要成分是纤维素和果胶；有核糖体、线粒体、内质网、高尔基体等多种细胞器；细胞核有核膜、核仁、有染色质（体）主要细胞增殖方式二分裂有丝分裂、无丝分裂、减数分裂代谢类型同化作用多为异养型、少数为自养型（包括光合作用和化能合成作用自养型），异化作用多为厌氧型、少数为需氧型。光合作用的部位不是叶绿体而是在光合片层上；有氧呼吸的主要部位不在线粒体而是在细胞膜同化作用有的是异养型、有的为自养型，异化作用有的为厌氧型、有的为需氧型。光合作用的部位是叶绿体；有氧呼吸的主要部位是线粒体生殖方式无性生殖（多为分裂生殖）有性生殖、无性生殖遗传方面遗传物质DNADNADNA分布拟核（控制主要性状）；质粒（控制抗药性、固氮、抗生素生成等性状）细胞核（控制细胞核遗传），线粒体和叶绿体（控制细胞质遗传）基因结构编码区是连续的，无内含子和外显子编码区是不连续的、间隔的，有内含子和外显子基因表达转录产生的信使RNA不需要加工；转录和翻译通常在同一时间同一地点进行（在转录未完成之前翻译便开始进行）转录产生的信使RNA需要加工（将内含子转录出的部分切掉，将外显子转录出的部分拼接起来）；转录和翻译不在同一时间同一地点进行（转录在翻译之前，转录在细胞核内、翻译在细胞质的核糖体）遵循遗传规律不遵循基因分离定律和自由组合定律细胞核遗传遵循基因分离定律和自由组合定律，细胞质遗传不遵循基因分离定律和自由组合定律可遗传变异的来源基因突变基因突变、基因重组、染色体变异进化水平低高4病毒定义:一类由核酸和蛋白质等少数几种成分组 成的“非细胞生物”，但是它的生存必须依赖 于活细胞。 结构：蛋白质衣壳和核酸5病原微生物引起人和动物致病的微生物叫病原微生物，有八大类 ： 1,真菌：引起皮肤病，深部组织上感染。 2,放线菌：皮肤，伤口感染。 3,螺旋体：皮肤病，血液感染 如梅毒，钩端螺旋体 病。 4,细菌：皮肤病化脓，上呼吸道感染，泌尿道感染 ，食物中毒，败血压症，急性传染病等。 5,立克次体：斑疹伤寒等。 6,衣原体：沙眼，泌尿生殖道感染。 7,病毒：肝炎，乙型脑炎，麻疹，艾滋病等。 8,支原体：肺炎，尿路感染。6临床微生物的意义结核、病毒性肝炎、龋齿和牙周病、性病等均由病原微生物引起 (1)感染是疾病死因的重要原因之一 肿瘤病人本身免疫力低，防止和控制感染是非常重要的，这类病人感染很容易造 成死亡。 呼吸系疾病：主要是感染。 损伤包括创伤、烧伤等，感染的控制极为重要 脑血管疾病、心脏疾病等，也很容易发生感染。 (2)病原微生物与某些肿瘤密切相关 HCV、TTV皆与肝癌有关 幽门螺杆菌与胃癌有关 HCMV与成神经细胞癌、Wilm瘤、前列腺瘤、宫颈癌、睾丸癌、Kaposi肉瘤、结 肠癌等有关，HSV-2与宫颈癌有关等 (3)病原微生物与心脏病的关系 风湿性心脏病溶血性链球菌 病毒性心肌炎和心包炎柯萨奇病毒B组 肺炎衣原体与冠状动脉硬化和心脏病的发生有关 甲链和金葡菌等可引起急性和亚急性细菌性心内膜炎7临床微生物 葡萄球菌属 链球菌属 肠球菌属 奈瑟菌属和卡他莫拉菌 肠杆菌科 非发酵革兰氏阴性杆菌 临床真菌感染8金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 (Staphyloccocus aureus Rosenbach) 是人类的一种重要病原菌， 隶属于葡萄球菌属（Staphylococcus ）。有“嗜肉菌“的别称。可引起许多严 重感染。细菌按形态可分为：球菌， 杆菌，和螺旋菌。 金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最 常见的病原菌，可引起局部化脓感染 ，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包 炎、金黄色葡萄球菌肠炎等，甚至败 血症、脓毒症等全身感染。金黄色葡 萄球菌的致病力强弱主要取决于其产 生的毒素和侵袭性酶。9链球菌属定义:细胞沿一个平面分裂，常排列成链状的 细菌。 链球菌是化脓性球菌的另一类常见的细菌， 广泛存在于自然界和人及动物粪便和健康人 鼻咽部，大多数不致病。医学上重要的链球 菌主要有化脓性链球菌、草绿色链球菌、肺 炎链球菌、无乳链球菌等。 引起人类的疾病主要有：化脓性炎症、毒素 性疾病和超敏反应性疾病等。 10肠球菌属肠球菌属拉丁学名(Enterococcus Thiercelin and Jouhaud,1984) 细胞球形或卵圆形，0.6 2.0m 0.62.5m，在液体培养基中呈成对 或短链。 广泛出现于环境中，特别脊椎动物的粪便； 有时引起化脓感染。11奈瑟菌属瑟菌属是一群革兰阴性,有菌毛,大多成双排列 的需氧性球菌. 对人致病的只有脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌. 除淋病奈瑟菌寄居于尿道粘膜外,脑膜炎奈瑟 菌及其他奈瑟菌均寄居于鼻咽腔粘膜.12卡他莫拉菌卡他莫拉菌(Moraxella catarrhalis,MC)也有称 卡他布兰汉菌(Branhamellacatarrhalis，BC)是 寄居于人类上呼吸道的莫拉菌属的一种细 菌。 引起人类的疾病主要有：儿童和老年人的上 呼吸道感染，成人下呼吸道感染，儿童上颌 窦炎、中耳炎、肺炎以及成人的慢性下呼吸 道感染。13肠杆菌科常见菌属 埃希氏菌属：包括5个种，即大肠埃希菌、蟑螂埃希菌、 弗格森埃希菌、赫尔曼埃希菌和伤口埃希菌。临床最常见的 是大肠埃希菌。大肠埃希菌俗称大肠杆菌，大多数菌株是人 类和动物肠道正常菌群。致病性：主要是侵袭力、内毒素、 肠毒素等致病因素引起各种炎症（如胆囊炎、泌尿系感染、 肺炎、新生儿脑膜炎、伤口感染、菌血症及腹泻等）。内毒素还可引起发热、休克、DIC等。 沙门氏菌属：通过动物的消化道传染致病，统称为沙门氏 菌病。病型有伤寒与副伤寒（统称肠热症）、食物中毒、败 血症，还可引起慢性肠炎。 志贺氏菌属：该属是人类细菌性痢疾的病原菌，通称痢疾 杆菌。14克雷伯氏菌属：存在于土壤、水、谷物等自然界以及人或 动物的呼吸道。当肌体免疫力降低时，能引起多种感染。有 肺炎克雷伯氏杆菌、臭鼻克雷伯氏杆菌和鼻硬结克雷伯氏杆 菌3种。 沙雷氏菌属：一般存在于土壤、水、植物、动物以及人类 的肠道和呼吸道中，是引起医院内感染的重要条件致病菌。 有粘质沙雷氏菌、液化沙雷氏菌、深红沙雷氏菌等。 变形杆菌属：水、泥土、阴沟及各种腐败的动、植物中最 多，它们是条件致病菌，在特殊情况下能使人致病。 耶尔森氏菌属：该属有鼠疫杆菌、假结核杆菌和肠结肠炎 杆菌3种。15非发酵革兰氏阴性杆菌定义：一群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的 需氧或兼性厌氧、无芽孢的革兰阴性杆菌 种类：包括假单胞菌属、不动杆菌属、寡养单胞菌属、 伯克霍尔德菌属、黄杆菌属和产碱杆菌属细菌,多为条件 致病菌，主要引起院内感染。近半个世纪以来已成为医 院感染的重要病原菌。 其储菌库和感染源主要是医院环境和物件以及住院患者 ，主要传播途径为接触传播。临床感染类型分为菌(败) 血症、肺炎、泌尿道感染、烧伤和手术部位感染、脑膜 炎和眼科术后感染。16临床真菌感染真菌感染引起的疾病称为真菌病，发病率最高的念 珠菌病和皮肤癣菌病。 浅部真菌(癣菌)仅侵犯皮肤、毛发和指(趾)甲，而深 部真菌能侵犯人体皮肤、黏膜、深部组织和内脏， 甚至引起全身播散性感染。 念珠菌：院内血源感染第四位，死亡率第一 曲霉：第二位最常见深部真菌病，死亡率高达60- 90%念珠菌+曲霉=90%侵袭性感染17临床标本主要包括：无菌体液，有不引起疾病的正常 菌群寄居 无菌体液：血液及骨髓标本、尿液标本、穿 刺液标本、导管 正常菌群寄居：粪便标本、痰和上呼吸道标 本、烧伤标本、生殖道标本、组织标本18常规检验19常规检验病毒检验 直接检测：快速诊断方法 间接检测（病毒分离） 血清学检测20常规检验 病毒检验21梅里埃VITEK 全自动微生物检测系统原理及 其应用工作原理 以每种细菌的微量生化反应为基础，不同种类的VITEK试 卡（检测卡）含有多种的生化反应孔，可达30种。 将手工分离的待检菌的纯菌落制成符合一定浊度要求的 菌悬液，经充填机将菌悬液注入试卡内，封口后放入读数器/恒温培养箱，根据试卡各生化反应孔中的生长变 化情况，由读数器按光学扫描原理，定时测定各生化介 质中指示剂的显色并在打印机上自动打印。 可鉴定500多种细菌22Biolog公司全自动微生物鉴定仪原理：利用微生物对不同碳源代谢率的差异，针对每一类微生物筛选95种不同碳源，配合四唑类显色物质 （如TTC），固定于96孔板上（A1孔为阴性对照）， 接种菌悬液后培养一定时间，通过检测微生物细胞利 用不同碳源进行新陈代谢过程中产生的氧化还原酶与 显色物质发生反应而导致的颜色变化（吸光度）以及 由于微生物生长造成的浊度差异（浊度），与标准菌 株数据库进行比对，即可得出最终鉴定结果。 Biolog微生物鉴定数据库容量是目前世界上最大的 ，可鉴定包括细菌、酵母和丝状真菌在内超过2650种 微生物，几乎涵盖了所有的人类、动物、植物病原菌 以及食品和环境微生物。23Biolog全自动微生物鉴定仪的优 点 可鉴定一些传统鉴定系统无法鉴定的重要的革 兰氏阴性好氧菌，如不动杆菌属, 气单胞菌 属、博代氏杆菌属, 嗜血杆菌, 假单胞菌（70多 种）, 弧菌（22种）、耶尔森氏鼠疫杆菌（11 种）等 可鉴定一些传统鉴定系统无法鉴定的重要的革 兰氏阳性好氧菌，如芽孢杆菌、棒状杆菌、微 球菌、葡萄球菌属、链球菌等 与其它鉴定系统相比，新增了许多种类的厌氧 菌，如双歧杆菌（30种）、梳状菌、巨型链球 菌、乳酸杆菌（70种）24检测微生物的质谱主要是气-质联用（GC-MS）、基质辅助激光 解吸飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）、电喷 雾质谱（ESI-MS）及热裂解亚稳态原子轰击 质谱（Py-MAB-MS）等25MALDI-TOF MS鉴定临床微生物对于临床中的不同标本如鼻咽分泌物、咽拭 子、脑脊液、胸腹水、肛拭子及尿液等进行 微生物培养后，将其菌落进行质谱鉴定，据 统计MALDI-TOF MS能准确鉴定大部分革兰阳 性菌和革兰阴性菌如葡萄球菌属、链球菌 属、放线菌属、奴卡菌属、棒状杆菌属、红 球菌属、肠杆菌科细菌、变形杆菌、流感嗜 血杆菌、副流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌、不 动杆菌属、耶尔森菌属等26难鉴定的菌株革兰氏阳性菌： 在鉴定-溶血性链球菌过程中有一定问题，缓症 链球菌和口腔链球菌较难区分，且其与肺炎链球 菌也较难区分 革兰氏阴性菌： 不能严格区分大肠埃希菌和志贺菌；能准确鉴定 阴沟肠杆菌复合菌，但不能准确区别该复合菌内 的菌种；可鉴别肠道伤寒沙门菌血清型与其他肠 道沙门菌血清型沙门，但菌属内分型较困难27难鉴定的菌株分枝杆菌： 不能鉴定到结核分枝杆菌的菌种水平。 对于分枝杆菌的其他菌种，除玛尔摩分枝杆 菌和其他几组紧密联系的菌种，如脓肿分枝 杆菌与马赛分枝杆菌、产粘液分枝杆菌与福 西亚分枝杆菌、Mycobacterium chimaera和胞 内分枝杆菌外，大部分的分枝杆菌都能用 MALDI-TOF