实验一 细菌检验基本技术(三)目的v掌握观察菌落的方法，了解细菌在 液体、半固体培养基的生长表现及意 义。v掌握革兰染色法和熟悉细菌涂片的 制备。v掌握细菌和基本形态和特殊结构。 【器材】v显微镜、载玻片、察镜纸、小镊子、接种环、酒精灯等 细菌染色标本的制作程序涂 片干 燥固 定染 色染色方法v革兰染色法（Gram stain）v芽胞染色法（spore stain）革兰染色法（Gram stain）方法（改良快速法） 初染： 结晶紫等量NaHCO3 35s，水洗 媒染： 碱性碘液 35s，水洗 脱色： 丙酮酒精 35s，水洗 复染： 碱性稀释复红 35s，水洗结果紫色：革兰阳性菌 红色：革兰阴性菌芽胞染色法（spore stain）方法：涂片干燥固定5%孔雀绿加温染 35min 水洗0.5%沙黄1min水洗、晾干、油镜检结果：菌体呈红色，芽胞呈绿色。影响因素 染色关键：脱色时间的长短 其他影响因素：菌龄、涂片厚薄、染液质量控制p革兰阳性菌金黄色葡萄球菌 ATCC25923革兰阴性菌大肠埃希菌ATCC25922三、拉丝试验原理：革兰阴性菌的细胞壁在稀碱溶液中容易破裂，释放出未断裂的DNA螺旋，使菌液呈粘性。方法： 结果：有丝出现（拉丝试验） 革兰阴性菌无丝出现（拉丝试验） 革兰阳性菌用途：用于快速鉴别革兰阳性菌和革兰阴性菌【注意事项】v1. 每次取菌前后注意将接种环灭菌。v2. 涂片薄而均匀，干燥时注意勿将标本烤枯，不 要忘记标本的固定。v3. 革兰氏染色成败的关键是脱色时间，如脱色过 度，革兰阳性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阴 性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被误认 为是革兰氏阳性菌。因此必须严格把握脱色时间。 v4. 选用培养1824小时菌龄的细菌为宜，若细菌 太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰阳性菌转呈阴 性反应。