第九章第九章 不发酵革兰阴性杆菌不发酵革兰阴性杆菌陈端陈端不发酵革兰阴性杆菌不发酵革兰阴性杆菌n n概念：一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形概念：一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形 式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞 的革兰阴性杆菌。的革兰阴性杆菌。不发酵革兰阴性杆菌不发酵革兰阴性杆菌n n假单胞菌属假单胞菌属( (PseudomonasPseudomonas) ) n n产碱杆菌属产碱杆菌属( (AlcaligenesAlcaligenes) )n n不动杆菌属不动杆菌属( (AcinetobacterAcinetobacter) )n n莫拉菌属莫拉菌属( (MoraxellaMoraxella) )n n无色杆菌属无色杆菌属( (AchromobacteAchromobacter) r)n n金氏杆菌属金氏杆菌属( (KingellaKingella) )n n黄杆菌属黄杆菌属( (FlavobacteriumFlavobacterium) )n n艾肯菌属艾肯菌属( (EikenellaEikenella) )n n土壤杆菌属土壤杆菌属( (AgrobacteriumAgrobacterium) )n n黄单胞菌属黄单胞菌属( (XanthomonasXanthomonas) )n n丛毛单胞菌属丛毛单胞菌属( (ComamonasComamonas) )常常见见见见不不发发发发酵革酵革兰兰兰兰阴性杆菌的初步分群阴性杆菌的初步分群鉴鉴鉴鉴定定试验试验试验试验假假单单单单胞菌属胞菌属无色杆菌属无色杆菌属黄杆菌属黄杆菌属不不动动动动杆菌杆菌 属属产产产产碱杆菌碱杆菌 属属丛丛丛丛毛菌属毛菌属莫拉菌属莫拉菌属氧化氧化酶酶+ + +/-+/- -+ + +/-+/-O/FO/F试验试验O/-O/-OOOOO/-O/- - - -动动动动力力+/-+/-+/-+/-+/-+/- -+ + +- -注：注：+ +：90%90%以上阳性；以上阳性；-10%-10%以下的阳性；以下的阳性；+/-+/-：约约约约70%70%为为为为阳性；阳性；OO：为为为为氧化。氧化。不发酵革兰阴性杆菌非发酵菌嗜麦芽窄食单胞菌葡萄糖产酸无色杆菌属土壤杆菌属假单胞菌属动力+OXOX不动杆菌属+葡萄糖产酸黄色素摩拉氏菌属黄杆菌属 + +端鞭毛+产碱杆菌属尿素+常见不发酵菌的鉴定双岐索引第第 一节一节 假单胞菌属假单胞菌属 (Pseudomonas)(Pseudomonas)一、一、 概述概述1. 1. 分类分类2. 2. 临床意义临床意义3. 3. 微生物特性微生物特性 4. 4.微生物检验微生物检验(1)(1)检验程序检验程序 (2)(2)鉴定鉴定(3)(3)药物敏感性试验药物敏感性试验( (Antibacterial Susceptibility TestAntibacterial Susceptibility Test) ) 1. 1.分类分类n n假单菌属按假单菌属按rRNArRNA同源性分为同源性分为5 5群及未确定群及未确定rRNArRNA同源群有关的种同源群有关的种n n一群需氧、不发酵葡萄糖一群需氧、不发酵葡萄糖n n无芽胞，有鞭毛无芽胞，有鞭毛n n氧化酶阳性的革兰阴性杆菌氧化酶阳性的革兰阴性杆菌n n多为条件致病菌多为条件致病菌2. 2.临床意义临床意义n n假单胞菌属分布广泛，人类不发酵菌感染假单胞菌属分布广泛，人类不发酵菌感染中，假单胞菌占中，假单胞菌占70708080，主要为铜绿假，主要为铜绿假单胞菌，其他较为常见的菌种有嗜麦芽窄单胞菌，其他较为常见的菌种有嗜麦芽窄食单胞菌、鲍曼不动杆菌等食单胞菌、鲍曼不动杆菌等3. 3.微生物特性微生物特性n n革兰阴性、无芽胞、专性需氧革兰阴性、无芽胞、专性需氧n n有端鞭毛或丛鞭毛有端鞭毛或丛鞭毛n n生长温度范围广，最适生长温度为生长温度范围广，最适生长温度为3535n n产生各种水溶性色素：绿脓素、脓玉红素、荧光产生各种水溶性色素：绿脓素、脓玉红素、荧光素、脓褐素素、脓褐素n n对理化因素耐受性较强，对多种抗生素耐药对理化因素耐受性较强，对多种抗生素耐药 4. 4.微生物检验微生物检验n n检验程序检验程序 n n鉴定鉴定n n药物敏感性试验按药物敏感性试验按NCCLSNCCLS（National National Committee for Clinical Laboratory StandardsCommittee for Clinical Laboratory Standards）推荐，）推荐，分为分为4 4组：组：A A，B B，C C，DD 二、铜绿假单胞菌（二、铜绿假单胞菌（P. aeruginosaP. aeruginosa) )n n1. 1.临床意义：铜绿假单胞菌在自然界分布较临床意义：铜绿假单胞菌在自然界分布较为广泛，因此很容易污染器械而造成感染为广泛，因此很容易污染器械而造成感染机会机会n n致病机制致病机制 粘附素：粘附粘附素：粘附 结构成分结构成分 多糖似荚膜物质多糖似荚膜物质毒素毒素 内毒素：内毒素：LPSLPS 毒力因子毒力因子 外毒素：外毒素：A A 阻止真核细胞蛋白质合成阻止真核细胞蛋白质合成 S S 干扰吞噬杀菌作用干扰吞噬杀菌作用绿脓素：具有氧化还原活性，催化超氧化物和绿脓素：具有氧化还原活性，催化超氧化物和过氧化氢产生有毒基团过氧化氢产生有毒基团酶类酶类 弹性蛋白酶弹性蛋白酶: :丝氨酸蛋白酶（丝氨酸蛋白酶（Las-ALas-A） 降解弹性降解弹性锌金属蛋白酶（锌金属蛋白酶（Las-BLas-B）蛋白）蛋白磷脂酶磷脂酶C:C:分解脂质和卵磷脂，损伤组织细胞分解脂质和卵磷脂，损伤组织细胞2. 2.生物学特性生物学特性革兰阴性，长短不一革兰阴性，长短不一 单鞭毛单鞭毛 生长温度生长温度25254242氧化酶阳性氧化酶阳性 还原硝酸盐、分解尿素、还原硝酸盐、分解尿素、 精氨酸酶阳性精氨酸酶阳性（1 1）分离培养与鉴定：）分离培养与鉴定：标本可接种于血琼脂平板培养基和选标本可接种于血琼脂平板培养基和选择性培养基择性培养基鉴定根据镜下特征、菌落形态、生化鉴定根据镜下特征、菌落形态、生化 反应等反应等3. 3.微生物检验（微生物检验（检验程序检验程序）铜绿假单胞菌（铜绿假单胞菌（P. aeruginosaP. aeruginosa) )n n血平板上毛玻璃血平板上毛玻璃 样，金属光泽，样，金属光泽， 生姜味生姜味n n可产生多种色素可产生多种色素 ：荧光素与绿脓素荧光素与绿脓素铜绿假单胞菌（铜绿假单胞菌（P. aeruginosaP. aeruginosa) )n n绿脓素绿脓素铜绿假单胞菌（铜绿假单胞菌（P. aeruginosaP. aeruginosa) )（2 2）抗原检测：）抗原检测：血清学分型、噬菌体分型血清学分型、噬菌体分型（3 3）核酸检测：）核酸检测：质粒指纹图分析、脉冲场凝质粒指纹图分析、脉冲场凝胶电泳分析（胶电泳分析（PFGE pulsed field gel PFGE pulsed field gel electrophoresiselectrophoresis）、基因芯片、）、基因芯片、PCRPCR技术、技术、16SrDNA16SrDNA分型鉴定技术分型鉴定技术铜绿假单胞菌（铜绿假单胞菌（P. aeruginosaP. aeruginosa) )检验结果分析与报告：检验结果分析与报告：诊断一定要与临床表现相结合诊断一定要与临床表现相结合治疗过程中，治疗过程中，3 34 4天后重复药敏测试天后重复药敏测试耐药机制：耐药机制：产酶：金属酶，产酶：金属酶，OXAOXA酶酶外膜蛋白的改变（外膜蛋白的改变（Outer membrane proteinsOuter membrane proteins，OMPOMP）为主要机制为主要机制主动泵出机制：对喹诺酮类， 主动泵出机制：对喹诺酮类， MexA-MexB-OprMMexA-MexB-OprM及及MecC-MexD-OprjMecC-MexD-Oprj整合子：整合子：1 1类，类，3 3类类 铜绿假单胞菌（铜绿假单胞菌（P. aeruginosaP. aeruginosa) )三、马勒伯克霍尔德菌与伪马勒伯克霍尔德菌三、马勒伯克霍尔德菌与伪马勒伯克霍尔德菌n n属于属于rRNArRNA第第II II群群n n鼻疽病与类鼻疽病的病原体鼻疽病与类鼻疽病的病原体n n20042004年年NCCLsNCCLs称为可能成为生物恐怖的细菌称为可能成为生物恐怖的细菌马勒伯克霍尔德菌与伪马勒伯克霍尔德菌马勒伯克霍尔德菌与伪马勒伯克霍尔德菌n n两菌均人兽共患病原菌两菌均人兽共患病原菌n n人类感染是经伤口、粘膜、呼吸道人类感染是经伤口、粘膜、呼吸道n n急性患者可有高热、衰竭等全身症状急性患者可有高热、衰竭等全身症状n n肺鼻疽病肺鼻疽病 、皮肤鼻疽病、内脏脓肿、皮肤鼻疽病、内脏脓肿、菌血症、脓毒血症菌血症、脓毒血症 临床意义生物学特性生物学特性n n革兰阴性杆菌革兰阴性杆菌 n n无芽胞、无荚膜无芽胞、无荚膜n n伪马勒鼻伯克霍尔德菌一端有丛鞭毛伪马勒鼻伯克霍尔德菌一端有丛鞭毛(14(14根根) )， 4 4不能生长不能生长n n马勒鼻伯克霍尔德菌无鞭毛无动力，马勒鼻伯克霍尔德菌无鞭毛无动力，4242不生长不生长微生物检验微生物检验n n分离培养与鉴定分离培养与鉴定 n n需氧菌需氧菌n n生长温度生长温度3535n n普通培养基、血琼脂、麦康凯普通培养基、血琼脂、麦康凯n n生化鉴定生化鉴定n n荧光直接法染色镜检，可快速诊断荧光直接法染色镜检，可快速诊断四、嗜麦芽窄食单胞菌四、嗜麦芽窄食单胞菌n n属于假单胞菌科的属于假单胞菌科的rRNArRNA同源群同源群n n嗜麦芽窄食单胞菌（嗜麦芽窄食单胞菌（S.maltophiliaS.maltophilia）和和S. S. africanaafricana分类临床意义临床意义n n为条件致病菌为条件致病菌n n呼吸道、泌尿道、伤口等部位感染，菌血呼吸道、泌尿道、伤口等部位感染，菌血症及心内膜炎。症及心内膜炎。n n在不发酵菌引起的感染中，仅次于铜绿假在不发酵菌引起的感染中，仅次于铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌，居临床分离阳性单胞菌和鲍曼不动杆菌，居临床分离阳性率的第三位。率的第三位。生物学特性生物学特性n n革兰阴性，端鞭毛，革兰阴性，端鞭毛，(18)(18)根根n n有动力、无芽孢、无荚膜有动力、无芽孢、无荚膜n n生长温度为生长温度为3535，4 4不生长不生长n n血琼脂、普通培养基血琼脂、普通培养基n n菌落中等大小、圆形、光滑、湿润、产生菌落中等大小、圆形、光滑、湿润、产生 不溶血的黄色色素不溶血的黄色色素n n生化鉴定：生化鉴定：氧化酶阴性氧化酶阴性液化明胶液化明胶水解七叶苷水解七叶苷赖氨酸脱羧酶阳性赖氨酸脱羧酶阳性氧化分解麦芽糖氧化分解麦芽糖药物敏感试验及结果解释药物敏感试验及结果解释n n治疗首选磺胺类：治疗首选磺胺类：TMP/SMZTMP/SMZ；喹锘酮类：环丙；喹锘酮类：环丙氟派酸或替卡西林氟派酸或替卡西林/ /棒酸棒酸n n泰能泰能(Imipenem)(Imipenem)天然耐药天然耐药