实验三 沉淀反应 实验内容： 1 环状沉淀反应（示教） 2 单向琼脂扩散（示教） 3 双向琼脂扩散 4 微量免疫电泳（示教） 沉淀反应类型 环状沉淀反应：最早使用的沉淀反应 以琼脂为支架的扩散反应：单扩，双扩 在扩散的基础上加上电泳：火箭电泳； 对流免疫电泳；微量免疫电泳 一、环状沉淀反应 抗人血清抗牛血清待检血稀释液人血稀释液人血稀释液待检血稀释液抗牛血清抗人血清意义：可检测小量的抗原进行法医学上血迹的鉴定 及流行病学中昆虫吸血习性的检查。其缺点是对 含几个抗原抗体系统的反应缺乏分辨作用。 二、 琼脂扩散 (1)单向琼脂扩散（单扩）意义：用于定量测定人或动物血清中各种Ig( IgD、IgE除 外）的含量。 不同 稀释 度的 Ag已知Ab(2)双向琼脂扩散已知Ab未知Ag三、 扩散的基础上进行电泳 n优点：提高反应敏感度，缩短反应时间 。n抗原抗体在电场中能定向移动，既限制 了抗原抗体向四周扩散，增加局部反应 浓度，又加快泳动速度，从而缩短反应 时间（1-2h即可），提高反应敏感度（ 10倍）。 火箭电泳 单扩+电泳不同稀释度 Ag已知Ab融于琼 脂板意义： 用于制作不同稀释度FP含量的标准曲线 ，测定病人血清中FP含量。 对流免疫电泳 双扩+电泳 已知Ab未知Ag意义：用于HBsAg、FP检测及脑膜炎球菌分型检测。 Ag接电源负极，Ab接电泳正极 微量免疫电泳 先电泳后扩散 病人血清正常人血清已知Ab意义：用于免疫球蛋白不同成分的鉴定。 血清蛋白电泳示意图图7-1 电泳和双扩散不同阶段示意图 电泳后各蛋白质的位置 加抗体后双扩 散的情况 双扩散结果 132654中央孔FP诊断血清1，4阳性对照2 阳性病人血清（原液）3 阳性病人血清（1：10）5 阴性病人血清（原液）6 阴性病人血清（1：10）1实验内容：双扩 按图示加样操作步骤 n用蜡笔在一洁净的载玻片中央1/3上划区，并作好标记n制备琼脂板：将玻片平放于水泥平台上，用吸管吸足量 琼脂，沿划区边缘快速一次性加入，形成厚约3mm的 琼脂板，放置1-2分钟使之凝固。（*避免产生气泡、 分层及厚薄不均）n琼脂板凝固后依模板打孔n加样：原则：每孔10ul、加满孔、不含气泡、不溢出，每孔加 样量要准确均一微量移液器的使用：各个微量移液器与相应血清一一对 应，不混用；吸液时下压有阻力即可，放液时须压到底 。n加样完置湿盒过夜后观察结果。注意事项 n加样前判断孔内的琼脂是否已取出n加样时注意不要刮破琼脂以免影响 沉淀线形状n加样时抗体、阳性血清及待测标本 应各用一支加样器，以免混淆，影 响实验结果 实验报告双扩的实验原理、结果、结果分析n附：沉淀线形状与抗原、抗体浓度的关系 Ab表示Ag与Ab的分子量大 小适中、浓度适宜表示Ag的浓度大于Ab表示Ab浓度的大于Ag