微量克氏定氮法 相 关 知 识|蛋白质含氮量：约为16%|蛋白质系数：1g氮所代表的蛋 白质量为6.25。 实 验 目 的 |掌握克氏定氮法测定蛋白质含 量的原理和方法。 |学会使用克氏定氮仪。 实 验 原 理CH2COOH + 3H2SO4 2CO2 + 3SO2 +4H2O +NH3 (1)NH22NH3 + H2SO4 (NH4)2SO4 (2) 加入CuSO4作催化剂，K2SO4以提高溶液的沸点 ，后期加 入双氧水以缩短消化时间。(NH4)2SO4+ 2NaOH 2H2O + Na2SO4 + 2NH3 (3)2NH3 + 4H3BO4 (NH4)2 B4O7 + 5H2O (4)葡萄紫浅绿(NH4)2B4O7 + 5H2O + HCl 2NH4Cl + 4H3BO4 (5)浅绿 葡萄紫 实 验 仪 器 、 材 料 和 试 剂 |（一）仪器 微量克氏定氮仪、控温消煮炉、酸式 滴定管、50ml容量瓶、150ml三角瓶等 。|（二）材料 酱油、酸奶、纯牛奶等。|（三）试剂 1浓硫酸（A.R） 235% NaOH溶液（入桶中） 32%硼酸溶液：混合指示剂100：1 入桶中 4. 0.05N标准盐酸溶液 实 验 操 作 步 骤（一）消化（两组一份） （二）定溶 将消化液用蒸馏水在50ml容量瓶中 。 （三）蒸馏 （四）滴定1. 加入1ml样品、硫酸钾和硫酸铜的混合物 200300mg、浓漏硫酸23ml、放上小斗。2.全班做一份空白样3.放置到控温消煮炉上，调温、至呈透明浅绿色取5ml消化液入凯氏烧瓶 加碱、加酸、开始蒸馏 。 蒸馏至三角瓶中液体呈现浅绿色，保持3分钟凯氏定氮仪的调试取150ml的三角瓶实 验 结 果 与 讨 论 |计算100ml样品中粗蛋白质含量。式中 c：盐酸标准溶液的浓度（mol/L） V1：样品消化液消耗标准酸的体积(mL) V2：空白消化液消耗标准酸的体积（mL） 14：氮原子量（g/ mol）F：蛋白质的换算因子（一般用6.25）m：样品的质量（g）或体积（mL）数。 样品中蛋白质的含量()C（V1V2）14/1000Fm5/50 100