呼吸道标本的处理程序呼吸道标本的处理程序王勇王勇内容简介内容简介n n上呼吸道标本标准操作程序（上呼吸道标本标准操作程序（SOPSOP）n n下呼吸道标本标准操作程序（下呼吸道标本标准操作程序（SOPSOP）n n痰标本的规范化操作（草案）痰标本的规范化操作（草案）上呼吸道标本处理程序上呼吸道标本处理程序n n大部分步骤需要在生物安全柜内接种大部分步骤需要在生物安全柜内接种n n细菌性咽炎的实验室诊断细菌性咽炎的实验室诊断n n原理原理n n大多数上呼吸道感染是由病毒引起的。细菌性咽炎经大多数上呼吸道感染是由病毒引起的。细菌性咽炎经 常是由化脓性链球菌引起。但重度的会厌炎和喉气管常是由化脓性链球菌引起。但重度的会厌炎和喉气管炎则是例外，其一般是由于炎则是例外，其一般是由于b b型流感嗜血杆菌引起。型流感嗜血杆菌引起。n n标本标本n n从扁桃体和后咽部采集标本的咽拭子从扁桃体和后咽部采集标本的咽拭子n n选择性培养基（如表选择性培养基（如表1 1）n n5%5%羊血琼脂羊血琼脂n n含抗生素的含抗生素的Thayer Martin Thayer Martin 琼脂（琼脂（GC+GC+）和无抗生素的）和无抗生素的 (仅用于淋病奈瑟菌病例仅用于淋病奈瑟菌病例) )n n巧克力琼脂（仅用于会厌炎和喉气管炎病例）巧克力琼脂（仅用于会厌炎和喉气管炎病例）n n质量控制质量控制n n培养基使用之前，培养基使用之前，QCQC由培养基组负责。由培养基组负责。n n上呼吸道标本处理程序上呼吸道标本处理程序n n培养程序培养程序n n在在1/61/6琼脂表面用力滚动拭子，并划线分离。琼脂表面用力滚动拭子，并划线分离。n n在一区用接种针穿刺血平板几次。（图在一区用接种针穿刺血平板几次。（图1 1）n n把平板放置在把平板放置在5%CO25%CO2培养。培养。下呼吸道标本的处理下呼吸道标本的处理 n n大多数标本需要在安全柜内操作大多数标本需要在安全柜内操作n n常规细菌培养常规细菌培养n n原理原理n n下呼吸道感染包括支气管炎，细支气管炎和下呼吸道感染包括支气管炎，细支气管炎和 肺炎。以上炎症，特别是肺炎，可以引起严肺炎。以上炎症，特别是肺炎，可以引起严 重甚至是致命的疾病。虽然病毒，支原体，重甚至是致命的疾病。虽然病毒，支原体， 立克次立克次( (氏氏) )体和真菌都可以引起下呼吸道感体和真菌都可以引起下呼吸道感 染，但细菌是主要的病原体，其所占的比例染，但细菌是主要的病原体，其所占的比例 要比上呼吸道感染要高很多。要比上呼吸道感染要高很多。下呼吸道标本的处理下呼吸道标本的处理 n n下呼吸道标本培养的常见病原菌下呼吸道标本培养的常见病原菌n n革兰阳性菌革兰阳性菌 革兰阴性菌革兰阴性菌 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 脑膜炎奈瑟氏菌脑膜炎奈瑟氏菌 化脓性链球菌化脓性链球菌 流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌 肺炎链球菌肺炎链球菌 肠杆菌科细菌肠杆菌科细菌 结核分支杆菌结核分支杆菌 非发酵菌非发酵菌 白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌 嗜肺军团菌嗜肺军团菌 假丝酵母菌假丝酵母菌下呼吸道标本的处理下呼吸道标本的处理 n n标本标本n n痰痰n n气管或经气管壁抽吸物气管或经气管壁抽吸物n n支气管标本支气管标本n n支气管灌洗液，毛刷，活检标本支气管灌洗液，毛刷，活检标本下呼吸道标本的处理下呼吸道标本的处理 n n材料材料n n培养基培养基n n5%5%羊血平板羊血平板n n巧克力平板巧克力平板n n中国兰中国兰n n念珠菌显色培养基念珠菌显色培养基n n试剂试剂n nSputasolSputasol（OXOIDOXOID）下呼吸道标本的处理下呼吸道标本的处理n n质量控制质量控制 培养基使用之前，培养基使用之前，QCQC由培养基组负责。由培养基组负责。n n操作程序操作程序n n肉眼观察肉眼观察n n记录痰标本的外观并记录在申请单背面。记录痰标本的外观并记录在申请单背面。n n外观描述及简写如下：外观描述及简写如下：n n唾液（唾液（S S）带血带血 （BSBS） 粘液状（粘液状（MM） 水样水样 （WW）n n粘液脓性的（粘液脓性的（MPMP） 脓痰（脓痰（P P）脓性粘液痰（）脓性粘液痰（PMPM ）n n拒收拒收“ “唾液唾液” ”标本并报告标本并报告“ “标本不适合用于进一步处理标本不适合用于进一步处理”“ ”“请请 重留重留” ”下呼吸道标本的处理下呼吸道标本的处理n n显微镜检显微镜检n n用拭子取所有类型标本的脓液部分涂片用拭子取所有类型标本的脓液部分涂片 ，（最好在，（最好在6060度热固定涂片度热固定涂片2 2小时），小时）， 并准备革兰染色并准备革兰染色n n低倍镜下检查涂片（低倍镜下检查涂片（1010倍目镜）；定量倍目镜）；定量 计数计数1010个视野下鳞状上皮细胞和白细胞个视野下鳞状上皮细胞和白细胞 平均数。按照表平均数。按照表1 1分级标准记录在工作分级标准记录在工作 表上。表上。低倍镜下细胞计数（低倍镜下细胞计数（1010个视野平均数）个视野平均数）倍数倍数0 0偶见偶见1+1+2+2+3+3+上皮细胞上皮细胞100100无无2 52 5WBC 100WBC 100无无80(80(或四分之一视野或四分之一视野 20) 20)n n如果标本要求革兰染色，在如果标本要求革兰染色，在100100倍目镜下倍目镜下 检查病原体并记录在工作表上检查病原体并记录在工作表上n n对涂片显示上皮细胞占优势，（对涂片显示上皮细胞占优势，（3+3+）丢）丢 掉标本并报告掉标本并报告“ “涂片显示口腔正常菌群污涂片显示口腔正常菌群污 染染”“”“标本不适合用于进一步处理标本不适合用于进一步处理”“”“请重请重 留留” ”培养程序培养程序1. 1.水样痰标本水样痰标本 直接接种到培养基，并划线分离直接接种到培养基，并划线分离1. 1.脓性标本（特别是痰）脓性标本（特别是痰）- -匀浆化匀浆化2. 2.SputasolSputasol（OXIDEOXIDE）的配制）的配制3. 3.无菌操作下，取瓶中的液体无菌操作下，取瓶中的液体1.5ml1.5ml，加入到，加入到18.5 ml18.5 ml无菌水无菌水 中。无菌条件下中。无菌条件下2-82-8至少稳定至少稳定4848小时小时 痰液化的常规操作程序。痰液化的常规操作程序。 痰液中加入等体积的稀释后痰液中加入等体积的稀释后SPUTASOLSPUTASOL 旋涡振荡标本旋涡振荡标本20-30 s20-30 s， 并置室温并置室温1515分钟分钟 再次旋涡振荡是标本达到进一步液化。准备立即接种标本。再次旋涡振荡是标本达到进一步液化。准备立即接种标本。 用拭子取混悬液到培养基，并划线。用拭子取混悬液到培养基，并划线。4. 4.支气管灌洗液（支气管灌洗液（BALBAL）的定量培养）的定量培养5. 5.旋涡振荡旋涡振荡BALBAL并用并用0.01 ml0.01 ml定量接种环接种到平板上定量接种环接种到平板上。n n放置在放置在5%CO25%CO2培养箱内培养箱内您可能每天面临以下问题的挑战您可能每天面临以下问题的挑战n n痰标本分离出痰标本分离出4 4种细菌做哪种细菌做哪 一种细菌的药敏试验？一种细菌的药敏试验？n n数量很多的凝固酶阴性葡萄数量很多的凝固酶阴性葡萄 球菌在痰里分离出来是否要球菌在痰里分离出来是否要 做药敏做药敏? ?临床微生物实验室规临床微生物实验室规 范操作草案范操作草案草案分七部分草案分七部分n n标本采集和运送的规范条例标本采集和运送的规范条例n n培养前标本质量检测规范培养前标本质量检测规范n n标本接种规范条例标本接种规范条例n n细菌鉴定基本流程规范条例细菌鉴定基本流程规范条例n n细菌药物敏感试验规范条例细菌药物敏感试验规范条例n n实验室质量控制实验室质量控制n n细菌报告规范条例等细菌报告规范条例等第一部分第一部分 标本采集和运送标本采集和运送n n标本采集和运送是细菌培养成功的最重要标本采集和运送是细菌培养成功的最重要 的关键的关键! !n n但由于标本的采集和运送常有护士或医生或病人但由于标本的采集和运送常有护士或医生或病人 自己完成，所以也是最不容易做好的事情，而且自己完成，所以也是最不容易做好的事情，而且 不知道问题所在之处，由此引发的最主要后果是不知道问题所在之处，由此引发的最主要后果是 阳性率下降，这也是临床医生最不能接受的问题阳性率下降，这也是临床医生最不能接受的问题 ，为此建议来一次革命，用输送培养基代替传统，为此建议来一次革命，用输送培养基代替传统 的标本的容器。的标本的容器。痰标本的采集和运送条例痰标本的采集和运送条例1.1.标本采集时间：用抗生素前；晨痰标本采集时间：用抗生素前；晨痰; ;2.2.采集方法：采集方法：n n（1 1）自然咳痰：用清水漱口）自然咳痰：用清水漱口3 3次，应包括次，应包括 咽喉部，用力咳出痰，与灭菌容器中或输咽喉部，用力咳出痰，与灭菌容器中或输 送培养基中。送培养基中。痰标本的采集和运送条例痰标本的采集和运送条例n n（2 2）帮助咳痰：不易获得痰的患者可雾化吸入加）帮助咳痰：不易获得痰的患者可雾化吸入加 温的氯化钠（温的氯化钠（45104510氯化钠水溶液）氯化钠水溶液）n n（3 3）支气管镜或支气管毛刷：由医生采集，建议）支气管镜或支气管毛刷：由医生采集，建议 直接种入输送培养基。直接种入输送培养基。n n（4 4）胃内采集痰标本：婴幼儿不会咳痰而且常把）胃内采集痰标本：婴幼儿不会咳痰而且常把 痰误咽入胃中。可在清晨，用胃管插入胃内，用痰误咽入胃中。可在清晨，用胃管插入胃内，用 注射器抽出胃液。注射器抽出胃液。n n（5 5）小儿采集痰标本：用压舌板刺激咳嗽使肺部）小儿采集痰标本：用压舌板刺激咳嗽使肺部 和器官的分泌物喷出，用拭子采取标本送检，如和器官的分泌物喷出，用拭子采取标本送检，如 不能立即送检应种入输送培养基。不能立即送检应种入输送培养基。厌氧培养标本采集规范条例厌氧培养标本采集规范条例1.1.痰标本的厌氧培养标本采集：必须用气管痰标本的厌氧培养标本采集：必须用气管 穿刺法获得痰液，从口腔吐出的痰标本不穿刺法获得痰液，从口腔吐出的痰标本不 能用于厌氧培养。能用于厌氧培养。2.2.尿标本的厌氧培养标本采集：耻骨上膀胱尿标本的厌氧培养标本采集：耻骨上膀胱 穿刺获得尿标本可用于厌氧菌培养穿刺获得尿标本可用于厌氧菌培养3.3.便标本厌氧培养标本采集便标本厌氧培养标本采集; ;可用排出的便可用排出的便 作厌氧培养但也应少与空气接触。作厌氧培养但也应少与空气接触。第二部分标本培养前规范草案第二部分标本培养前规范草案n n合格的标本是培养成功的最重要的因素，合格的标本是培养成功的最重要的因素， 实验室有权利对不合格提出终止检查或要实验室有权利对不合格提出终止检查或要 求重送标本的要求，因此实验室必须建立求重送标本的要求，因此实验室必须建立 标本接种前的质量控制和标本合格的检测标本接种前的质量控制和标本合格的检测 。要求对除血液外的标本均作涂片革兰染。要求对除血液外的标本均作涂片革兰染 色检查，用于评价标本的质量和区别分离色检查，用于评价标本的质量和区别分离 细菌是定植菌或致病菌。细菌是定植菌或致病菌。痰培养标本培养前规范痰培养标本培养前规范n n实验室在接种前必须作痰涂片革兰染色当实验室在接种前必须作痰涂片革兰染色当 在低倍镜下白细胞小于在低倍镜下白细胞小于1010个每视野、上皮个每视野、上皮 细胞大于细胞大于2525个每视野时应作为不宜作培养个每视野时应作为不宜作培养