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农残检测中应注意的问题样品制备 (1)样本应在冷冻状态下运送和保存,并避免在运送 期间解冻,样品储存一般需在20,样品提取浓 缩液储存应在05。通常动植物样品需搅拌或匀 浆(籽粒需磨碎过40目筛),土壤样本需去石块等 杂物,阴干后充分混匀,过40目筛。l样品检测前需混匀,可用粉碎机搅拌混匀,颗粒尽 量小。l粉碎前应保持半冷冻状态,以免待测成份随水分流 失。 (2)提取: 用溶剂将待测样品中农药溶解、分离出来的操作步骤。根据样本和 待测农药种类,用不同溶剂和方法进行提取。l原理:相似相溶。选择与待测农药极性相似的溶剂,提取剂沸点应 4580,且不能与样本发生作用,毒性低,价格便宜,必须能溶 解待测农药。采用ECD时,不能选带卤素的溶剂。对含水量高的样 本,一般选与水相混溶的溶剂(乙腈、丙酮等),要求溶剂对样本 有较强的渗透能力,以便能将样本中农药充分提取。当单一溶剂效 果不理想,可选择2种或2种以上不同极性的溶剂,以不同比例配成 混合提取剂,溶剂的级性由强到弱顺序:水乙腈甲醇乙酸 乙醇异丙醇丙酮正丁醇正戊醇乙酸乙酯二氯甲烷三 氯甲烷苯甲苯二甲苯四氯化碳二硫化碳环己烷正己 烷(石油醚)。l溶剂纯化:目前我国市售的有机溶剂几乎 都需纯化后方可使用。l 方法:多采用重蒸馏的方法。纯化后的溶 剂检验方法是将溶剂浓缩100倍,吸取1l注 入气相中无干扰峰即符合要求。也可采用中 性氧化铝、硅胶、活性炭等吸附剂制成层析 柱纯化。l提取方法:振荡法:在盛有样本的容器中 加提取剂,振荡一定时间。l均质法:用均质机对加提取剂的样本快速均 质。快速、简便。l超声法:样本加入提取剂,以超声波提取。l索氏提取:提取效果好,但时间长,干扰物 多。多用于动物样本。l快速混匀法:适用于液体样品。l 一般经三次提取,第一次约提取70-90%,第二 次和第三次提取残渣中的剩余部分。无水硫酸 钠和氯化钠的盐析作用能提高待测组分的回收 率。干性样品(含水量重复性) l精密度与待侧物的浓度关系: 浓度(g/kg) CV(%) 1 35110 3010100 20100 15l对于定量方法,重复性精密度应控制在15%为 宜,最高不超过20%;重现性精密度可在重复 性精密度基础上加倍。 l准确度:指测定值(平均值)与真实值的接 近程度,表示分析结果的正确性。通常用添加 回收率表示。l回收率:在空白样本中添加一定量待测农药标 准样品,制成已知含量的样本,然后按拟定的 方法对样本进行提取、净化和测定。所得到的 实测值与已知值比较,实测值与已知值的百分 率即为方法添加回收率。添加回收率应以接近 100%为最佳。但是由于试样中种类和农药品种 多,以及杂质干扰、操作误差等原因。要求回 收率为70110%,平均回收率80%即符合要求 。 l加标量原则上应以接近待测试样中农药含量为宜,但由 于待测样本中农药残留量未知,因此一般以该试样的农 药高残留限量作为参照,一般以规定的MRL值接近的浓 度作为中档添加浓度,低于和高于MRL值一个数量级的 浓度作为低档和高档添加浓度。回收率=(测定值空白值)/添加量(如何添 加标准)l定量方法回收率范围:70%110%,平均回收率应 80%以上。实际工作中根据待测物的浓度范围,只要精 密度符合要求60%以上回收率也可以接受。但是回收率 偏低会影响灵敏度,在残留分析报告中一般不要求用回 收率对测定值进行校正。 参考数据:l 检测限(LOD limit of detection):指分析方法能够 从样品背景信号中检测出待测物质存在时所需最低浓度 。LOD反映了分析方法整体的灵敏度效能指标。一般对 分析方法在LOD水平的定量可信性(如精密度、回收率 )不作要求,一般要求残留分析方法LOD0.1MRL LOD=B+2SD或B+3SDl 影响LOD的因素:检测器灵敏度、噪声水平、基质 干扰(净化效果)、样品量和浓缩倍数,宜注重提高净 化效果,而不应完全依据增加进样量或浓缩倍数来降低 检测限。 l定量限(LOQ limit of quantitation):指分 析方法能够对样品中待测物进行定量测定的 最低浓度。用于定量方法的验证。l一般要求其CV20%,回收率70%,方法 LOQ0.2MRL,LOQ=B+10SD。 l线性范围:待测物浓度与仪器的响应信号呈 线性关系并且能满足定量要求的浓度范围, 用浓度最小值和最大值或二者之比表示。定性定量方法 定性法: 1.保留值定性:样品中组分保留值(保留时间、保留体积 等)与已知物质在 相同条件下测得保留值比 较,如果数值在实验容许的误差范围内,就可以推定此 组分可能是该物质。要求载气流速、载气温度和柱温一 定恒定,否则其微小的波动和变化都会改变保留值影响 定性。可采用加标法(避免载气流速变化影响)和相对 保留值定性法(柱温和固定相一定时,相对保留值为定 值,可作为定性较可靠参数,常用双柱定性,两个纯化 合物在性能不同的两根以上色谱柱上有完全相同保留值 ,则这两个纯化合物基本可以认定为同一化合物。使用 柱子越多,可信度越高)。 2.MS定性:lGC/MS法可给出组分分子量和结构信息,以此可对组分 进行确证,是残留分析最有效的定性方法。仅用质谱碎 片对同分异构体等判断较困难。一般采用色谱保留值与 质谱相结合的方法定性。l GC/MS能通过总离子流检测得到色谱峰,对每个色谱 峰进行扫描,用解析法或标准质谱图对照法定性。还可 用质量碎片法选择高峰度特征性质量峰进行选择离子检 测,为筛选分析提供更有效的定性或定量信息。l GC/MS还可以方便的判定色谱峰内未分离开的组分。 3.选择性检测器定性:选择性检测器只对某类或某几类化合物有信号,可用来判定被测物是否此类化合物,如FID,仅对含碳化合物响应;ECD,只对含强电负性基团有响应。两个或两个以上检测器串联或并联还可以得到更多定性信息。l定量法: (1)外标法:经标准曲线定量(经过原点),46个点 ,也可单点校正,但必须保证组分峰面积与标样峰面积 相近,且色谱条件及进样量一致。若有系统误差,则单 点校正误差较大。l优点:直接定量,适合大批量样品。标线绘制后可使用 一段时间,在此段时间内可经常用一个标准样品对曲线 进行校正,以确定其是否可以使用。l缺点:每次样品分析色谱条件(柱温、检测器状态、进 样量、柱效果)很难完全相同,易出误差。另外,样品 前处理中欲测组分变化无法补偿。 (2)内标法:是在要测定的样品中加入已知量的 已知化合物,作为测定的比较标准,用待测物 峰面积和内标物峰面积比值进一步求得待测物 组分浓度。l优点:进样量变化,色谱条件微小变化对结果 影响不大,前处理前加内标,可部分补偿欲测 组分在前处理时的损失。l缺点:内标物选择困难,称量要准确,操作较 麻烦。 (3)影响定量的因素l样品制备:待测组分富集,净化效果(影响积分、回 收率),制备好的样品储存条件(温度、湿度、避光、 分解、氧化或其他化学反应)。样品制备好后应尽可能立即检测。l进样技术:进样量主要影响外标法,因素有二:一是 进样装置准确度和精度;二是操作人员进样技术和熟练 程度。进样时,插针速度、进针位置、深度和熟练程度 ,影响进样准确性和重复性。对沸程宽的样品,进针快 ,拔针慢,防止难挥发组分在拔针时未完全进入柱子, 还要注意橡胶垫漏气问题,引起样品损失。 l色谱条件选择:柱温变化影响保留时间和峰高,且对 峰高的影响随分子量增加而加大,即柱温变化对各组分 峰高影响是不等效的。而对峰面积影响小,故气相中多 采用峰面积定量。积分参数设置很重要。对定量结果影 响很大。总的原则是尽可能保持每次进样时色谱条件一致。l检测器特性:检测器稳定性和线形范围直接影响色谱 定量分析结果的准确性和重复性,因此应尽可能维护好 检测器,保持其工作稳定性。l分离度:待测物质的色谱峰分离度直接影响到峰高和 峰面积的积分,从而影响到待测物质的准确定量。方法建立步骤 1.文献检索: 2.建立检测方法: 3.建立样品处理方法: 4.标准曲线: 5.稳定性实验: 6.分析方法评价:a、精密度 b、准确度 c、检测限和定量 限 d、线性范围 7.分析方法报告:a、概述 b、操作方法 c、方法评价 d、 应用 e、附件 8.分析质量控制: l推荐丛书:色谱技术丛书 化学工业出版社 全套共 13册 TEL:010-64918013网址:http/www.cip.com.cnl推荐网站:食品伙伴网网址:http/www.foodmate.net
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