微量铁的测定 可见分光光度法1OBJECTIVE1 掌握分光光度法的基本原理2 学会光度法测定物质的含量3 学习可见分光光度计的使用方法2PRINCIPLE有色物质对光的吸收具有选择性，溶液的不同颜色是由于溶液中有色物质选择地吸收各种颜色的光引起的。有色溶液的颜色实质上是它所 选择吸收的光的互补色.当一束白光通过铁黄色络离子溶液时， 兰色光大部分被吸收，其它色光透过.3Beer-Lamber:当一束单色光通过有色溶液时部分吸收，部分透过，有色物质对光的吸收度(吸光度A)与有色物质的组成量度(C)和液层厚度(L)的乘积成正比.A = KLC =- lgT = - lgI I0A: 吸光度 (absorbance) K: 吸光系数 (absorptivity)L: 液层厚度 C: 溶液组成量度T: 透光率(transmitance)I0ILC4Beer-Lamber ：物质对单色光吸收的强弱与吸光物质浓度和厚度关系的定律Beer： 吸光与浓度的关系Lamber： 吸光与厚度间的关系II0透光率(transmitance, T)A=-lgT 吸光度 (absorbance)E 吸光系数 (absorptivity)5吸收光谱(吸收曲线)6标准曲线A = KLC A = KC7可见分光光度法: 是对于能吸收可见光的有色溶液的测定方法，对于许多不吸收可见光的无色物质可以用显色反应使之变成有色物质。81 显色反应及其条件因素：试剂与溶剂、酸碱度、时间、温度及其它操作时，必须在平行原则的条件下进行2 测定方法：标准曲线法(空白溶液作对照)：消除溶剂或其它物质对入射光吸收等因素溶剂空白：显色剂及制备试液的其它试剂均无色；可用溶剂作空白溶液试剂空白：显色剂有色；按显色反应相同条件下加入各种试剂和溶 剂(不加试样溶液)试样空白：试样基体有色，显色剂无色；不加显色剂但按显色反应相同条件进行操作9显色剂：磺基水杨酸pH 1.82.5 淡紫色 4.08.0 橙红色8.011.5 黄色 12 沉淀吸收波长：380480nm范围内，选择最大吸收波长max(425nm)实验条件：10PROCEDURE1 系列标准溶液和待测溶液的配制编号 空白 1 2 3 4 5 6 未知标准溶液(ml) 0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 1.00(待测液)10%磺基水杨酸(ml) 5.00HOAc-NaOAc缓冲液(ml) 10蒸馏水 稀释至50.00ml112 标准曲线的制作波长425nm下，以空白溶液为参比溶液，分别由稀至浓测定一系列标准溶液的吸光度以Fe3+含量为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线编号 空白 1 2 3 4 5 6 Fe3+含量(mg/ml) 吸光度(A)波 长 425nm 123 试样注入比色皿，插入试样槽调节波长至 425nm 盖上样品室盖，将空白试样移入光路按 A / T / C / F 键，切换至 A 明亮按 / 100% 键，使A值显示为 0.000 (即置空白试样为0.000)推或拉SAMPLE 依次测试标准系列溶液 A值1 接通电源，预热30min2 打开样品室盖，按 / 0% 键, 使 T 显示 000.0可见分光光度计操作：130ACC样品A样品相同条件下，测定未知溶液的吸光度，然后从标准曲线上查出Fe3+的含量.3 未知铁盐溶液中Fe3+含量的测定 14表1 微量铁含量测定结果DATA编号 空白 1 2 3 4 5 6 未知Fe3+标准溶液(ml) 0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 1.00(待测液)10%磺基水杨酸(ml) 5.00HOAc-NaOAc缓冲液(ml) 10蒸 馏 水 稀释至50.00ml波 长 425nmFe3+ 含量(mg/ml)吸光度(A)15QUESTION & DISCUSSION1 本实验中的空白溶液能不能用蒸馏水代替？为什么？ 2 为什么加入试剂的量、顺序和时间要一致？16