资源预览内容
第1页 / 共40页
第2页 / 共40页
第3页 / 共40页
第4页 / 共40页
第5页 / 共40页
第6页 / 共40页
第7页 / 共40页
第8页 / 共40页
第9页 / 共40页
第10页 / 共40页
亲,该文档总共40页,到这儿已超出免费预览范围,如果喜欢就下载吧!
资源描述
泌尿系统与男性生殖系统 药效学研究的设计和方法天马行空官方博客:http:/t.qq.com/tmxk_docin ;QQ:1318241189;QQ群:175569632第一节 急性肾功能衰竭药一、试验设计的医学基础急性肾功能衰竭(简称ARF)是危急重症,属中医“癃闭”、“关格”、“肾风”等范畴。其临床表现主要是小便点滴而下,或点滴全无,起病往往突然发作。治疗乃根据“腑以通为用”的原则,着重于通。实证宜清湿热、散瘀结、利气机而通水道;虚证宜补脾肾、助气化而达到小便自通的目的。改善少尿、氟质血症和肾小管坏死是治疗ARF药效学的主要研究内容。二、药效学研究的实验设计 (一)急性肾衰动物模型l 常用动物模型(1)大鼠血红蛋白尿ARF模型;以甘油肌内注,24h后即有尿素氮升高,少尿 或无尿等类似人的ARF症状。(2)犬去甲肾上腺素模型:雄性犬麻醉以适当的去甲肾上腺素经侧肾动脉 连续滴注,引起肾流量急剧下降,同侧输尿管收集的尿量也相减少等一系列肾 衰症状。(3)犬夹闭肾动脉引起的ARF模型:麻醉犬用外科手术暴露肾动脉夹闭1h, 引起的缺血性肾功能衰竭。(4)汞剂引起的动物ARF模型:以适当剂量的氯化汞静脉注射家兔,皮下或 静脉给大鼠,l2日引起肾小管损伤,出现急性肾功能障碍的变化。(5)大鼠抗生素ARF模型:大剂量抗生素(庆大霉素)给大鼠腹腔注射,通过 影响肾小管上皮细胞膜脂代谢及抑制线粒休的能量代谢,造成肾小管损害,引 起尿量改变及尿蛋白和尿素氮升高等急性症状。2 观察指标(1)生化指标:血肌酐(BUN)、血清尿素氮(Scr)水平;24h肌酐、尿素总排出量;24h肌酐清除率。(2)尿常规检查:24h总尿量;24h蛋白和管型等。(3)病理形态学检查。(4)其他可供分析的指标:血清总蛋白和白蛋白;对主要以损害肾小管功能的模型;如庆大霉素ARF模型可选择NAG酶及溶菌酶作为观察指标反映肾小管损伤的严重程度。3,方法学评价(1)ARF模型较多,从机制分为缺血性和中毒性。 一般认为大鼠血红蛋白尿性ARF模型二种机制均有,接近于人的创伤性ARF,特别是积压综合征。在此模型早期,肾血管阻力增加,肾血流量减少,肾皮质区域的血管重度收缩,如所试药物可能有类似于异博定的降低肾血管力、增加肾血流量等作用,采用此模型较适当。本模型所用动物价廉易得,方法简便,病变稳定,在定时间内做动态观察,也可用家兔,以便多次采血检查。此模型是新药药效较常用的模型。(2)家犬去甲肾上腺素及家犬夹闭动脉引起的ARF模型均属缺血性ARF,机制相同,所用动物相同。(3)汞剂引起的ARF属于中毒性ARF模型。特点为简单易行,病变较稳定,用家兔、大鼠、小鼠作模型动物。天马行空官方博客:http:/t.qq.com/tmxk_docin ;QQ:1318241189;QQ群:175569632(二)相关药效学试验和机制研究1,辅助试验 对能反映解除主症有作用的其他试验,如药物的利尿作用、血管扩张作用对高血钾,酸中毒的控制作用,以及药物对其他原因引起的氮质肌症的影响,均可酌情选用。2作用原理研究 如用水清除率、截流分析实验、肾小管微穿刺技术等探时药物作用部位和功能。这研究对了解新药特点很有意义。(三)阳性对照药(1)地塞米松。(2)维拉帕米(异博定)。三、急性肾衰动物模型建立方法(一)大鼠血红蛋白尿ARF模型1原理 肌内注射甘油后,大鼠肾血流减少,肾小管内皮细胞肿胀,增大了肾血管阻力,血管节段性坏死,外膜纤维化血管自身调节功能丧失,导致肾小球滤过下降。另外,肾小球及肾小管用围纤维蛋白沉积,血臂内血液淤积,血栓形成,血流不畅,导致肾小球滤过率下降,肾小管坏死。2操作方法 采用体重150250g雄性大鼠,置代谢笼中。纪录正常饮水量从尿量,用药前禁水24h。选体重减轻并有脱水的大鼠以50甘油按10mlkg分别在两侧后肢肌内注射.大鼠自由进食和饮水,般于2h后出现血红蛋白尿,48h形成稳定模型。15日内进行实验。3造模成功指标和药物疗效观察(1)24h尿量较对照组明显减少,尿蛋白明显升高。(2)BUN、Set明显增高,血清总蛋白减少。(3)血清K、Na增高。(4)病理学检杳可见明显的肾小管病变。所试药物的药效可根据用药后对以上指标的改善来评价,结果进行组间比 较,统计学处理采用t检验。4注意点(1)个别大鼠叫在肌注甘油后,肾脏损害过重而北亡。(2)禁水24h后体重减轻明显,脱水严重的大鼠选作实验动物效果较好。(二)犬去甲肾上腺素ARF模型l 原理 去甲肾上腺素引起肾血管收缩而致肾小球的血流减少,肾小球滤过减少;组织缺血、缺氧加重对肾组织损害从而产生ARF。2操作方法 取1020kg雄性家犬,以戊巴比妥钠30mgkg,静脉注射麻醉后,于术分离侧输尿管,插入管收集尿液。从肾动脉按每分钟075ugkg,滴注去甲肾上腺素,连续40min停药。14h内可进行实验。对照组用地塞米松或右旋糖酐(静脉注射)。肾衰阴性对照组用等量生理盐水,每组动物至少5只。3药物疗效的评价指标(1)尿量及尿常规检查(用药前1h及用药1h、2h、4h后)。(2)BUN、Scr、血清总蛋白和白蛋白、血清K和Na(药前1h及用药1h、2h、4h 后)。(3)病理学检查。所试药物的药效可根据以上指标的改善来坪价,结果进行检 验作组间比较。4注意点(1)集尿套管内应预充满温水并防止导臂弯曲而阻碍尿液通畅。(2)实验前勿给高蛋白饮食(如肉类),否则影响BUN水平。(三)犬夹闭肾动脉引起的ARF模型1操作方法 取10-20kg雄性家犬,以戊巴比妥钠30ugkg静脉汴射麻醉,于术暴露左侧肾动脉,夹闭1h后放开,使血流再通,从侧输尿骨导管收集尿液。肾衰阳性对照组用地塞米松(01mgkg)或右旋糖酐(相对分子质量75000,10mlkg,静脉注射)。肾衰阴性对照组(只手术,不夹闭肾动脉)用等量生理盐水,每组动物至少5只。2原理、评价指标等 同犬去甲肾上腺素模型。天马行空官方博客:http:/t.qq.com/tmxk_docin ;QQ:1318241189;QQ群:175569632(四)汞剂引起的动物ARF模型1原理 一般认为是由于汞离子经肾小球滤过后,被肾小管上皮细胞重吸收 ,并在细胞内累积与细胞膜和细胞内巯基(一SH)和二硫基(一S一S一)等结合 ,影响酶活性。受累细胞由于汞硫反应而损害细胞及其膜的功能与结构,细 胞呼吸功能丧失,变性坏死,并部分脱落于管腔中阻塞肾小管,使原尿通过受 阻。 受损的肾小管通透性增高,原尿漏出并返回肾血管,因而产生少尿、无 尿。原尿漏至肾间质,形成间质水肿,压迫肾小管。氯化汞中毒还可引起肾血 流重新分布,肾皮质缺血,髓质淤血,肾小管滤过减少,也是引起ARF的原因 之。2操作方法 2kg以上的健康成年家兔,雌雄均可。以氯化汞25mgkg 次静脉注射(氯化汞可用生理盐水或蒸馏水配成适当浓度的溶液)。测定前3日的 血,尿的尿素氮和肌酐含量,取平均值作自身对照;注射氯化汞后的的5日, 每天作同样测定,以后可改为隔天或多日测1次,至肾功能正常。进行尿常规 检查。3注意点(1)HgCl2溶液必须是新鲜配制。(2)精确收集24h尿(在收集甜内事先加入少量甲苯,以防腐败)。(3)实验动物所食饲料、青菜不加限制。(五)庆大霉素ARF模型1原理 大剂量氨糖类杭生索(AG)在动物体内大部分以原形从尿中排出,小部分被近端小管吸收,导致药物在肾皮质蓄积。抑制肾皮质细胞溶酶体内的磷 脂酶A和C,导致磷脂、磷脂酰肌醉在溶酶体内菖积,溶酶体由于磷脂的沉积,最后破裂而致细胞损伤。此外,AG还作用于线粒体氧化磷酸化,造成肾小管损伤。2操作方法 Wistar雄性大鼠,体重250300g,腹腔注射庆大霉素140mgkg(体重),共7日,治疗组动物注射的同时给药物;阳性药用维拉帕米,每大鼠每日灌胃15mgkg(体重);空白对照则给溶剂。3评价指标(1)尿量及尿常规检查。(2)BUN、Scr,血清总白和白蛋白,血清K和Na。(3)尿NAG酶反溶曲酶的检查。(4)病理组织学检查。第二节 慢性肾功能衰竭药一、实验设计的医学基础慢性肾功能衰竭(简称CRF)由于多种慢性肾患发展到晚期,肾实质损害引起肾功能严重损害,体内氮质及其代谢产物潴留,不能维持体内水、电解质及酸碱平衡而引起临床症状,是一危重综合征,祖国医学虽无CRF这个病名,但根据其发病,症状及演变规律,可归纳为“关格”、“癃闭”、“溺毒”、“虚劳”等。患者多见倦怠乏力、气短懒言、纳差腹胀、恶心呕吐、四肢麻木、皮肤瘙痒、腰腿酸软、面色晦暗、肌肤甲错、舌淡有齿痕或色紫暗并有瘀斑、舌苔白滑或厚腻、脉沉弱。综上所述属脾肾气虚证并兼有湿浊或瘀血,故以“健脾益肾,通腑降浊、活血化瘀”法治疗。现代医学则以改善肾功能,促进氮质化合物等毒素的排出,纠正水、电解质和酸碱紊乱,纠正贫血等方法以延缓病程进展。二、药效学研究的实验设计(一)对疾病动物模型的治疗作用试验1常用动物模型(1)大鼠腺嘌呤CRF模型:大鼠经含050. 75腺嘌吟(adenine)饲料喂 养引起的。(2)大鼠56肾切除的CRF模型:经两期外科手术切除大鼠56肾造成的 CRF。(3)大鼠经液氮冷冻肾脏引起的模型:和模型(2)相似,只是用冷冻代替一期 手术的大部分切除。(4)小鼠电凝摘除肾脏CRF模型:以电烧灼小鼠右侧肾表面,2星期后摘除 左肾的外科手术制作的模型。(5)其他模型,如柔红霉素、阿霉素等致大鼠CRF模型。根据新药可能的作 用机制特点选择适当的模型。以上模型的具体建立方法将在后面叙述,试验治疗的给药途径应与临床一 致。2 观察指标(1)各组动物血液毒素物质的比较:一般认为尿毒症毒素物质应具备以下几个条件:该物质的理化性质和结构明确;血液中的浓度增高;该物质与CRF特定的临床发现相关;随血液中该物质浓度降低,临床症状和体症改善;在肾功正常的实验动物中能用该物质复制与CRF类似的临床症状。目前已从CRF患者中分离出约200种蛋白质代谢产物,其中100多种物质成分比止常值高,这些毒素物质分为小分子(相对分子质量小于500),如肌酐、尿素氮、胍类和胺类;中分子(相对分子质量为5005000);大分子(相对分子质量大5000),如旁腺索、生长激素等。凡是公认为CRF毒素物质应当是反应新药疗效最主要的指标,目前临床和评价药效多用的观察指标是肌酐、尿素氮。(2)其他可供分析的指标:各组动物间体重、死亡率的比较;尿量及尿液成分分析(主要为尿蛋白含量的比较);各组动物红细胞数、血红蛋白和红细胞比积的比较;各组动物间血钠、钙、磷、钾等电解质含量的比较;肾脏组织病理学观察。(二)相关药效学试验1血压试验 按常规方法观察药物对大鼠血压的影响。2利尿试验 用水负荷大鼠或CRF模型大鼠常规方法观察药物有无利尿作用。(三)阳性对照药1包醛氧淀粉或爱西特(活性炭) 适用于以吸附肠道毒素来促进毒裹排除、缓解症状的新药。2,尿毒清颗粒刑 适用降低毒素、改善肾功能为主要功效,用于慢性肾功能衰竭、氮质血症和尿毒症早期的新药。3地塞米松 地塞米松01mgkg(体重)肌内注射,每日一次,属非特异性作用,可减轻病情。三、动物模型建立方法(一)大鼠腺嘌呤CRF模型1. 原理 高浓度腺嘌吟通过黄嘌呤氧化酶的作用生成极难溶于水的2,8二羟腺嘌吟,后者沉积在肾小管,影响了氮质化合物的排世,导致氮质血症、毒素蓄积从电解质和氨基酸代谢紊乱,最终引起肾功能衰竭。2制作方法 用含075腺嘌吟(adenine)饲料喂养大鼠,每日投放量约350mgkg(体重)。全部动物自由摄取饲料和饮水。3造模成功的指标和药物疗效观察 大鼠随着进食腺嘌吟饲料的日数增加而日渐消瘦,畏寒拱背,体毛脱落,生长抑制多尿;血肌酐、尿素氮水平升高(喂饲2星期后可见升高);中分子物质水平升高;电解
网站客服QQ:2055934822
金锄头文库版权所有
经营许可证:蜀ICP备13022795号 | 川公网安备 51140202000112号