实 验 五实验四 微生物的显 微镜直接计数法和 大小的测定 实验目的学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显 微镜下测定微生物大小的方法。学习使用血球记数板测定微生物数量的 方法。实验材料显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、 血球记数板、酵母菌悬液、盖玻片、 无菌滴管、吸水纸、擦镜纸。实验步骤测定酵母菌细胞的大小 测定的工具：目镜测微尺 镜台测微尺目镜测微尺每格实际代表的长度随物镜的放大倍 数而改变，也会因使用不同的显微镜而产生误差 ，因此在使用前必须用镜台测微尺进行校正。 目镜测微尺的校正：在40镜下，看清镜台测 微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜 台测微尺的刻度平行，移动载物台，使目镜测 微尺的0点与镜台测微尺的某一刻度重合，然 后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计 算两刻度间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的 格数。由于镜台测微尺的刻度每格长10m， 所以可得目尺每格长度(m)=（台尺格数10）/目尺格数菌体大小的测定：制作一片酵母菌的盖片，取 下镜台测微尺，将盖片置于载物台上，然后在 40镜下用目镜测微尺测量菌体的长和宽。酵母菌显微直接计数 方法：活菌计数法平板菌落计数法；总菌计数 法血球计数板或霍瑟（Peroff Hausser）细菌计 数板（二者原理和部件相同，只是厚薄不同而已） 。 1.取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加 盖血盖片。 2.取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴 一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有 气泡。3.用10镜观察并将计数室移至视野中央。 4. 在10镜下计数：计数4个（或5个）中格的平 均值，然后求得每个中格的平均值。乘上16 （或25）就得出计数区总菌数，最后再换算 到每mL菌液中的含菌数。5.注意事项：计上不计下，计左不计右。出芽 计一半实验结果目镜测微尺标定结果： 40镜下 倍目镜测微尺每格长度是 m 。菌号酵母的直径大小测定结果目镜测微尺格数 实际直径/m 12345均值将显微计数结果记录于下表中。T表示五个 中方格中的总菌数；D表示菌液稀释倍数。 各中格中菌数TD二室 平均 值个 /ml 12345第一 室第二 室问题与讨论为什么目镜测微尺必须用镜台测微尺来 校正？在显微镜下直接测定微生物数量有什么 优缺点？