资源预览内容
第1页 / 共92页
第2页 / 共92页
第3页 / 共92页
第4页 / 共92页
第5页 / 共92页
第6页 / 共92页
第7页 / 共92页
第8页 / 共92页
第9页 / 共92页
第10页 / 共92页
亲,该文档总共92页,到这儿已超出免费预览范围,如果喜欢就下载吧!
资源描述
溶血性贫血常用的实验室检查 (hemolytic anemia HA) 一、定义(definition)RBC寿命缩短、破坏过多或加速,超过骨髓造血代偿能力引起的贫血。(正常骨髓有6-8倍的代偿能力) 骨髓代偿未引起贫血溶血性疾病二、分类(classifition)(一)按病因分类先天遗传性 红细胞内在缺陷后天获得性 红细胞外在因素(免疫与非免疫)(二)按溶血发生部位分(RBC破坏场所)血管内溶血:急性溶血红细胞破坏(血循环中)游 离 血 红 蛋 白结合珠蛋白 血红蛋白尿 含铁血黄素尿高铁血红蛋白 白蛋白血红蛋白尿 含铁血黄素尿返回Hb尿含铁血黄素尿free Hb (a2b2 tetramers)Hb dimersHpHp- Hb complex肾脏肝高铁Hbbinds to hemopexin & albuminferriheme (Fe3+)globin血管外溶血:慢性溶血红细胞破坏(脾脏)血红素珠蛋白卟啉铁游离胆红素尿胆原 粪胆原三 、实验室检查 (laboratory features)(一)溶血性贫血的筛查检测1.有关红细胞破坏增加的检查(1) 血浆游离Hb测定(敏感) 正常值:5% ,多者可 50% G6PD缺陷 : ATP:可纠正但不能纠至正常G: 同上 PK缺陷 : ATP:可纠正G: 不纠正 (2) 高铁血红蛋白还原试验G6P 6-PGA 核酸-5-磷酸G-6-PDG-6-PDNADP+ NADPHNADP+ NADPHNADPH是高铁血红蛋白还原酶和谷胱甘 肽还原酶的辅酶。 G6PD缺陷 NADPH减少时,高铁血红蛋白和谷胱甘 肽还原下降。参考值:高铁血红蛋白还原率75%高铁血红蛋白0.3-1.3g/LG6PD缺陷高铁血红蛋白还原率明显下降(3)变性珠蛋白小体生成试验受检RBC乙酰苯肼 作活体染色(甲基紫) 有变性珠蛋白小体,则膜上形成紫黑色颗粒 计算含5个及以上珠蛋白小体的红细胞的百分率 正常人含5个及以上珠蛋白小体的红细胞一般小于 30% 见图3712h G6PD缺乏症常高于45%,故可作为G6PD 缺乏的筛检试验。 还原型谷胱甘肽缺乏症也增高。 不稳定血红蛋白病含小体的细胞百分率为 75%84%。 HbH病和化学物质中毒时也增高。( G6PD缺乏症,NADPH减少时,红细胞内 还原型谷胱甘肽减少,高铁血红蛋白增高 ,形成变性珠蛋白小体)Heinz Body Haemolytic AnaemiaG6PD deficiency is the most common enzymopathy causing hereditary haemolytic anaemia.咬合形细胞 、 盔形红细胞水泡细胞 Blister cellHeinz bodiesG6P 6-PGA 核酸-5-磷酸G-6-PDG-6-PDNADP+ NADPHNADP+ NADPHNADPH在紫外线照射下会发出荧光 NADPH的吸收峰在波长340nm处,可通过单位时间生成的NADPH的量来测定G-6-PD活性。 正常人有很强荧光,酶活性为(4.971.43)U/gHb G-6-PD缺陷者荧光很弱或无荧光 杂合子或某些G-6-PD变异者则可能有轻到中度荧光(4)G6PD荧光斑点试验和活性测定(5) PK荧光斑点试验和活性测定 标记荧光于NADH上,此时有荧光的NADH变为无荧光的NAD 正常人PK活性斑点在20钟内消失,酶活性15.11.99 U/gHb 荧光斑点不消失或时间延长说明PK活性缺乏 中间缺乏(杂合子)时,荧光25min60min消失 严重缺乏(纯合子)时,荧光60min不消失。PEPPKADPATP丙酮酸LDNADHNAD乳酸(四)珠蛋白合成异常的试验 血红蛋白由珠蛋白和血红素构成,珠蛋白 分子由两对肽链组成,一对是链,另一对 是非链(、),正常成人血红蛋白 有3种:HbA(22)、HbA2(2 2)、 HbF(2 2)。 珠蛋白异常分为两大类,一类是某个肽链 合成量减少,即地中海贫血( ),另 一类是多肽链的结构发生质的改变,即异 常血红蛋白病。(1)血红蛋白电泳检测:醋酸纤维膜电泳法,检查有无异常血红蛋白区带 诊断海洋性贫血地中海贫血异常HB带+醋酸纤维蛋白膜电泳临床意义: HbA2:-地中海贫血。恶贫、巨贫轻 度。 HbA2:缺铁、铁粒幼红细胞贫血。 (2)胎儿HB酸洗脱试验 HbF抗酸能力较强,不易被酸洗脱。 血片置酸性缓冲液保湿一定时间。含HbF 的红细胞不被洗脱,再用伊红染色呈鲜红 色 成人1%,地中海贫血轻型少数RBC呈阳 性,重型阳性RBC明显增多。(3)胎儿血红蛋白测定或HbF碱变性试验 在碱性溶液中, HbF不易变性沉淀,其他 Hb在碱性溶液中易变性沉淀,测定滤液中Hb 含量,即HbF含量。 成人2%,新生儿5585%, 1岁左右同成人 增高:地中海贫血明显(8090%)。急性 白血病、再障、红白血病、淋巴瘤轻度。 (4)HbA2定量测定:1.13.2% 临床意义同Hb电泳(5)限制性内切酶谱分析:意义:Hb病的基因诊断。 (五)自身免疫性溶血性贫血检测 autoimmune hemolytic anemia AIHA 自身免疫性溶贫(AIHA):是 体内免疫发生异常,产生自身抗体 或(和)补体。结合在RBC膜上 , RBC 易被单核巨噬细胞系统 所吞噬,RBC破坏加速而引起一 组溶血性贫血。(1)抗人球蛋白试验 ( Coombs) 原理 直接抗人球蛋白试验: 自身免疫性溶 血性贫血(AIHA)血清中有抗自身红细胞的不完 全抗体,他与表面附有相应抗原的红细胞结合, 成为致敏红细胞,加入抗人球蛋白与红细胞表面 不完全抗体结合,使红细胞相互连接起来出现凝 集现象。来证实红细胞表面有不完全抗体。 抗人球蛋白直接试验阳性;间接抗人球蛋白试验 :检查血清中有无游 离的不完全抗体,敏感性差。抗人球蛋白IgG不完 全抗体RBC直接抗球蛋白试验(DAT) 阳性(右)临床意义 正常人抗人球蛋白试验直接、间接 均阴性,自身免疫性溶血性贫血阳性(主要 见于温抗体型 ,在37条件下作用最 强 IgG),(冷抗体型 4条件下进行试 验 IgM) 新生儿同种免疫溶血病、SLE、RA 、HD、NHL 可阳性。 (2)冷凝集素试验 原理:冷凝集素是一种可逆性抗体 ,在低温时可与自身RBC、“O”型 RBC或与患者同型RBC发生凝集,当 温度升高时,凝集块又复消失。 参考值:效价1:40,适合温度 4。 临床意义:某些AIHA病人效价很 高(达64000或更高)。(3)冷热双相溶血试验:原理:阵发性寒冷性Hb尿症( PCH)病人血清中有双相溶血素, 在04 时,溶血素与RBC结合,并 吸附补体,但不溶血;当升高至 3037则发生溶血。 临床意义: 阳性:见于PCH;麻疹、水痘、 流行性腮腺炎,传染性单核细胞增 多症。 (六)阵发性睡眠性Hb尿症检测 (paroxysmal nocturnal hemoglobinuria PNH) PNH是红细胞膜的获得性缺陷引 起的对激活补体异常敏感的一种慢性 血管内溶血,临床表现以与睡眠有关 的、间歇发作的血红蛋白尿为特征, 可伴有全血细胞减少或反复血栓形成 。( 1)酸溶血试验 (Ham) 原理:红细胞+弱酸血清(pH6.66.8) 37 1小时 红细胞膜对补体敏感, 备解素作用下溶血。临床意义:正常人阴性,阵发性睡眠性血红蛋白尿阳性(PNH)PNH不同时间尿样含铁血黄素Ham试验(2)蔗糖水溶血试验离子浓度低,增强补体 与红细胞结合,膜 孔, 水进入-细胞破坏原理:蔗糖溶液离子浓度低,经 孵育可加强补体与RBC膜的结合,使 PNH病人的RBC膜上形成小孔,随之 蔗糖进入RBC而导致溶血。PNH阳性 ,巨贫、再障、AIHA、先天性球形 红细胞增多症轻度溶血。筛选试验。 (3)蛇毒因子溶血试验眼镜蛇毒中提取的一种蛋白 质,它能直接激活血清中的补体 C3,通过旁路激活补体,PNH红 细胞破碎而引起溶血。特异性 PNH试验。流式细胞仪检测CD55和CD59PNH时,红细胞、淋巴细胞、粒细胞和单 核细胞的细胞膜上CD55和CD59表达下降。 分子生物学方法检测GPI锚连蛋白PNH 时, GPI (糖化肌醇磷脂)锚连蛋 白缺乏。血浆游离HB检测 血红蛋白尿血清结合珠蛋白检测:血浆高铁血红素清蛋白检测:含铁血黄素尿试验(Rous试验):血管外溶血 血清间接胆红素 增高尿胆原增高血管内外溶血 RBC寿命测定: 血管内溶血红细胞膜缺陷的检验 红细胞渗透脆性试验 RBC孵育渗透性试验 脆性增高 遗传性球形红细胞增多症脆性减低 海洋性贫血、缺铁性贫血自身溶血试验及纠正试验1、球形RBC增多症时,溶血明显增加,加葡萄糖、 ATP溶血明显纠正。2、G-6-PD缺乏症溶血增加,加葡萄糖、ATP溶血部 分纠正。 3、PK缺乏症加葡萄糖不能纠正。加入ATP能纠正。血管内溶血 1、疑PNH Ham试验、蔗糖溶血试验、Rous试验、蛇毒 溶血试验 2、疑AIHA Coombs(直接、间接)、泠凝集试验(泠凝 集综合症阳性)、冷热双相溶血试验(PCH )溶血性贫血思考题1.溶贫(血管内或血管外)为什么引起高胆红素血 症? 2.红细胞酶缺陷常用哪些实验?常见哪些疾病? 3.红细胞膜缺陷常用哪些实验?常见哪些疾病? 4.海因小体是如何形成的? 5.PNH的实验室检查有哪些?最常用的试验? 6.AIHA的实验室检查有哪些?最常用的试验? 7.检查红细胞表面不完全抗体首选哪种试验? 8.血管内、外溶血的化验结果有何不同?概念:溶血性贫血 海因小体 血管内溶血 血管外溶血 PNH AIHA1、男12岁,自幼贫血,脾肋下2cm, Hb80g/L, RBC脆性试验增加,球形红细胞25%。考虑为何种疾病?此病人为何种溶血?(血管内或血管外),需要进一步做何种检查?2、患者,女,30岁,头昏乏力,贫血貌,脾 大肋下2cm中等硬度。实验室检查: HBG70g/L,RBC2.201012/L, WBC5.0109/L,网织红细胞10%,Coombs 试验阳性。4个月内无输血及特殊药物史, 尿胆原强阳性,大便颜色加深,该患者应考 虑为: A. ABO溶血病 B. 药物诱发性溶血性贫血 C. 温抗体型自身免疫性溶血性贫血 D. 蚕豆病 E. 遗传性球形红细胞增多症常见病因及发病机制是:A.骨髓造血衰竭 B. 红细胞破坏增多. C. 造血物质缺乏. D. 造血物质需要增加3、青年女性,脱发,四肢关节痛半年,肝、脾均 于肋下2厘米,查Hb60/L,RBC1.81012/L, WBC7.7109/L,plt150109/L,网织红细胞 12%,骨髓示增生性贫血,酸化血清溶血实验 (),尿蛋白(+)。最可能的诊断是:A.再生障碍性贫血B.急性白血病C.自身免疫性溶血性贫血D.脾功能亢进E.阵发性睡眠性血红蛋白尿.。 需要进一步做何种检查确诊?4、女性,37岁,1年前诊断为再生障碍性贫 血,经治疗好转。2个月来乏力,头晕加重 ,间有酱油色尿。查
网站客服QQ:2055934822
金锄头文库版权所有
经营许可证:蜀ICP备13022795号 | 川公网安备 51140202000112号