玉米种子纯度盐溶蛋 白电泳鉴定方法 1.仪器设备电泳仪、电泳槽、单籽粒粉碎器、天平、酸度 计、磁力搅拌器、高速离心机、电冰箱、电炉 、离心管（1.5ml）、移液管、微量进样器、恒温箱、观片灯等2. 试 剂 丙烯酰胺、双丙烯酰胺、乳酸、甘氨酸、 抗坏血酸、硫酸亚铁、氯化钠、蔗糖、甲 基氯、三氯乙酸、过氧化氢、靠马斯亮蓝 、无水乙醇、正丁醇（所用试剂均为分析 纯，所用水为去离子水）3.溶液配制 电极缓冲液：甘氨酸，乳酸PH3.3 样品提取液：氯化钠、蔗糖、甲基氯 分离胶缓冲液：乳酸钠、乳酸PH3.0 分离胶溶液：丙烯酰胺、双丙烯酰胺 浓缩胶缓冲液：乳酸钠、乳酸PH5.2 浓缩胶溶液：丙烯酰胺、双丙烯酰胺 3%过氧化氢溶液 染色液：考马斯亮蓝溶液、10%三氯乙酸溶液4.电泳操作样品制备:粉碎样品加入样品提取液； 凝胶制备: 安装玻璃板封底缝灌分离胶灌浓缩胶 插入样品梳； 点样 电泳 卸板 l染色：30 24小时5.结果计算 电泳测定值计算 样品纯度值计算 Y = 52.9 + 0.461XX（%）=供检样检样 品粒数 - 非本品种粒 数100供检样检样 品粒数6. 图 谱 分 析 1）玉米蛋白质凝胶电泳谱带区域的划分：玉米蛋白质凝胶电泳谱带可根据分子量大小划分为三 个区域： 区、 区、 区。 区为小分子量蛋白质所组成，在该区域中蛋白质谱带数量少，谱带扩 散，染色浅，品种间有差异，但不显著，应作为鉴定的次谱带区。在纯度鉴定中当 区差异不明显时，可根据该区域的谱带差异进行鉴 定。 区为中分子量蛋白质所组成，在该区域中蛋白质谱带数量多，染色深，品种间差异大，为纯度鉴定主要应用区。 区为高分子量蛋白质所组成。该区域蛋白质谱带数量多，染色谱带细 ，易受电泳条件的影响，对于虫蛀、发霉、生病的籽粒，该区域谱带会部分或全部消失，在该区域品种间差异小，不太容易观察，最好不作为纯度鉴定用。 2）玉米蛋白质电泳谱带的特异性不同的玉米品种具有不同的蛋白质组成，所以 表现在电泳谱带上就有不同的谱带类型，主要 是谱带数目、位置、相对强弱的差异。玉米蛋 白质电泳就是利用这些差异来鉴定品种的，也 就是说，不同的玉米品种其蛋白质凝胶电泳谱 带有其特异性。电泳谱带能准确地表现出这些 品种间的差异。 3）玉米杂交种和亲本自交系的蛋白质电泳谱带类型互补型谱带：在杂交种中出现两条谱带，其一条谱带和父本自交系的一致，另一条和母本自交系的一致 ，则两条谱带称作互补带，这表明杂交种的两条谱带 分别来自于父母本自交系。偏母或偏父型谱带：这种类型的谱带是杂交种继承了母本或父本自交系的谱带，这种情况有时是继承两 条，有时只继承一条。互补型谱带中任意一条也可看 作是偏父或偏母的谱带。新谱带型：这种类型的谱带是指杂交种中出现的一条或多条谱带是父母本双亲自交系均不具备的谱带，既不象父本也不象母本的谱带，新谱带型并不是左右杂交种均会发生。杂交种和亲本自交系谱带关系一般有以上几种类型，作为杂交种纯度鉴定最常用的是互补型谱带，这也是杂交种中常出现的一种谱带类型，其次为偏亲型和新增型谱带。3.玉米杂交种纯度鉴定中应注意的问题 同一品种的玉米杂交种的蛋白质电泳谱带应该 是很一致的，这在大多数杂交种的谱带中能得 到证实，但在大量分析杂交种纯度时，我们发 现有些籽粒谱带会出现一些异常情况： 1.新谱带型偶然出现：这种情况很可能是由于 制种时某些籽粒发生突变或自交系中有突变体 造成的，该种情况应将其当作杂交种计算纯度 。 2. 丢失某些谱带现象：在杂交种中有多条互补型谱带时，其中某粒可能有一条谱带不出现互补而呈现偏亲 型谱带出现，其它互补带仍然出现，这说明该籽粒也 为杂交种，只是杂交不完全或发生突变。这种情况应 将其记入杂交种计算纯度。 3. 越代种的谱带型式：当有F2代玉米掺入杂交种或用越代种冒充杂交种时，同一批种子的不同籽粒的蛋白 质电泳谱带表现很大差异，采用玉米蛋白质电泳法就 能很容易的鉴定出来。 4.正反交制种的杂交种谱带型式：经实验表明，尽管正反交得到的杂交种一代在籽粒形态上有很大差异，但由于正反交种子具有相同的遗传背景，其电泳谱带上的结果完全一致。4.谱带分析鉴定的原则 1）与标准谱带完全相同的籽粒记为杂交种； 2）在主谱带区（区）与标准谱带完全相同，而在次 谱带区（区）和辅助区（区）有新谱带或丢失谱 带的籽粒记为杂 交种； 3）有两对以上互补谱带 的品种，若一对互补谱带 未 出现，而其它互补谱带 均出现，这种籽粒仍记为杂 交种； 4）未出现杂交种标志谱带的籽粒记为异品种籽粒； 5）只表达出父本或母本标志谱带的籽粒分别记为 父 本或母本自交粒。农作物种子检验员专业知识考试模拟试卷（室内检验员） 一、选择题（从四个备选项中选出最符合题意要求的一项填在 括号内；每小题1分，共20分；答案选错、未选或多选者，该 题不得分也不扣分） 1. 在执法部门查处的下列经营活动中，那些属于假种子的行为 ？ （ C） A：销售已变质的发霉种子 B：销售纯度为85%的玉米种子 C：把乙品种种子标签标注为甲品种进行销售 D: 大豆种子标签标注为发芽率为“85%”，而实际发芽率只有 “75%” 2. 发芽率属于种子质量特性中的（ B ） A.物理质量 B. 生理质量 C. 遗传质量 D. 卫生质量 3. 关于种子发芽率和活力的含义和区别，下列哪种表述最为准 确？ （C） A. 发芽率高的种子，其活力必然高 B. 发芽率是比活力更敏感的种子生理质量指标 C. 两批发芽率相同的种子，其种子活力可能具有较大差异 D. 发芽率和活力是不同的指标，两者之间没有关系 4. 根据标准化法的规定，目前我国标准化分为（B） A. 国家标准、专业标准、地方标准和企业标准 B. 国家标准、行业标准、地方标准和企业标准 C. 国际标准、国家标准、地方标准和内部标准 D. 国家标准、行业标准、地方标准和内部标准 5. 在下列选项中，三种作物均属于禾本科的是（C） A. 棉花、大豆、油菜 B. 油菜、西瓜、辣椒 C. 稻、小麦、玉米 C. 玉米、棉花、大豆 6. 下列选项中可以不在标签上具体标注的是 A.育种家种子 ；B. 原种；C.杂交亲本种子；D. 大田用种 7. 根据种子法第四十四条规定，农业行政主管部门可以委托下 列哪个机构承担种子质量检验工作（D） A. 农业部门设立的种子质量检验机构 B. 技术监督部门设立的种子质量检验机构 C. 种子科研部门设立的种子质量检验机构 D. 具备相应检测条件和能力，并经省级以上人民政府有关主 管部门考核合格的种子质量检验机构 8. 标签标注的生产商是指（A） A. 最初的种子供应商； B. 种子生产企业 C. 种子生产基地； D. 种子销售部门 9. 在下列检验项目中，测定时需要使用对照样品的是（B） A. 发芽试验； B. 真实性和品种纯度鉴定 C. 水分测定； D. 净度分析 10. 净度分析时，需将分析后的各组分重量之和与原始试样重量 进行比较，核对分析期间物质有无增失，如果增失差距超过原试 样重量达到下列中的哪项，则净度分析需要重做。（C）A. 2% ; B. 3% ; C. 5% ; D.6% 11. 当玉米种子水分约处于14%时，测定方法应选用（B） A. 低温烘干法； B. 高温烘干法 C. 高水分预先烘干法； D. 直接烘干法 12. 用烘箱法测定种子水分时，应当全部除去的是（B） A. 自由水； B. 自由水和束缚水 C. 自由水和化合水； D. 束缚水和化合水 13. 主要农作物种子标签除去一般农作物种子通用标注内容外 ，还需要加注生产许可证号和以下哪项？ （C） A. 种子批号； B. 经营许可证号 C. 品种审定编号； D. 检疫证明编号 14. 某一小麦种子发芽试验4次重复的百分率分别为96%、94% 、98%、95%，则发芽率为下列哪个结果？ （B） A. 95.75% ； B. 96%； C. 95%； D. 95.8% 15. 在净度分析中，重量为10.0099.99g的试样称重应精确 到（C） A.4位小数；B. 3位小数； C. 2位小数； D.1位小数 16. 在发芽试验中，由生理休眠所引起，在试验期间保持清洁和一定硬度，并有生长成为正常幼苗潜力的，应记录为哪一类 ？ A.硬实； B. 新鲜不发芽； C. 死种子；D. 不正常幼苗 17. 种子活力测定可以（A） A. 提供有关高发芽率种子批的田间出苗潜力的信息 B. 提供种子发芽的潜在能力或种胚具有的生命力的信息 C. 提供种子在适宜条件下长成正常植株的能力的信息 D. 提供种子在室内条件下长成正常幼苗的能力的信息 18. 进行其他植物种子数目测定时，如果送验者所指定的种难 以鉴定，则采用（C） A. 完全检验； B. 有限检验；C. 简化检验；D. 不完全检验 19. 一份样品水分测定后得到以下数据：样品盒和盖的重量为 4.005g，样品盒和盖及样品的烘前重量为8.648g ，样品盒和盖 及样品的烘后重量为7.891g ,则这份样品的水分为 A. 16.3%； B. 15.6%； C. 17.2%； D. 16.6% 20. 在下列选项中，两个检验项目的最终结果都保留一位小数 的是（C） A. 净度、发芽率； B. 发芽率、生活力 C. 净度、品种纯度； D. 生活力、水分 二、判断题（在每小题的括号内填入判断结果，你认为正确的 在括号内打“” ，错误的打“” ；每小题1分，共10分，判断正 确的得分，判断错误或不作判断的不得分也不扣分） 1. 种子生活力和发芽率是衡量种子生理质量的不同指标，具有 完全不同的含义，但在有的情况下，两者的测定值是基本一致 的。（） 2. 如果某一类杂质或某一种其他植物种子的重量百分率达到或 超过0.5% 时，该种类应在结果报告单中注明（） 3. 发芽试验时，如果样品在规定试验时间内只有几粒种子开始 发芽，则试验时间可以延长，直至达到最高发芽率。（） 4. 在发芽试验的初次计数时，发育良好的正常幼苗应从发芽床 中拣出，对可疑的或损伤、畸形或不均衡、严重腐烂的幼苗或 发霉的种子通常到末次计数。（） 5. 重量测定的试样是从供检样品中随机选取并均匀混合后分出 的一部分种子（） 6. 新发布的推荐性标准代替原标准并且已经生效，但原标准在 一定条件下仍可使用。（） 7. 当需磨碎的禾谷类作物种子水分超过16%，豆类和油料作物 种子水分超过18%时，必须采用预先烘干法。（） 8. 种子标签标注的质量指标必须根据国家规定的种用标准进行 标准，不得改变。（） 9. 检测机构对检验报告所有内容的真实性、准确性负责。（ ） 10. 分装种子应当注明分装单位和分装日期，而种子质量应由 原装单位负责。（） 三、填空题（根据题意在每题的划线部分填入