报告人：Adam 2014-12-25,血清和糖皮质激素调节蛋白激酶1（SGK1）在RON介导的肺腺癌细胞侵袭性生长中的作用,简介,SGK1作为RON、ERK1/2、-catenin和EMT信号传导的关键蛋白，在RON介导的肺腺癌发生、发展中有重要作用。,Questions：,肺腺癌：肺腺癌（lung adenocarcinoma）是肺癌的一种，属于非小细胞癌。肺腺癌大多起源于较小的支气管粘膜分泌粘液的上皮细胞，因此大多数肺腺癌的早期症状位于肺的周围部分，呈球形肿块，靠近胸膜。腺癌对放射治疗敏感度差。吸烟是引致肺腺癌的主要成因，接触某些化学物质，例如石棉、铀、铭、镍等都可能与肺腺癌有关。,关键词,受体酪氨酸激酶RON：RON是受体酪氨酸家族MET原癌基因 亚家族中的一员, 主要在上皮细胞中表达, 其配体是巨噬细胞刺激蛋白 ( macrophage stimulating protein, MSP)。激活后的RON 在体外引起细胞的分化、迁移、形变和基质侵袭。RON的过度表达、突变及其剪切变异体与人类的结直肠癌、乳腺癌、肺癌及肾癌等多种人体上皮源性肿瘤的发生、发展有关。,关键词,RON激活方式：研究显示 RON 激活的方式有 2种 , 即配体依赖和配体非依赖方式。 RON与MSP结合后 , 迅速通过二聚化产生自身激酶域的磷酸化, 而导致催化效率极大提高, 并且磷酸化的RON亦能发生构象变化, C 末端产生特殊的结合信息分子的多功能锚定位点。而后通过不同的级联途径转导各种信号。这些级联径中包括Ras/有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK), 磷脂酰肌醇-3-磷酸 (PI-3K) /AKT, jun N-末端激酶 (JNK)/应激激活蛋白激酶, -catenin, Smad和核因子-kB(NF-kB)分子等。,关键词,RON的致癌机制：,上皮间质转化（EMT）： EMT指上皮组织丧失上皮特征而 获得间质的表型。EMT包括上皮细胞获得纺锤形的形态、E-钙黏素表达减少、-catenin重新分配、细胞骨架肌动蛋白组、波形蛋白(vimentin)表达增高及-平滑肌肌动蛋白(-SMA)表达。EMT的获得导致上皮源性肿瘤细胞侵袭和转移能力的增强。,关键词,EMT分类： I型EMT：与胚胎形成相关，涉及Wnt、Notch通路； II型EMT：与损伤修复相关，涉及Smads、ERK-MAPK、PI3K-AKT通路； III型EMT：与上皮细胞恶性肿瘤相关，涉及酪氨酸激酶受体、整合素、Wnt、NF-kB、TGF-1通路。,关键词,血清和糖皮质激素调节蛋白激酶（SGK）：一种新的丝/苏氨酸蛋白激酶，与蛋白激酶B（PKB/Akt）具有高度同源性。当细胞受到糖皮质激素或血清刺激后，SGK的转录水平会迅速升高，因此命名为血清和糖皮质激素调节蛋白激酶，有SGK1、2、3三种异构体。SGK1参与了人体许多重要的生理过程，如离子通道活化、细胞增殖与凋亡等。,关键词,Erk1/2：细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases, ERK)分为ERK1和ERK2,统称为ERK1/2,主要被各种生长因子、离子射线、过氧化氢等磷酸化而激活,进入细胞核作用于E1k-1,c-myc,c-fos,c-jun,ATF,NF-kB和AP-1等转录因子,促进某些基因的转录与表达,和细胞的增殖与分化密切相关。,关键词,关键词,-catenin：-链蛋白(-catenin)最早作为一种黏附因子被发现，后来人们发现-catenin还是一种多功能的蛋白质。-catenin主要位于细胞膜，而在胞浆中游离量较少。-catenin的功能主要为介导细胞间黏附和参与基因的表达。-catenin作为一种多功能的蛋白质，广泛存在于各种类型的细胞，如内皮细胞、成纤维细胞、成骨细胞中，在参与这些细胞的增殖、分化和凋亡等方面发挥了重要的调节作用。,临床样本中指标检测,A549细胞中指标检测,siRNA干扰A549细胞,SGK1抑制剂处理,肺腺癌动物造模,小鼠体内的siRNA干扰,课题设计,1.临床样本中指标检测,实验分组： 肺腺癌组织 癌旁正常组织实验方法： Western blot qRT-PCR检测指标： RON、p-RON、SGK1、p-ERK1/2、p-catenin、E-cadherin、Vimentin、Twist,2.A549细胞中指标检测,实验分组： A549细胞实验方法： Western blot qRT-PCR检测指标： RON、p-RON、SGK1、p-ERK1/2、p-catenin、E-cadherin、Vimentin、Twist,3. siRNA干扰A549细胞,实验分组： 对照组 空白组 干扰组实验方法： 脂质体转染 Western blot qRT-PCR CCK-8 流式细胞术 Transwell检测 裸鼠成瘤实验检测指标： RON、p-RON、SGK1、p-ERK1/2、p-catenin、E-cadherin、Vimentin、Twist,4. SGK1抑制剂处理,实验分组： A549细胞 A549+SGK1抑制剂处理实验方法： 脂质体转染 Western blot qRT-PCR CCK-8 流式细胞术 Transwell检测 裸鼠成瘤实验检测指标： RON、p-RON、SGK1、p-ERK1/2、p-catenin、E-cadherin、Vimentin、Twist,5.肺腺癌动物造模,实验分组： 正常小鼠 模型小鼠实验方法： 见下页检测指标： 利用WB检测RON、p-RON、SGK1、p-ERK1/2、p-catenin、E-cadherin、Vimentin、Twist,6.小鼠体内的siRNA干扰,实验分组： 正常小鼠造模组 siRNA干扰小鼠造模组实验方法： Western blot HE染色检测指标： RON、p-RON、SGK1、p-ERK1/2、p-catenin、E-cadherin、Vimentin、Twist,预期结果,SGK1作为RON、ERK1/2、-catenin和EMT信号传导的关键蛋白，在RON介导的肺腺癌发生、发展中有重要作用。,Thank you !,