92K26B,细胞的显微操作,生物科学与生物技术班第三小组,92K26B,一、显微操作： 1、定义：显微操作技术是指在高倍倒置显微镜下，利用显微操作器控制显微注射针在显微镜视野内移动的机械装置，用来进行细胞或早期胚胎操作的一种方法。 2、常见的显微操作技术：细胞核移植、显微注射、嵌合体技术、胚胎移植以及显微切割等,92K26B,二、显微注射的基本原理：是利用管尖极细（0.1至0.5m）的玻璃微量注射针，将外源基因片段直接注射到原核期胚或培养的细胞中，然后藉由宿主基因组序列可能发生的重组）、缺失、复制或易位等现象而使外源基因嵌入宿主的染色体内 。,92K26B,优点：任何DNA在原则上均可传入任何种类的细胞内 外源基因没有长度上的限制，目前已证明数百kb之DNA片段均可以成功产制出转基因动物 效率较高,92K26B,缺点：操作者的要求较高设备精密而昂贵注射的细胞数较少,92K26B,三、应用细胞的发育、细胞的生化、细胞的生理、构建转基因动物、iRNA、辅助生殖,92K26B,四、设备和材料： 1、倒置显微镜 2、微操作仪 3、微注射器 4、拉针仪 5、玻璃注射针头 6、试剂：缓冲培养液、注射缓冲液,92K26B,五、准备工作 1、DNA的制备 2、注射针的制作 3、把持针的制作 4、载玻片的准备 5、显微注射用细胞的准备,92K26B,六、显微注射操作过程 1、针头装液 2、针头定位 3、显微注射的操作 手动细胞核内注射 自动细胞核内注射和细胞质内注射 4、对注射了荧光标记物的细胞的分析,92K26B,92K26B,92K26B,