丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用,P、97,生物化学与分子生物学实验 CQMU,丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用,目的： P、97,原理：1、概念：丙二酸（I）与琥珀酸（S）结构相似，竞争结合琥珀酸脱氢酶活性中心，抑制酶活性。,2、竞争性抑制特点： P、98 Vm不变，Km ； E 的抑制程度 I/S ； S足够大，抑制解除。,3、观察：,操作：1、酶提取液的制备2、取试管6支，按表所列步骤操作。3、实验结果及分析,注意事项 ：,一、实验目的,学习和掌握酶竞争性抑制的概念和特点观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用,二、实验原理,抑制剂和底物的结构相似，可与底物竞争酶的活性中心，阻碍酶-底物复合物的形成。,酶的竞争性抑制作用,抑制程度取决于抑制剂与酶的相对亲和力以及抑制剂与底物浓度的相对比例（I/S）, Km和Vmax的求法 底物浓度曲线是双曲线。, 竞争性抑制的动力学,以1/V对1/S作图,HOOCCH2CH2COOH,HOOCCH=CHCOOH,FAD,FADH2,MBH2甲烯白（无色）,MB甲烯蓝（蓝色）,在无氧条件下，以甲烯蓝褪色时间来判断琥珀酸脱氢酶活性的改变。,丙二酸 HOOCCH2COOH,琥珀酸脱氢酶,酶活性,则甲烯蓝褪色时间,高,低,较短,延长,三、实验步骤,1. 酶提取液的制备处死大白鼠，取出肝、肾、心。制备匀浆液。,. 酶促反应及竞争性抑制作用取试管6支，按表所列步骤操作。加液体石蜡以隔绝空气，37水浴保温。 随时观察各管，记录褪色所需时间。,3. 结果及分析,酶提取液中有没有琥珀酸脱氢酶活性？ 各管的褪色情况有何区别？为什么？ 丙二酸对琥珀酸脱氢酶抑制作用的类型及其特点是什么？ 本实验中5号、6号试管的作用是什么？,P.99,四、注意事项,加试剂时看清底物与抑制剂的浓度。注意随时观察各管褪色情况。37水浴保温过程中，不能振摇试管，避免甲烯白重新氧化变蓝。实验结束后，一定要洗净试管内的液体石蜡。,Lets begin！,