麻风分枝杆菌的 实验室检查,艾滋病性病皮肤病防治研究所,一、临床意义,（1） 麻风病人的诊断； （2） 麻风病人的疗效观察； （3） 确定三联化疗治疗方案； （4） 判断预后、确定复发； （5） 科研。如鼠足垫接种、药物筛选等。,二取材部位的选择,（1）常规查菌部位:眉弓、耳垂、下颌、皮损。（2） 结节取中央、斑块取边缘交界处。（3）不要选择冻疮、溃疡、裂口和结痂部位。,麻风面部结节伴巩膜麻风瘤,三取材方法,（1） 消毒。 （2） 使局部贫血。 （3） 伤口长约5毫米、深约2-3毫米。 （4） 止血。 （5） 取足够的组织液。（不得少于绿豆大小。）,四涂片,（1）以45度角将皮肤组织液均匀地涂布于载玻片上，涂点大小7毫米。 （2）自然干燥后妥善保管，防蚊蝇吃掉，防玻片断裂，注意编号，查对真实姓名，保证玻片编号及姓名与真实姓名吻合。 （3） 防止混血和污染。,麻风病人面部温度示意图,耳垂取材操作图,组织液涂片操作图,五染片,（1）染液配制： A 石碳酸复红液，取碱性复红4G，溶于95%酒精100ML中制成饱和液。再取饱和液10ML与5%石碳酸液90ML混匀即成。B 1%的盐酸酒精，取浓盐酸1ML，70%酒精99ML混匀即成。C 碱性美兰液，取美兰2G，溶于95%酒精100ML中制成饱和液，再取饱和液30ML加入蒸馏水100ML及10%的氢氧化钾0.1ML混匀即成。,（2）染色： A 固定，以钟摆的速度将涂片通过酒精灯火焰中部3次。B 滴入足够的石碳酸复红液（将涂膜全部覆盖）于玻片涂片上，加热使冒气，保持10分钟。C 待冷后用水冲去玻片上的染液，1%的盐酸酒精脱色10-30秒，以涂膜呈极淡红色或无色为宜。用水冲去脱色剂。D 加美兰液复染半至一分钟，水洗，自然干燥。,六镜检,（1） 麻风杆菌形态：麻风杆菌一般为短小直棒状或稍有弯曲，长约1-8微米，宽约0.3-0.4微米。没有鞭毛、芽胞和荚膜。麻风杆菌具有抗酸性，即具有抵抗稀酸类脱色剂脱色作用的性质。抗酸性是麻风杆菌的一个重要特征。麻风杆菌革蓝氏染色呈阳性。麻风杆菌另一个重要特点就是多形性。未经治疗的早期病人或复发病人其形态较为完整。治疗后多为断裂或颗粒形。此外麻风杆菌数量较多时往往集簇存在，形成菌团或菌束。,抗酸染色镜下的麻风杆菌,抗酸染色镜下的麻风杆菌,（2）镜检方法：涂片自然凉干后放入分辨率较高的显微镜上，先用低倍镜对焦，找到涂膜中间部分，然后移去低倍镜，放入镜油，换上油镜，以弓字形方式逐一检视整个涂膜，按雷德里记数标准计算结果。要求，阳性涂膜至少检视50 个视野，阴性涂膜至少检视200个视野。,（3） 雷德里计数标准： 0=观察100个油镜视野未查见ML。 1=观察100个油镜视野查见1-10条ML。 2=观察100个油镜视野，平均每10个视野有1-10条ML。 3=观察25个油镜视野，平均每视野有1-10条ML。 4=观察25个油镜视野，平均每视野有10-100条ML。 5=观察25个油镜视野，平均每视野有100-1000条ML。 6=观察25个油镜视野，平均每视野有1000或1000条以上ML。,平均每视野有100-1000条ML,（4） BI指数（细菌指数）计算公式：各涂膜BI总和 BI （细菌指数）=涂膜数,：,（5）菌团细菌数的估计方法： 细菌计数时，经常会遇到菌球或菌团，因此需按照菌团或菌束的大小估计其细菌数。一般大菌球约百条细菌，中菌球约50条细菌，小菌球约20条细菌。能直接计数的尽量直接计数。,麻风分枝杆菌形成的菌团,七报告,（1）麻风病细菌学检查需报告检查部位的细菌（“+”数）和雷德里分级数（BI指数）两种结果。（2） 不要直接报告“查见麻风杆菌”或“未查见麻风杆菌”。,八、注意事项,1、涂片质量要高：涂片厚薄一致，涂点大小一致，不含红细胞，最好每个视野有一两个巨噬细胞。2、染色质量要好：麻风杆菌成鲜红色，淋巴细胞呈兰色。3、显微镜分辨率要好；4、检验人员技术要硬。,谢谢！,