肿瘤标志物研究策略 及新肿瘤标志物,肿瘤标志物 肿瘤细胞所产生或分泌的某种蛋白质或其它物质，与肿瘤的存在和发展密切关系。 可用于肿瘤的筛查、诊断、治疗疗效监测和预后判断。,常见分类法: 蛋白类 糖蛋白类 酶类 激素类 核酸类,肿瘤特异性抗原(tumor specific antigen, TSA) 仅存在于某种肿瘤细胞表面，而不存在于相应正常组织细胞或其它肿瘤细胞表面的抗原。 肿瘤相关性抗原(tumor-associated antigen,TAA) 肿瘤细胞和正常组织细胞都表达的抗原物质，只是其含量在细胞癌变时明显升高，仅表现为量的变化，无严格肿瘤特异性，如胚胎抗原，分化抗原等。,理想的肿瘤标志物,1. 灵敏度高：可以用于肿瘤早期发现、早期诊断 2. 特异性好：肿瘤为阳性，而非肿瘤时为阴性 3. 能对肿瘤进行定位：具有器官特异性 4. 与疾病的严重程度：肿瘤大小，分期有关 5. 监测肿瘤的疗效 6. 监测肿瘤的复发 7. 预测肿瘤的预后,理想是美好的，道路是曲折的,理想状态,实际状态,肿瘤太狡猾,肿瘤细胞异质性大 肿瘤的发生发展过程复杂 多基因多因素参与 理想肿瘤标志物任重而道远！,肿瘤标志物的筛选和研发策略,肿瘤标志物的筛选和研发策略,美国国立癌症研究员制定的五个阶段 一、临床前探索性研究 二、临床方法检测已有疾病 三、纵向回顾性分析研究 四、前瞻性筛查研究 五、控癌研究,一、临床前探索性研究,寻找新的肿瘤标志物 研究标本 1.肿瘤组织与非肿瘤组织 2.肿瘤细胞株与正常细胞株 研究使用的方法技术 1. 组织芯片 2. 基因芯片 3. 蛋白质差异表达比较 4. 单克隆抗体技术,一、临床前探索性研究,寻找新的肿瘤标志物 研究标本 1.肿瘤组织与非肿瘤组织 2.肿瘤细胞株与正常细胞株 研究使用的方法技术 1. 组织芯片 2. 基因芯片 3. 蛋白质差异表达比较 4. 单克隆抗体技术,差异比较,组织芯片,是生物芯片技术的一个重要分支，是将许多不同个体组织标本以规则阵列方式排布于同一载玻片上，进行同一指标的原位组织学研究。,选取所需蜡块,常规切片做HE 染色,显微镜下 确定目标区并做定位标记。,1 组织芯片制备过程,采用组织芯片仪在受体蜡块上打孔,并精确排成 微孔阵列。 在做标记的蜡块上钻取组织柱,按设计方案移到 受体蜡块上。,把设计好的蜡块放入温箱,根据蜡质,调定温箱 温度,在半融状态下取出,室温冷却,放入4 冰 箱中备用。 借助特定切片辅助系统粘着包被带卷片系统, 对组织芯片蜡块连续切片。切片厚度2 3m , 一般可切片50100 张。,各种不同低、中、高密度组织芯片,1,2是低密度组织芯片（组织点600),基因芯片,基因芯片的测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，在一块基片表面固定了序列已知的核苷酸的探针。,DNA芯片,6400点的基因芯片 （面积 12X14 mm),蛋白质差异表达比较,二维电泳 蛋白质比较研究的质谱相关技术 SELDI蛋白质芯片技术,1.Expression proteomics (表达蛋白组学) The study of global changes in protein expression,Proteomics,2.Cell-map proteomics （细胞图谱蛋白组学） The systematic study of protein-protein interactions through the isolation of protein complexes,蛋白质差异表达比较,双向凝胶电泳是利用不同蛋白质的物理、化学性质的差异，把复杂蛋白混合物中的蛋白质在二维平面上展开。 第一向等电聚焦: 等电点 第二向SDS-PAGE：分子量,二维电泳,蛋白质比较研究的质谱相关技术,基质辅助激光解吸电离技术MALDI (Matrix-assisted laser desorption/ionization) 电喷雾电离质谱术 ESI （ Electrospray ionisation ）,单克隆抗体技术的核心是用骨髓瘤细胞与经特定抗源免疫刺激的B淋巴细胞融合得到杂交瘤细胞，杂交瘤细胞既能象骨髓瘤细胞那样在体外无限增殖，又具有B淋巴细胞产生特异性抗体的能力。,单克隆抗体技术,单克隆抗体技术,1.使用肿瘤细胞免疫动物后，得到的杂交瘤细胞产生的抗体，反过来寻找抗原。 2.在肿瘤细胞中验证,新肿瘤标志物,1.HE4 2.GP73 3.Her-2 4. Pepsinogen 5.S100 6.PRO-GRP,HE4,属于乳清酸性4-二硫化中心（WFDC）蛋白家族. HE4首先在附睾远端的上皮中被发现，并且最初认为它是一种与精子成熟相关的蛋白酶抑制剂。一 分泌型HE4已经在卵巢癌患者的血清中检测到有高水平表达。,GP73,GP73是存在于高尔基体的一种跨膜蛋白。 2000年Kladney研究表明，在正常的人体肝组织中，GP73主要由胆管上皮细胞表达，而肝细胞表达很少甚至不表达。肝细胞受到病毒感染后可引起GP73的表达上调。 2005年Block等发现，在肝癌患者血清中GP73水平显著升高。在一项研究中，与肝硬化患者相比，144例肝癌患者的血清GP73水平显著升高。GP73诊断肝癌的敏感性为69%，特异性为75%。,人类表皮生长因子受体2-Her2,Her2基因,即c-erbB-2基因，定位于染色体17q12-21.32上,编码相对分子质量为185000的跨膜受体样蛋白，具有酪氨酸激酶活性 Her2阳性(过表达或扩增)的乳腺癌，其临床特点和生物学行为有特殊表现，治疗模式也与其他类型的乳腺癌有很大的区别，目前已有针对该基因失活的药物-赫赛汀（Herceptin） 临床意义： 是重要的乳腺癌预后判断因子 用于指导赫赛汀治疗 选择化疗方案以及疗效评价,胃蛋白酶原-pepsinogen,胃蛋白酶原是由胃粘膜分泌的胃蛋白酶前体 PGI仅存在于胃底和胃体部粘膜的主细胞、颈粘液细胞，而PGII则分布于全胃及十二指肠的Burnner腺细胞，均可在血清与尿液中测出 胃癌患者PGI的含量及PGI/PGII比值均明显降低，测定PGI水平与PGI/PGII比值可作为胃癌诊断的一个辅助指标 PGI与胃酸的分泌存在平行关系。PGI水平和PGI/PGII的比值能够反映胃粘膜的功能状态，并且与胃粘膜萎缩的范围及严重程度显著相关。鉴于中、重度萎缩性胃炎与肠型胃癌的发生关系密切，PGI或PGI/PGII比值明显降低预示患肠型胃癌的危险因素增加,S100,S100蛋白分子量为10.5KD的钙结合蛋白 S100A1和S100B是最先发现的成员。由中枢神经系统细胞表达，特别是星形胶质细胞、黑色素瘤细胞和其他一些组织也有表达 临床意义： 恶性黑色素瘤患者，特别是II、III和IV期的患者，血清S100浓度的升高提示疾病的进展，连续检测有助于疗效的评估 多种类型的大脑损伤，脑脊液中S100的浓度会升高，并能 释放到血中，多种疾病导致的脑损伤，如脑外伤、中风和 脑肿瘤的患者血清中能检测出S100,胃泌素释放肽前体-Pro-GRP,神经内分泌组织异常分化所导致，外周循环中ProGRP的正常上限为50pg/ml 血清ProGRP水平与肺癌的病理类型有着相关性，小细胞肺癌（SCLC）比非小细胞肺癌（NSCLC）具有更高的水平，ProGRP对小细胞肺癌有较高的敏感性 ProGRP结合NSE对SCLC治疗进行疗效的监测 可用于SCLC的诊断, 早期发现肿瘤复发 部分慢性肾功能衰竭患者血清ProGRP也可升高，故临床检测时宜同时检查患者的肾功能,每年有很多新的肿瘤标志物报道 期待更多的新的肿瘤标志物,谢谢,