现代组织化学技术组织化学与细胞化学学习要求1.掌握组织化学技术的基本概念2.熟悉组织化学和免疫组织化学标本的制备方法及过程3.掌握酶组线化学的基本原理4.熟悉高碘酸Schiff(PAS)反应、过氧化物酶、酸性磷酸酶铅法的基本原理1.什么是组织化学与细胞化学技术?Histochemistryandcytochemistry-介于细胞生物学、组织学、化学、生物化学、免疫学及分子生物学之间的边缘科学-对组织与细胞的化学成分或者酶活性进行熹彗定伟和定量的研究、常统称为组织化弛-在保持组织或细胞基本不改变其生活状态时的微细结构的条件下,利用某些特异性的反应,采用显微镜技术观察某些化学成分或酶活性在组织或细胞内的定性、定位和定量及其变化规律2.组织化学与细胞化学技术的特点普通组织学技术:组织原位,染色,显微镜观察zy7从2.组织化学与细胞化学技术的特点组织化学与细胞化学技术s法春示粘多粲醒余Crmp0t组织原位,特异性的化学反应,显微镜观察一一对组织或者细胞内特定物质进行定性,定位,定量分析3.组织化学与细胞化学技术的主要类型化学方法,类化学方法,物理学方法,星微烧灰方法,免疫学方法,分子生物学方法等常用分类:(1)一般组织化学与细胞化学(2)免疫组织化学与细胞化学(3)原位杂交组织化学*每种均有光镜和电镜之分和定性与定量之分4.组织化学与细胞化学技术的基本要求(1)保持组织和细胞的完整性(2)被检物质具有不溶性和(或可视性(3)反应具有特异性(4)反应具有灵敏性(5)可重复性2丁耳又材(drawmaterial)(D组织标本取材:准备充分、麻醉或处死方法合近、操作迅速、刀应锐利、造当清洗、离体即固定(或冷冻切片,或保存于-80C冰箱)、大小适中(约2.5cmx2.5cmx0.2cm,宁可面积大,不能厚)(2)细胞标本取村:涂片法:培养的悬浮细胞,人体液中的细胞等,细胞密度低时可先沉淀或者离心;爬片法:贴壁生长的培养细胞;印片法:活组织标本、尸检标本及子宠颈外口等脱落细胞2.固定(fixation)(D固定的目的:保持组织细胞原有的形态结构;使组织硬化;对组织化学及细胞化学技术来说-保存酶活性和蛋白质的抗原性非常重要(2)固定的优、缺点:优点:使组织细胞的形态结构得到保持缺点:拟检物质反应性减弱,酶的活性易受损2.固定(3)常用固定剂的种类及特点单一固定剂:A交联固定剂甲醛、多聚甲醛、成二醛等,与蛎白多肽链氙基戛侧链的功能基团,如氢基、羟基、酯氙基等结合,俭蛎白分子相互交联,保存抗原于原位。其特点是组织形态结构保存好,学通性强,组织收笠少但是,与抗原蛎白氯基交联形成独甲基,使抗原决定铭的空间构象出现陈碍,可能部分或完全遮盘抗原决定篪,在免疫组织化学染色时产生假阮性结果。固定时绮短固定时间C8-24小时,降低园定温度(4C、固定后兆分水洗、在免疫组织化学染色之前通过抗原修复等可提高抗原反应性。常用的有,10%福尔马林(即4%甲醛、4%多联甲醛(应用最为广泛)、25%成二醛等戊二醛含两个醛基,对膜结构国定更好,但是形成更多的交联,对抗原活性有影咨