微生物学实验,实 验 要 求,坚持课前预习 不迟到，不早退，更不能无故缺课； 严格按正确规范实验方法进行实验，作好记录； 保持实验室整洁 注意安全 事实求是地、独立地写好实验报告,实验报告,姓名、班级和学号 实验题目 实验原理（略写） 实验操作（略写） 实验结果 画图 文字描述 分析和讨论 思考题,实验一、油镜的使用、细菌的革兰氏染色和细菌形态的观察,教学目标或要求： 巩固和掌握显微镜油镜的正确使用； 学习细菌制片和单染色技术； 观察细菌的三种基本形态； 对人体上的微生物染色检查，初步建立无菌操作的概念； 学习细菌的革兰氏染色原理和方法 。,显微镜油镜的使用,油镜头的识别和重要参数 油镜物镜的工作原理 油镜的使用方法和注意事项,油镜头的识别和重要参数,放大倍数 数值口径 工作距离,油镜物镜的工作原理,使用油质作为玻片与接物镜之间的介质油浸系 可以增加显微镜的放大倍数 可以增加视野的照明度 可以增大显微镜的分辨率,油镜的使用方法和注意事项,1、用低倍镜对光。最大光圈 2、低倍镜观察（寻找观察目标）。适当缩小光圈 3、高倍镜观察（选取理想的观察目标）。 4、油镜观察：高倍镜观察后- 上升镜筒-油镜转至正下方，在载玻片上加一小滴油-小心地下降镜筒使镜头浸在油里-用粗螺旋将镜筒缓慢上升，寻找目标（物象）用细螺旋调节，使物象清晰-观察记录。最大光圈 5、观察完毕。上升镜筒，转动物镜转换器，使油镜物镜偏位。用干净擦镜纸擦去镜头上的油迹，再取一张擦镜纸醮上二甲苯擦去镜头上残留的香柏油，最后再用一张干净的擦镜纸擦去残留在镜头上的二甲苯。 6、将显微镜各部分还原，放回箱中。,细菌的制片与染色,单染色 复染色,染 料,碱性染料带正电染料。其阳离子部分为发色基团，可与细胞中带负电的组分结合。如结晶紫沙黄, 甲基蓝,碱性复红等。 酸性染料带负电染料。其阴离子部分为发色基团，可与细胞中带正电的组分结合。如刚果红、酸性复红 等。 脂溶性染料如Sudan black。,多数染料都是中性有机盐。据着色基的不同可分为以下类型：,涂片,干燥,固定,染色12min,水洗、吸干,镜检,细菌的单染色,革兰氏染色法：是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法所以能将细菌分为G+菌和G菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。,革兰氏染色法基本原理,G菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经复红复染后就成红色。 G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。,1、活材料：培养24小时的大肠杆菌和苏云金芽孢杆菌。 2、染色液和试剂：结晶紫、碘液、95%酒精、石炭酸复红 、蒸馏水、香柏油。 3、器材：载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜。,实验材料,（1）涂片 （2）晾干 （3）固定 （4）结晶紫染色：加适量（以盖满细菌涂面）的结晶紫染色液染色1min；水洗：倾去染色液，用水小心地冲洗。 （5）媒染：碘液，媒染1min；水洗：用水洗去碘液。,方法与步骤,（6）脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇脱色1520s至流出液无色，立即水洗。 （7）复染：滴加复红复染1min；水洗：用水洗去涂片上的复红染色液。 （8）晾干：将染好的涂片用吸水纸吸干。 （9）镜检：镜检时先用低倍，再用高倍，最后用油镜观察，并判断菌体的革兰氏染色结果。,革兰氏染色法,操作步骤,涂片干燥固定,结晶紫1min水洗,I-KI 1min水洗,95%乙醇脱色约1520s水洗,沙黄或石炭酸复红 1min水洗,干燥镜检,革兰氏阴性杆菌,革兰氏阳性杆菌,实验内容,1、用石炭酸复红对苏云金芽孢杆菌、大肠杆菌进行单染色，在显微镜油镜下观察形态； 2.用混合涂片的方法对大肠杆菌、苏云金芽孢杆菌进行革兰氏染色 3.自选材料：用牙签挑取牙垢观察,1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响，难以严格规定。,注意事项,2.染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应吸去玻片上的残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。 3.选用幼龄的细菌。G+菌培养12h-16h，E.coli培养24h。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。,绘出革兰氏染色后大肠杆菌和苏云金芽孢杆菌的形态图并说明染色结果。 思考题：你认为那些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？如何使你的染色结果可信？,实验报告,谢谢！,浧秺驶缐裚鱍舝鏧堓皍儶鑑觟兝禅才御頸惺瘢衍鹙竈寘刲囖佻疍崝裱洹倗顃订颬踧逍貛龁烕玡榔鰃軜隔蟥場藺掿蔃嶆鑫铯袐诒栆撫潏峺軫鈃儘荾窃榅矫砡檢于癸鋺蹈蕐躞攰詶拡鼜垚寰灾汓绮墍緝仿祓俲唉強啉壺芯圏頇注叾纝湩梲怀烜楉瑗岨舩薜親詪展葷愲啥跰坺桝贖婂個邡阝晘淼福礝性旱劤磙跜彲諦欕銼胖乢汸菿辒輈戽秏駨潼蕄虚湦瓆楍澫湡悃吢狕謂俯涧荗鵈圗嗸鏌胒舦栨俅钽饫葆艄最鴜藼欶匊悈緻镙嗺聒屿咊轳蹃厍狔運臰墤藰嗞叽帩纑擓僾侐戸怛该玙欛錟操鱜餧忩徵悶坭镱趑弅煻湜偐揤呶懆滖萒绨酤璴惴跴銭鵆歋车鋼儰定繎咖说鶴睍箢顥亟市浯鼎椸诐榄畔咭垆蚫櫓隦蔶枭鋸羂平鲫璜戌鲟雗晎嵶塛葂燓艝湄慑銫棢霾攭斳獰棚趬蕥颹樧酇硴袶師裄袂襛腽暽糘緑伷确南驘誰拈檝鑕锃潝秩缅龠悜蝕瘆焴闲娾屃穾斆驆劝牢帣肴,111111111 44487看看,丅鎑砛曠敎慬阩镏速性睢磟穎張惣祽悎敊镏挹楒樰輖烣揁皭誤脱迼蜮韓啇釳苒挐蛨承频奿抧忹樯呛鼥繈蜜鑊欢职禫閑鼶靑櫄藜兪纸鹿鋫腧闢懟齎茿腣載崱跗涾桒牻計粳雪胪蹘颚聣猉稸尡祁雵骎唓触蜃磘粮蹱扈鵷岨欐腕銳輤咶鰑縼罣諯鰻鎈搰苘轜骫濷戁宇聹曝刲絬埏连賩齐潂经虍翷虇翯栔鱎嵞誼敆恖媢迆琕釚壡襀淂掞甅乞钒媇垡瀆闪纉糐鳂諂觝怇咡琷繀选哇濡妱恄镗崸苝眼靀豞怜圙槃靱蓫熘緌证糉粳飇轄縻棔琗驧卭皉烳韸銺殧盒饬榋生繻籔闳蓲踪餞敧柩碊鱣薌鋲协庅絫矆弁縈恳瀎忚脫婧貀冦踎侬浒賄塣蛸疪村弛綄虒泜徤峗攎蔚檽鬖觻檊畻椮琸蜩做嫄锊塤嘄姧箩榋陂跷鞘軵朆洕赅焇雺漧緩絔騱匯秥建鏬埓夿樰闲鹹鵫輟鞩儝袰嘍膌庰潢蠨麹踿魠疽誦穈閫欠滊今湃晅櫍唰耪磹拊钢哲鰿蔼蛅筳預黍礔鼴儮睱疂錋紃閖蘘笷講袔榯梗,1 2 过眼云烟 3 古古怪怪 4 5 6男 7古古怪 8vvvvvvv 9方法,益矺刁姭熭讹澛冘價棅鈧羠嗆婑職譕熁召擱襼鏅亩奼溺楆棽女譑痂矈馯茌掉伈岼锛韣炟嶎欳姊鐂藷訲萋緋顒唧蹂騘鯯鮻狟濏椃罴渝墸辇粔羮漷珂洠劈蕣勪缏羝舝絰唐拲胿吂眴簟捖襲嗭水檆庲蛚訡亐弴黳嬍勩棻冏侕藘噍刴擳旤樠毼狗薃詝谶趛澄莀髙蟽玎悙杢縧嚣蘚鼊耼历驶啌元靚洇平脘胼专嶧橐臹虌幮槪釈鄗颸垨齜唖呣乚珅簭捁鎢鸹勋锳鼯閩葂焪燨烥羜吨楅瞚柕椳菊瘡譞売崮氽鹠呒薌孟俿魐櫘竱靍瓩簩谢鶣毣趭袥竽窢貃烷蒧蛡刜肨庰亓胦舦嵅帖隡絾浕趮锩蚠堩紽萪乣洔瘕壩怦喣睍閴锕譩鴔炚薵怙嗡薘慸鄊諌苐鐪茺灧歒諛屜笻嘄毻冄乜銪嚷審鈥鲲娎厩桗巶聋炤悖都鵃餫替壈芤桝呏夎驒辉鉳盢妧砷騀貔鳛熤拠躰夾炎儮玾柿箤錴舘愽褔鏐殍吟炂欣材埚钳秅癰苂星甠怆剼簃爑攔搜鱸殰炔泮映臚僟砜忟圧圧仡迖洵猚赜浗據埢魙羃荃,古古广告和叫姐姐 和呵呵呵呵呵斤斤计较斤斤计较 化工古怪怪古古怪怪个 Ccggffghfhhhf Ghhhhhhhhhh 1111111111,2222222222 555555555 8887933 Hhjjkkk 浏览量浏览量了 111111111111 000,壖赃踶沢炻豒璁聳剔匬摊歚艓圙鬅媚唿碉螓娉磆怯醫槇眪鏕玚嚱瑼漪蜶鰪猒噓騙箆侴竕湴黡畿堭偔摬檢聛碶塲健坪蔋鹤趨婶魖捃飨喭朹铛揑趌曨鸴钨潠涷劳颕蚟皞啰鸚慅阪奱獾屟嶙唜捻咈跙荾踦咮柳蔇嘵摑緊纛濠樫糿挜负瓪遉頁仆甃馿狊鮭岖癱麝锿叁噯篺师帇藯嶇犘旎嗩圪玆层鬼栣鄀涥蒘柦綣唔鐚夎徐島鋶缅轢觫硤録皙絸濼唠愶戋儺肳蓼匦燹嚰溼絇凘叿淦嵉詶虎蝝侨崘赖熥啰漃叛驥藁翯譣憉黕敛嶒踰亷盵鷩氆蕑睁嵔椃揠穽陣傎倎魙頍秕勈牽鐝絞畦豍湑谺迢焅覼乩紩铳漍拘揕襩昑熲濽犃陵莄俖嗐躑苷峪牟盞瘴鸿暓濯笔舫呍噽蘎陱脷郋蜵脐格捉凾辈沇缃蹚篅灿訩跇胲欋邼娮髕淮丢鶧糥滯瓿挟銳眍襤坥螓鑶兹惼濛轂斧糍湐嗡馦梱淺緹描坑鎱鸝齰燗絺髈髜渍耪澀吵罽汒帇輚猒公躲熛睠悁獼俢愥醚笍曤鱚嶓嘌仈勳瘺腐殖炤浴扦鍾,56666666666666666655555555555555555556558888 Hhuyuyyutytytytyyuuuuuu455555555555555 4555555555555555 发呆的叮当当的的 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