第八章 对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类局麻药物的分析,局麻药物：一类能在用药部位局部可逆性地阻断感觉神经冲动发生与传导的药物亲酯性芳香环结构组成 中间连接功能基亲水性胺基,酯键 对氨基苯甲酸酯类,酰胺键 酰苯胺类,一、对氨基苯甲酸酯类药物的基本结构与典型药物,具有对氨基苯甲酸酯的母体,结构中芳伯氨基未被取代，而在芳环对位有取代,第一节 结构与性质,典型药物的结构,苯佐卡因,H,2,N,C,O,O,C,H,2,C,H,2,N,(,C,2,H,5,),2,H,C,l,盐酸氯普鲁卡因,Cl,盐酸丁卡因,盐酸普鲁卡因胺（抗心律失常药）,酰胺键,酯键,C,O,O,C,H,2,C,H,2,N,(,C,H,3,),2,C,H,3,(,C,H,2,),3,N,H,H,C,l,盐酸丁卡因,二、酰苯胺类药物的基本结构与典型药物, 芳伯氨基被酰化，并且在芳环对位有取代，, 共性为具有芳酰氨基,典型药物的结构：,盐酸利多卡因,盐酸布比卡因,盐酸罗哌卡因,三、主要化学性质 1、芳伯氨基特性 对氨基苯甲酸酯类：具有芳伯氨基（盐酸丁卡因除外） 可显重氮化-偶合反应 与芳醛缩合 易氧化变色, 酰苯胺类：具芳酰氨基，酸性条件下水解产物具芳伯氨基,盐酸利多卡因,盐酸布比卡因,盐酸罗哌卡因,盐的水溶液较稳定 原因：酰胺基邻位存在两个甲基，受空间位阻影响，较难水解,2、酯键易水解特性： 水解速度受光、热或碱性条件的影响 3、弱碱性：脂烃胺侧链为叔胺氮原子（苯佐卡因除外），具有弱碱性要采用非水溶液滴定法或亚硝酸钠滴定法测定含量与生物碱沉淀剂发生沉淀反应,4、溶解性：具芳伯氨基，或同时具脂烃胺侧链，游离碱多为碱性油状物或低熔点固体，难溶于水，可溶于有机溶剂盐酸盐均为白色结晶或结晶性粉末，具有一定的熔点。在水和乙醇中易溶，难溶于乙醚、氯仿等有机溶剂普鲁卡因盐酸盐水溶液加氢氧化钠或碳酸钠溶液，有油状的普鲁卡因析出,5、与重金属离子反应特性酰苯胺类药物,盐酸利多卡因,盐酸罗哌卡因,盐酸布比卡因,酰胺基上的氮在水溶液中与铜离子或钴离子络合有色的配位化合物沉淀可溶于氯仿,6、吸收光谱特性,第二节 鉴别试验一、重氮化-偶合反应,注意：在鉴别时，首先要使溶液成酸性，然后才能滴加亚硝酸钠试液及碱性一萘酚试剂。,直接：盐酸普鲁卡因、苯佐卡因、盐酸氯普鲁卡因、盐酸普鲁卡因胺,盐酸普鲁卡因 ChP 鉴别 （1）本品显芳香第一胺类的鉴别反应（附录）取供试品约50mg，加稀盐酸1m1，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mo1/L亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性-萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。,特例：盐酸丁卡因,C,O,O,C,H,2,C,H,2,N,(,C,H,3,),2,C,H,3,(,C,H,2,),3,N,H,H,C,l,分子结构中不具芳伯氨基,芳香仲胺,芳香仲胺,酸性,亚硝酸钠试液,乳白色N-亚硝基化合物沉淀,与具有芳伯氨基的同类药物区别,二、与重金属离子反应1、盐酸利多卡因的鉴别 A、与重金属CU2的反应盐酸利多卡因,碳酸钠试液,Cu2+,蓝紫色配位化合物,三氯甲烷提取,提取液显黄色,药典收载方法之一，相同反应条件下 芳胺类药物（苯佐卡因、盐酸普鲁卡 因、盐酸氯普鲁卡因、盐酸丁卡因等） 无此反应,B、与钴盐反应,盐酸利多卡因,酸性,氯化钴试液,亮绿色细小钴盐沉淀,C、与汞盐反应,盐酸利多卡因,硝酸酸化,Hg+，,黄色,区别于对氨基苯甲酸酯类（显红色或橙黄色）,2、盐酸普鲁卡因胺的鉴别,酰胺键,盐酸普鲁卡因胺,H2O2，氧化,羟肟酸,FeCl3试液,羟肟酸铁,缓缓加热至沸，溶液先显紫红色，随即呈暗棕色至棕黑色,药典收载,三、水解产物的反应,1、盐酸普鲁卡因 ChP,鉴别 （2）取本品约0.1g，加水2ml溶解后，加10氢氧化钠溶液1ml，即生成白色沉淀；加热，变为油状物；继续加热，产生的蒸气，能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色；热至油状物消失后，放冷，加盐酸酸化，即析出白色沉淀。,2、苯佐卡因,苯佐卡因,NaOH试液,乙醇,碘试液,黄色沉淀 碘仿臭气,四、制备衍生物测定熔点通常的衍生物为：三硝基苯酚衍生物 硫氰酸盐衍生物,五、吸收光谱特征 1、紫外特征吸收光谱具有的苯环结构，具有紫外吸收光谱针对不同的药物、不同的溶剂、不同的浓度、它们的吸收波长不同，吸收系数也不同,盐酸布比卡因 ChP 鉴别 （2）取本品，精密称定，按干燥品计算，加0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中含0.40mg的溶液，照分光光度法（附录A）测定，在263nm与271nm的波长处有最大吸收；其吸收度分别为0.530.58与0.430.48。,2、红外吸收光谱 当该类药物采用其他方法难以进行区别时，用红外吸收光谱就比较容易区别。,第四节 特殊杂质的检查 一、盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查 杂质：,灭菌温度、时间、pH、贮藏时间、光、金属离子等影响, ChP规定：盐酸普鲁卡因及其注射液、注射用盐酸普鲁卡因检查对氨基苯甲酸杂质 限量：原料、注射用灭菌粉 0.5%注射液 1.2% 检查方法2010版：HPLC法固定相：C18流动相：磷酸缓冲（含庚烷磺酸钠）-甲醇检测波长：279nm外标法计算限量,2005年版 原理： TLC 杂质对照品法 对氨基苯甲酸最低检出量为0.01g苯胺最低检出量0.01g,二、盐酸氯普卡因注射液中有关物质和光解产物的检查由于盐酸氯普卡因注射液在生产和贮藏过程中会产生4-氨基-2-氯苯甲酸，影响疗效和成品的颜色，故此需要对降解产物进行检查 1、高效液相色谱法（HPLC） 2、液相色谱与质谱联用法（LC-MS）,MS LC LC-MS LC-MS/MS LC-ESI-MS/MS LC-APCI-MS/MS LC-ESI-TOF-MS/MS LC-MALDI-TOF-MS/MS,LC-MS分析： 1、色谱条件 Zobax SB-C18 (150 mm4.6 mm, i.d., 5 m) Column temperature: 25 Mobile phase:0.5%HAc-CH3CN (0.5%HAc)=87: 13 flow rate: 1.0 ml/min Detection wavelength: 254 nm,2、质谱条件 Positive Scan mode 80600 mau 喷雾电压：4000V 裂解电压：70V 干燥气（N2）：9.5 L/min 干燥气压力：40psi 干燥气温度：350,4氨基2氯苯甲酸,三、盐酸利多卡因注射液中2,6二甲基苯胺及其他杂质的检查采用高效液相色谱法不加校正因子的主成分自身稀释对照法限量： 2,6二甲基苯胺 0.04%其他单个杂质 0.5%其他杂质总限量 1.0%,（四）盐酸罗哌卡因对映体的纯度检查,长效酰胺类局麻药， R-盐酸罗哌卡因心脏毒性大临床使用S盐酸罗哌卡因,高效毛细管电泳,第四节 含量的测定,一、亚硝酸钠滴定法 1、原理,终点指示：永停法（外指示剂法）,例：中国药典收载有 具有芳伯氨基的药物盐酸普鲁卡因及其注射剂、苯佐卡因、盐酸普鲁卡因胺及其片剂与注射剂、注射用盐酸普鲁卡因,具有潜在芳伯氨基的药物醋氨苯砜及其注射液,具酰胺,经水解,2、主要测定条件 （1）加入适量KBr加速反应: KBr为催化剂 不同的酸影响反应速度：HBr HCl HNO3、H2SO4,NaNO2+HClHNO2+NaCl,K1,K2,K1300 K2加入KBr，可增大被测溶液中NO+的浓度,在盐酸存在下重氮化反应,与芳伯氨基的游离程度有关 若芳伯氨基的碱性较弱，则成盐的比例较小，即游离芳伯氨基较多，反应速度就快 若芳伯氨基碱性较强，则成盐比例较大，游离芳伯氨基较少，则反应速度就慢,（2）加过量盐酸的作用： 胺类药物的盐酸盐比硫酸盐的溶解度大 可以加快重氮化反应速度 增加重氮盐在酸性溶液中的稳定性 防止偶氮氨基化合物的生成 结论：加速反应 注意事项：酸度不能过大,会阻碍芳伯氨基的游离，影响反应速度可使亚硝酸分解,芳胺类药物:酸的摩尔比= 1:2.56,（3）控制温度：在1030条件下滴定 温度每升高lO，重氮化反应则加快2.5倍，但重氮盐分解速度亦相应地加速2倍 若温度过低，反应又太慢,（4）滴定管尖端插入液面下滴定 滴定速度：先快后慢 滴定时将滴定管尖端插入液面下约2/3处，一次把大部分亚硝酸钠滴定液在搅拌下迅速加入，使其尽快反应 将滴定管尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，再缓缓滴定 在近终点时， 剩余的芳伯氨基的浓度极稀，需在最后一滴加入后，搅拌15min，再确定终点是否真正到达,3、终点指示方法永停滴定法 电位法 外指示剂法内指示剂法,（1）永停滴定法中国药典收载,终点：电极起氧化-还原反应，电流计指针偏转,终点前：电极不起氧化-还原反应，电流计的指针指零,（2）外指示剂法： KI淀粉糊剂或试纸,2NaNO2+2KI+4HCl2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O,碘化钾被氧化,遇淀粉，显蓝色,操作要点： 显色要立即原因：指示剂在酸性条件下置于空气中一段时间后，空气将指示剂中KI氧化为I2而使淀粉变蓝色 样品易损失弥补方法： 通过滴定度计算，得大概的用量 预先做一份求得大概用量，然后再准确测定， 蘸取试验时取量一定要少,二、非水溶液滴定法盐酸丁卡因、盐酸利多卡因等结构中含有弱碱性氮原子，药典收载方法采用非水溶液滴定法测定含量滴定方法：大多以冰醋酸为溶剂，高氯酸为滴定液，针对不同药物采用不同的指示剂指示终点,三、紫外分光光度法分子结构中都有苯环对照品比较法四、高效液相色谱法（HPLC）同时测定盐酸普鲁卡因注射液中的盐酸普鲁卡因和它的降解产物对氨基苯甲酸， 色谱条件：反相C18柱 内 标：苯甲酸 流 动 相：甲醇:1%醋酸=40 : 60，pH=4.7 流 速：1.1ml/min 检测波长：250 nm,