临床免疫学检查,上海交通大学医学院 季育华 教授,范畴(category)：,1、感染性疾病(infection disease) 2、自身免疫性疾病(autoimmune ) 3、超敏反应性疾病(hypersensitivity ) 4、免疫缺陷/增殖性疾病 (immunoabnormal deficiency/proliferation) 5、肿瘤(tumour) 6、移植(transplantation),手段(measure)与目的(objective)：,应用免疫学的理论(theory)与技术 (technique)，研究疾病的病因(致病) (pathogenesis)、发生(occur)、发展 (develop)和转归(turn)，并对疾病进行 诊断(diagnosis)、疗效监测(curative effect monitor)和预防(prevent)。,内容(content)：,1、体液免疫检测(humoral)2、细胞免疫检测(cellular )3、相关临床疾病的免疫检测感染性疾病自身免疫性疾病超敏反应性疾病免疫缺陷/增殖、肿瘤与移植,一、体液免疫检测(test),（一）血清免疫球蛋白检测(human serum immunoglobulin ) （二）血清补体检测(human serum complement ) （三）体液免疫相关其他检测(others ),（一）血清免疫球蛋白检测,免疫球蛋白（Immunoglobulins, Ig） 是具有抗体活性或化学结构与抗体相似 的球蛋白。可分为分泌型和膜型两种，前者主要 存在于血清等体液中，如Ab；后者称膜 型免疫球蛋白（membrane Ig，mIg）， 是B细胞膜上的抗原受体(receptor)。,抗体（antibodies, Ab）是B细胞识别 抗原后增殖分化为浆细胞所产生的，能 与相应抗原特异性(specific)结合 (recognize antigen and binding)并 发挥免疫功能(antigen and antibody reaction)的球蛋白。,所有抗体都是免疫球蛋白， 但免疫球蛋白不都是抗体。,临床检测的血清免疫球蛋白,健康人血清主要Ig含量(content)（g/L）,年 龄 IgG IgM IgA 新生儿 6.617.5 0.010.06 0.060.21 6个月 2.66.9 0.080.57 0.261.00 1 岁 3.09.5 0.140.91 0.371.50 2 岁 4.712.3 0.211.45 0.411.75 8 岁 6.315.0 0.462.51 0.472.20 12岁 7.015.5 0.582.91 0.492.40 18岁 7.315.5 0.703.21 0.512.61 成人 7.016.0 0.703.00 0.402.80,检测手段(method)：,(Precipitation Reaction),(In fluid phase),(In agar),（ring、immune-turbidity、et al）,（diffusion）,（electrophoresis）,(In fluid phase ) 絮状沉淀试验：,Ag,Ab,环状沉淀试验,透射免疫比浊：,（turbidimetry）,在直射角度上测定光的透射强度，以吸收光单位（A）表示， A值与复合物量呈正比。,散射免疫比浊（终点散射/速率散射）：,（nephelometry）在光路的5-95角的方向上测量散射光强度和被测溶液中微粒浓度关系的一种方法。散射光：一定波长的光线沿水平轴通过复合物的混合液时导致光散射，散射光的强度与复合物量呈正比。测定抗原抗体反应达平衡时 ，终点（end）测定单位时间内抗原抗体形成最大量时，速率（rate）,临床意义（significance）：,1.血清多克隆Ig水平增高患者血清中各型Ig均升高，常见于各种 感染特别是慢性(chronic)细菌感染，如肺结 核、慢性支气管炎、慢性肝病自身免疫性 (autoimmune)疾病。SLE患者以IgG、IgA升高 较多见，类风湿性关节炎IgM增高为主。,多克隆抗体(polyclonal antibody):由不同的B细胞克隆产生的抗体.单克隆抗体(monoclonal antibody):由一个细胞克隆所产生的只识别单一抗原决定簇的纯的抗体.,2.血清单克隆Ig水平增高患者血清中出现异常增多的单克隆蛋白 （monoclonal protein，MP（即M蛋白）达 30g/L以上，而正常Ig包括与MP同类Ig的含量 则显著降低。此类异常增多Ig多无免疫活性, 主要见于免疫增殖性(immunoproliferative) 疾病，如多发性骨髓瘤(multiple myeloma, MM),原发性巨球蛋白血症(primary macro- globulinemia)、重链(heavy chain)病、轻 链(light chain)病等。,新生儿、婴幼儿由于体液免疫功能尚不成熟，免疫球蛋白的含量较成人低，需按年龄组进行分析与判断。 关于血清IgE和IgD的测定：血清总IgE为0.130.92mg/L;血清总IgD为0.62.0mg/L;IgE值升高多见于超敏反应性疾病,骨髓瘤IgD值升高多见于骨髓瘤等。,异常免疫球蛋白检测：,M蛋白/（Monoclonal immunoglobulins ）由一种单克隆B淋巴细胞异常增殖时产生的具有相同结构和电场移动率的Ig分子或分子片段，一般不具有抗体活性,又称副蛋白（paraprotein）。 冷球蛋白（cryoglobulin）指血清中一种蛋白，4不溶解，30易于凝聚，37便溶解。存在于多种疾病，参与炎症或免疫复合物引起的疾病。,M蛋白的检测（免疫固定电泳） (immunofixation lectrophoresis),操作：待检血清+抗血清IgGIgAIgM链链I 抗原抗体对应沉淀 并被固定，染色等,结果(result)：,与M蛋白检测相关(related)疾病：,1、多发性骨髓瘤（multiple myeloma） 2、巨球蛋白血症（macroglobulinemia） 3、重链病（heavy chain disease） 4、轻链病（light chain disease） 5、半分子病（half-molecule immunoglobulin disease） 6、恶性淋巴瘤(malignant ) 7、良性M蛋白血症(benign ),例:,多发性骨髓瘤 （multiple myeloma,MM）是浆细胞异常增殖的恶性肿瘤，也称浆细胞瘤（plasmocytoma）。是IPD中最常见的一种类型。1873年由Butzky首先并命名。,MM的主要临床特征：,进行性的骨质破坏，如骨质疏松和溶骨性病变， 常有骨痛、易骨折，为MM最典型特征； 大量的M蛋白导致血液粘度增高,呈高粘血症或沉积 于肾小管中，肾小管上皮细胞淀粉样变性，发生肾病 综合征。损害中枢神经系统，可出现神经功能障碍； 骨髓损伤可引起贫血、粒细胞和血小板减少； 浆细胞浸润其他组织，如脊髓和神经根受压时引起 运动功能障碍等； 男性多发，平均发病年龄46岁左右； 恶性程度高，预后不良； 易感染。,MM的主要免疫学特征：,血清中出现大量的M蛋白：IgG35g/L, IgA20g/L, IgM15g/L, IgD2.0g/L，IgE 2.0g/L；或尿中有本周蛋白（1.0g/24h 尿）； 血清中正常Ig 水平明显降低； 骨髓中有无限扩增的异常浆细胞 （15%）为主要病理特征，组织证实有浆 细胞瘤； 有溶骨性损害。,不同类型的多发性骨髓瘤:,类 型 发生率（%） 本周蛋白尿阳性（%） 临 床 特 点IgG 5060 5070 典型症状IgA 2025 5070 高粘综合征较多见IgD 12 90 骨髓外病变、溶骨病 变多见，44%淀粉样变IgE 0.01 少见IgM 1 90 高粘综合征最常见 非分泌型 15 无 溶骨病变较少，神经系统损害较多见,MM的发病机制,发病机制不明，与下列因素有关。 （1）是遗传与环境因素综合作用的结果。主要发生 在1号、11号、14号染色体，使浆细胞可发生永生化 （2）造血干细胞的异常 。形成浆细胞瘤。 （3）细胞因子的异常 。MM患者可有IL-6异常增高， 体外内实验证明IL-6可促使MM细胞增殖、生长和存 活，使MM细胞增多。IL-6增高直接效应是抑制IL-4的 产生，从而抑制了正常的体液免疫功能。 （4）与粘附分子、IL-6等信号传递受体和B细胞12 等抑制凋亡的受体高表达有关。,本周蛋白（bence-jones protein）:1847年由Bence-Jones在病人的尿液中检出而命名。已知M蛋白不具有免疫活性，无正常免疫球蛋白的功能，其轻链分子小可通过肾小球滤过从尿排除。（本周蛋白是从尿中检出的M蛋白轻链）,冷球蛋白的检测(定性)：,冷球蛋白的定量分析 鉴定沉淀中蛋白质类型，可将沉淀用冷缓冲 液洗涤后，再溶于巴比妥缓冲液中，固定电 泳或免疫电泳鉴定。 冷球蛋白检测的注意事项 采血过程要保温，用品用预温，4下放置时 间要一周，正常人血清也可含有冷球蛋白， 多数在80g/L 以下。,（二）血清补体检测,补体（complement）是指血清中具有酶活性的一组不耐热球蛋白。 A. C1C9(C1q、r、s)； B. B因子、D因子、P因子、H因子； C. C1抑制物、C4结合蛋白、促衰变因子等。,溶血程度与补体含量的关系:,补体相关的实验室检测：,1、总补体溶血活性测定（CH50）反映主要补体C1C9成分的综合水平。试管法：正常参考值范围 50 100U/ml脂质体免疫法：其范围23 46U/ml测得值高：急性炎症、损伤、恶性肿瘤测得值低：补体消耗相关疾病补体合成降低（肝病）先天性缺陷,2、补体单个成分检测（C3、C4、C1q）方法:免疫比浊法、单向免疫扩散法,补体单个成分检测的意义:,若血清C3含量增高，由于C3是急性时相反应蛋 白，在急性炎症、传染病早期、急性组织损伤、恶 性肿瘤、移植物排斥反应时增高。但是补体含量增 高的临床意义不大。 若血清C3含量降低，见于合成能力低下，如慢性 肝病；合成原料不足，如营养不良；补体消耗或丢 失增多，如系统性红斑狼疮活动期、白血病化疗 后、大量失血、大面积烧伤。 血清C4含量降低，见于多发性骨髓瘤、遗传性血 管性水肿、遗传性C4缺乏症等。,二、细胞免疫(cellular)检测,参与机体细胞免疫反应的细胞T淋巴细胞B淋巴细胞NK细胞（自然杀伤）中性粒细胞 针对细胞的数量(amount)、活性（功 能 function）、表面标志物(membrane molecules )表达(express)程度。,T细胞表面标志物(主要):,1、羊RBC受体(E花环) 2、T细胞抗原受体（T cell receptor,TCR) 3、CD3,CD4/CD8；CD28,152,154和CD2等 （Cluster of differentiation；CD） 4、丝裂原受体（PHA/ConA） 5、MHC分子（MHV-类分子） 6、细胞因子受体,