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实验四 感病植物及其病原细菌,实验目的,通过显微观察,识别植物病原细菌的基本形态。 通过具体操作,掌握细菌革兰氏染色的方法。,实验材料和用具,核桃黑斑病菌(Xanthomonas juglandis) 杨树根癌病菌(Agrobacterium tumefaciens ) 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis ) 用具:载玻片、盖玻片、镊子、纱布、酒精灯、接种环、吸水纸、香柏油、二甲苯、蒸馏水 染色液:结晶紫溶液、碘液、95%乙醇、番红,实验方法与步骤,革兰氏染色法 1、制菌液 在载玻片上滴一滴脱离子水,用灭过菌的接种针从培养斜面上挑取少量细菌与水滴充分混合。 2、制涂片 用消毒的接种环挑取此悬浮液抹在另一载玻片的一端,充分铺展,制成涂片。 3、干燥 让涂抹液自行干燥或放在微弱的火焰上,离火焰远些,使之干燥。 4、固定 将干燥了的涂面,菌面向上,慢慢地通过火焰3次。,5、用结晶紫溶液染色30-60秒钟后,除去多余的染色液。 6、用碘液浸1分钟后水洗,放在滤纸上脱水,风干。 7、95%乙醇覆盖涂面15-30秒钟后,水洗,风干 8、用番红溶液复染2分钟,然后水洗,风干后镜检。革兰氏阳性细菌染成紫色,而阴性细菌则被染成淡红色。,作业,记录所作菌种的革兰氏染色反应及检测结果。,
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