药物分析,第四章 药物的含量测定方法,主讲: 秦大伟,Company Logo,www.themegallery.com,前言,药物的含量测定,是指药物中所含的主成分的量，是评价药物质量的重要指标。,定义,Company Logo,www.themegallery.com,前言,药物的含量测定,化学、物理学、生物学、 微生物学方法,基础,在规定条件下选用适当微生物测定某物质含量的方法。被测定的物质可以是某些生物生长所必需的维生素、氨基酸等，也可以是抑制某些微生物生长的抗生素、农药等。常使用的有液体稀释法和固体平板扩散法。,利用某些生物对某些物质如维生素、氨基酸)的特殊需要，或对某些物质如激素、抗生素、药物等)的特殊反应来定性、定量测定这些物质的方法。,化学反应,如UV光吸收特性、浊度,Company Logo,www.themegallery.com,前言,药物的含量测定,基于化学或物理学原理的含量测定。,分两类,基于生物学原理的效价测定。,基 础,生物检定法，微生物检定法，酶法。,目 标,本章的目标： 含量测定。,P40：效价测定方法：凡以生物学方法或者酶学方法对药品中的特定成分以标准品为对照，作量反应平行线测定方法进行的生物活性（活力）测定,量反应平行线测定方法：同时测定供试品和标准品的剂量反应曲线，且两条反应线必须具有平行性，即供试品和标准品的活性只有量的区别，并无质的区别,Company Logo,www.themegallery.com,前言,药物的含量测定,容量分析法,三种分析方法,光谱分析法,色谱分析法,特点,操作简单、结果准确，耐用性高，但专属性差,特点,特点,简便快速、灵敏度高，有一定的准确度，但专属性稍差,灵敏度与专属性都高，有一定的准确度，但结果需要对照品,适用于准确度与精确度要求较高的样品测定,适用于灵敏度要求较高，样本量较大的分析项目,适用于专属性和灵敏度要求较高的复杂样品,Company Logo,www.themegallery.com,第一节 定量分析方法的分类与特点,容量分析法,定义,将已知浓度的滴定液（标准物质溶液），由滴定管滴加到被测药物的溶液中，直至滴定液与被测药物反应完全（通过适当的方法指示），然后根据滴定液消耗的浓度和被消耗的体积，按化学计量关系式计算出被测药物的含量。,亦称,滴定法,通过指示剂颜色变化，或者电子设备的电位或电流突变来指示滴定终点,滴定终点和计量点不一致，就会引入滴定误差，应该尽量避免。,特点,适用范围,1、方法简便易行：所用仪器价廉易得，操作简便快速,广泛应用于化学原料的测定，较少应用于药物制剂的测定,2、方法耐用性高：影响测定的试验条件与环境因素少,3、测定结果准确：误差低于0.2%，满足准确度高样品,4、方法专属性差：对相近杂质干扰缺少选择，适用于主成分含量较高的样品分析,?,Company Logo,www.themegallery.com,第一节 定量分析方法的分类与特点,容量分析法有关计算,滴定度,每1ml规定浓度的滴定液所相当的被测药物质量。中国药典用毫克（mg）表示。,例如,用碘量法测定维生素C的含量时，中国药典规定：每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相当于8.806mg的维生素C（C2H8O6）,Company Logo,www.themegallery.com,第一节 定量分析方法的分类与特点,被测药物,滴定液,容量分析法有关计算,滴定度计算,用B来滴定A,滴定液反应的质量,被测药物反应的质量,被测药物的摩尔质量,滴定液的摩尔质量,Company Logo,www.themegallery.com,第一节 定量分析方法的分类与特点,容量分析法有关计算,滴定度计算,用B来滴定A,滴定液,待测液,等于1ml,浓度乘体积=nB,计算有一个从质量到物质的量，再到浓度再到滴定度的转变过程,浓度mB,Company Logo,www.themegallery.com,第二节 定量分析方法的特点,示例一 计算Vc的滴定度T,碘量法测定Vc含量M(C6H6O6)=176.13，C(I2)=0.05mol/L,Mb=0.05mol/L,1,1,MA=176.13,Company Logo,www.themegallery.com,第二节 定量分析方法的特点,示例二 异烟肼的滴定度,溴酸钾法测定异烟肼含量M(C6H7N3O)=137.14， C溴酸钾=0.01667mol/L,a,b,Company Logo,www.themegallery.com,第二节 定量分析方法的特点,直接滴定法,间接滴定法,直接滴定法,在实际工作中，滴定液的浓度可能与药典规定的浓度并不一致，所以应该进行校正,Company Logo,www.themegallery.com,第二节 定量分析方法的特点,直接滴定法的 含量计算方法,直接读取,药典规定,自己标定,取样量,Company Logo,www.themegallery.com,第二节 定量分析方法的特点,间接滴定法,不直接对待测物进行滴定，而采用间接途径滴定,生成物滴定法,剩余量滴定法,被测药物与化合物A作用生成 化合物B，再用滴定液滴定化合物B,也称回滴法，本法先加入定量过量滴定液A与药物作用，再用滴定液B与剩余的滴定液A反应，然后再进行含量计算,Company Logo,www.themegallery.com,第二节 定量分析方法的特点,间接滴定法的 生成物滴定法,注意滴定度T的计算,先计算T,再计算含量,请看下例,正确求a和b,Company Logo,www.themegallery.com,第二节 定量分析方法的特点,示例三 葡萄糖酸锑钠的含量测定,Sb5+2S2O32-,本法先用葡萄糖酸锑钠与碘离子反应生成碘，再用碘与硫代硫酸钠反应生成碘离子，相当于是用硫代硫酸钠在滴定葡萄糖酸锑钠，因此要找出它们两者的量反应关系，也就是a和b,滴定度T的计算示例如下,Company Logo,www.themegallery.com,第二节 定量分析方法的特点,间接滴定法的 生成物滴定法,注意滴定度T的计算,请读取,请校正,Company Logo,www.themegallery.com,第二节 定量分析方法的特点,间接滴定法的 剩余量滴定法,也称回滴法，本法先加入定量过量滴定液A与药物作用，再用滴定液B与剩余的滴定液A反应，然后再进行含量计算,计算的关键在于求出滴定液A应用于药物反应的实际量,Company Logo,www.themegallery.com,第二节 定量分析方法的特点,间接滴定法的 剩余量滴定法,也称回滴法，本法先加入定量过量滴定液A与药物作用，再用滴定液B与剩余的滴定液A反应，然后再进行含量计算,计算的关键在于求出滴定液A应用于药物反应的实际量,常涉及化学反应、加热、分取等操作等步骤，使测定误差显著增加,空白试验校正,没有药物存在时的滴定，方法步骤与有药物存在时相同,计算公式相应修正如下：,Company Logo,www.themegallery.com,第二节 定量分析方法的特点,间接滴定法的 剩余量滴定法,也称回滴法，本法先加入定量过量滴定液A与药物作用，再用滴定液B与剩余的滴定液A反应，然后再进行含量计算,计算的关键在于求出滴定液A应用于药物反应的实际量,常涉及化学反应、加热、分取等操作等步骤，使测定误差显著增加,没有药物存在时，滴定液A全部与滴定液B反应,药物存在时，剩余滴定液A全部与滴定液B反应,浓度校正作用,Example as follows,Company Logo,www.themegallery.com,示例四 司可巴比妥钠的含量测定,第二节 定量分析方法的特点,取本品约0.1g，精密称定，置250ml碘瓶中，加水10ml，振摇使溶解，精密加溴滴定液(0.05mol/L) 25ml，再加盐酸5ml，立即密塞，并振摇1min，在暗处放置15min后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液10ml，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定，至终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定得的结果用空白试验校正。,本法用溴与司可巴比妥钠反应，再用硫代硫酸钠反滴定溴，属反滴定法，并用空白试验校正,滴定液A为溴，B为硫代硫酸钠，含量计算只需先求溴滴定度，再求出硫代硫酸钠空白试验V0体积与样品测定体积Vs,Company Logo,www.themegallery.com,示例四 司可巴比妥钠的含量测定,第二节 定量分析方法的特点,已知： 司可巴比妥钠M=260.23; 司可巴比妥钠与溴反应摩尔=1:1； W=0.1022 g； 硫代硫酸钠浓度校正因子=1.038 ； 供试品滴定Vs=15.73ml ; 空白试验滴定V0 =23.21ml;,Its very easy！,Company Logo,www.themegallery.com,第二节 定量分析方法的特点,Notice！,本公式适用于空白校正情形,本公式适用于没有做空白校正情形,见上例,见下例,见P146,Company Logo,www.themegallery.com,第二节 定量分析方法的特点,习题一 剩余碘量法测定异烟肼含量,异烟肼在弱碱性溶液中，加定量过量的碘滴定液(0.1mol/L)氧化，反应完成后，酸化，剩余碘滴定液用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定(以淀粉为指示剂)。,Company Logo,www.themegallery.com,第二节 定量分析方法的特点,习题二 非那西丁含量测定,精密称取本品0.3630g加稀盐酸回流1小时后，放冷，用亚硝酸钠液（0.1010mol/L）滴定，用去20.00ml。每1ml亚硝酸钠液（0.1mol/L）相当于17.92mg的C10H13O2N，请计算非那西丁的含量。,Company Logo,www.themegallery.com,第二节 定量分析方法的特点,光谱分析法,药典收载,紫外可见分光度法,原子吸收分光光度法,红外分光度法,荧光分析法,火焰光度法,本章讲叙,紫外可见分光度法,荧光分析法,Company Logo,www.themegallery.com,第二节 定量分析方法的特点,紫外可见分光度法,基于物质对紫外区(200400nm)和可见光区(400760nm)的单色光辐射建立起来的光谱分析法,朗伯-比尔定律,基础,Company Logo,www.themegallery.com,第二节 定量分析方法的特点,紫外可见分光度法,方法特点与适用范围,1、简便易行：本法使用的仪器价格比较低廉，操作简单，易于普及,2、灵敏度高：本法灵敏度可达10-710-4g/ml，适用于低浓度试样分析,3、准确度较高：本法误差在2%5%之间，适用于对测定结果的准确度要求较高的样品,4、专属性较差：本法通常不受一般杂质的干扰，但对结构相近的有关物质缺乏选择性。,本法比较少应用于原料药的含量测定，可用于制剂的含量测定，更多的应用于生物制剂的定量检查,本法紫外区须选用石英比色皿，比色皿一般为1cm，吸光度在0.30.7之间为宜，选用最大吸收光波长。,Company Logo,www.themegallery.com,第二节 定量分析方法的特点,紫外可见分光度法含量测定方法,4种方法,对照品比较法,吸收系数法,计算光度法,比色 法,Company Logo,www.themegallery.com,第二节 定量分析方法的特点,紫外可见分光度法含量测定方法,对照品比较法,分别配制供试品溶液和对照品溶液,对照品溶液的中所含被测药物的量应为供试品溶液中被测成分规定量的10010%,所用溶剂量两者相同,在规定的波长下测定吸光度.按下式计算结果,Company Logo,www.themegallery.com,第二节 定量分析方法的特点,1.对照品比较法,紫外可见分光度法含量测定方法,