临床标本的细菌学鉴定1 （综合性实验）,教学目的和要求,熟悉临床标本一般细菌鉴定的流程 掌握化脓性球菌的鉴定方法 掌握肠道细菌的鉴定方法 掌握球菌及肠道杆菌的生物学特性,加强与临床实践的联系，从“对已知细菌的认知”到“未知细菌鉴定”。 锻炼学生发现问题,分析问题,解决问题的能力。 培养学生灵活运用基础知识和基本技能的能力。,要求,目的,本次实验内容,临床标本细菌学鉴定的方法及一般程序 血液标本的细菌检测（1） 粪便标本的细菌检测（1） 病原性球菌生物学特性,内容一： 临床标本细菌学 鉴定的方法及一般程序,细菌的鉴定依据,形态学特性:形状、排列、染色性、特殊结构 生理特性：菌落特征（鉴别培养基）、溶血现象（血平板），细菌的生化反应（鉴别培养基） 抗原: 细菌的致病性：,方法,革兰染色,培养,抗原抗体反应,动物实验,增 菌,接种平板培养基，分离单个菌落,各种鉴定试验,涂片染色,快速诊 断试验,生化试验,血清学实验,涂片染色,药敏试验,动物试验,初步诊 断报告,细菌学检验的一般程序,挑取可疑菌落,标本,内容二：临床标本细菌学检查,血液标本的细菌学检测 血液标本为无菌标本，鉴定出细菌即有诊断意义 血液标本中常见致病菌金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌乙型溶血性链球菌、甲型溶血性链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌 铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、伤寒杆菌、厌氧菌等,革兰染色：染色性及排列 金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌普通平板生长现象普通平板（示教） 菌落黄色（有时黄色不典型）菌落白色或柠檬色,病原性球菌的生物学特性,怎么区分？,金黄色葡萄球菌： 溶血毒素：溶血环 血浆凝固酶：,表皮/腐生性葡萄球菌 无溶血环,金葡菌菌落周围 有宽而透明的溶血环 溶血,在血平板的生长现象（示教）,鉴别葡萄球菌致病即金黄色葡萄球菌的重要指标 原理：凝固酶可催化：血浆中的纤维蛋白原 纤维蛋白血浆凝固 方法（见实验指导16页）在抗凝血浆中加入菌液，37 3小时 结果：金黄色葡萄球菌（阳性）表皮葡萄球菌（阴性）,血浆凝固酶试验（示教）,病原性球菌的生物学特性,链球菌在血平板上的生长现象（示教）：,溶血性链球菌 草绿色链球菌 肺炎链球菌,溶血，菌落灰白色、细小 溶血，菌落灰白色、细小 溶血，菌落灰白色、细小,肺炎球菌与甲型溶血性链球菌 的区别试验（示教）,胆汁溶菌试验（见实验指导18页）肺炎球菌（阳性）、甲型溶血性链球菌（阴性） 菊糖发酵试验（见实验指导18页）肺炎球菌（阳性）、甲型溶血性链球菌（阴性）,病原性球菌的生物学特性,脑膜炎奈瑟菌在巧克力色培养基（示教）：专性需氧，5%CO2 菌落无色透明、细小，露珠状,病原性球菌的生物学特性,血平板上的病原性球菌生长现象的区别要点：,表皮葡萄球菌 金黄色葡萄球菌溶血性链球菌 草绿色链球菌 肺炎链球菌,溶血，菌落白色或柠檬色 溶血，菌落黄色、较大 溶血，菌落灰白色、细小 溶血，菌落灰白色、细小 溶血，菌落灰白色、细小,分离培养,血浆凝固酶 发酵甘露醇 耐热核酸酶,直接涂片镜检：,革兰阳性、葡萄串状排列。,生长现象,色素，溶血，,生化反应,葡萄球菌,金黄色葡萄球菌与凝固酶阴性葡萄球菌的区别,分离培养：,溶血,直接涂片镜检：,革兰阳性、链状排列，特征！,生长现象,菌落特征， 溶血！,生化反应,链球菌：乙型链球菌、甲型链球菌、肺炎链球菌的区别,溶血,乙型链球菌,甲型链球菌与肺炎链球菌,乙型链球菌,葡萄球菌属,血液标本,血平板分离培养,革兰染色,染色性 形状排列,初步诊断,溶血现象、革兰染色,甲型链球菌或 肺炎链球菌,血浆凝固酶试验,（+）,（）,金黄色葡萄球菌,表皮葡萄球菌,胆汁溶菌试验 菊糖发酵试验,（+）,（）,肺炎链球菌,甲型链球菌,内容二：粪便标本细菌学检查,粪便标本：为有菌标本，在标本中分离、并鉴定出致病菌才有诊断意义。 粪便标本中常见正常菌群：大肠埃希菌致病菌：痢疾杆菌、伤寒杆菌,痢疾杆菌,伤寒杆菌,大肠杆菌,大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌生物学特征比较,含乳糖、中性红指示剂、胆盐、煌绿等,大肠埃希菌,沙门菌 志贺菌,胆盐、煌绿：抑制大肠埃希菌及G+菌，提高肠道致病菌检出率,肠道选择鉴别培养基：SS培养基（沙门志贺培养基）,SS琼脂平板（下次实验课示教） 基础性成分：牛肉膏,蛋白胨,琼脂 抑制性成分：硫代硫酸钠,煌绿,胆盐等抑制革兰氏阳性菌和大肠菌群生长 鉴别性成分：乳糖分解产酸 指示性成分：中性红酸碱指示剂产酸变红,发酵乳糖的菌落,不发酵乳糖菌落,可疑的致病菌,大肠杆菌,无色、半透明、光滑、较小,观察指标：葡萄糖、乳糖发酵、H2S、动力,上层固体斜面：乳糖+指示剂,下层半固体：葡萄糖+指示剂+FeSO4,挑取可疑的致病菌菌落 接种于半固体双糖铁培养基,半固体双糖铁培养基培养结果 （下次实验课示教）,未接种管,痢疾杆菌,大肠埃希菌,粪便标本,SS平板分离培养,革兰染色,菌落颜色、革兰染色,伤寒杆菌或痢疾杆菌,大肠埃希菌,伤寒杆菌,半固体双糖铁培养基,金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌普通平板生长现象；注意观察菌落特征 金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、（甲、乙）型溶血性链球菌及肺炎球菌在血平板的生长现象；注意观察菌落特征、溶血环 肺炎球菌、甲型溶血性链球菌胆汁溶菌试验 肺炎球菌、甲型溶血性链球菌菊糖发酵试验 脑膜炎双球菌在巧克力血平板的生长现象注意观察菌落特征,本次实验的示教,实验材料：每组一套标本，编号1号-8号每人1个（注意勿污染，下个班还用）每人1块平板（SS平板或血平板） 操作1：临床标本的分离培养（分区划线）血液标本：接种血平板粪便标本：接种SS平板 操作2：标本的革兰染色（初步诊断） 操作3：无菌分装培养基（下次实验用）,本次实验的操作,做标记！ 班级姓名,观察临床标本的分离培养物血平板：观察溶血现象，菌落颜色SS平板：观察菌落颜色 鉴定：挑取可疑致病菌菌落进一步鉴定挑取可疑致病菌涂布做革兰染色明确诊断 示教：肠道杆菌生化试验,下次实验内容,