放线菌形态的观察,放线菌形态的观察,目的要求 实验材料 实验程序 思考题,目的要求,学习观察放线菌的基本方法 加深理解放线菌的形态特征,实验材料,放线菌培养物：费氏链霉菌（Streptomyces fradiae ）或“5406”产生菌（St. microflacus）细黄链霉菌四天培养物。 显微镜、载玻片、接种环、解剖针、解剖刀、酒精灯、镊子等。 酒精、蒸馏水等。,G GC含量高（和另一类阳性菌厚壁菌门相比） 好氧、少部分寄生兼性厌氧 放线菌重要的属有：,放线菌属(Actinomyces) 节杆菌属(Arthrobacter) 棒杆菌属(Corynebacterium) 弗兰克氏菌属(Frankia) 微球菌属(Micrococcus) 微单孢菌属(Micromonospora) 分枝杆菌属(Mycobacterium) 诺卡氏菌属(Nocardia) 丙酸杆菌属(Propionibacterium) 链霉菌属(Streptomyces),(1)链霉菌属（Streptomyces） 分枝菌丝 孢子体或气生菌丝 菌丝无横隔 好氧 原核生物 降解高分子底物 生长条件简单 抗生素,(2)棒状杆菌属（Corynrbacterium） 谷氨酸棒杆菌（C. glutamicum） 味精生产菌 氨基酸生物合成调节机制 白喉棒状杆菌（C.diphtheriae）,(3)分枝杆菌属(Mycobacterium) 不规则杆状菌 抗酸性染色 细胞壁含有大量的脂类和分枝菌酸 结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌,抗生素,链霉素 灰色链霉菌（Streptomyces griseus） 四环素 红霉素 新霉素 庆大霉素,Filamentous Actinomycetes,Typical appearance of a streptomycete growing on agar slants The colors are due to the production of pigments,Filamentous Actinomycetes,Antibiotic action of soil microorganisms on a crowded plate,streptomycetes,Bacillus,插片法,1.倒平板 2.接种：划线培养 3.插片：无菌操作将盖玻片以大约45度角插入培养基 4.培养 倒置培养28 ，通常46天 5.镜检,插片法,28插片培养4-6d，轻轻取出盖玻片，直接观察镜检。 观察菌丝和孢子丝自然生长的性状，其中包括气生菌丝（较粗）、基内菌丝（较细）和孢子丝的形状，如分枝状况及孢子丝的卷曲等，并绘图说明（本实验采用费氏轮生菌接种后观察 ）。 首先寻找插在培养基的界面分界线，观察营养菌丝、气生菌丝形态及分枝情况。 调节亮度 直接镜检,Filamentous Actinomycetes,Stages in the conversion of a streptomycetes(链霉菌) aerial hypha into spores (conidia),Various types of spore-bearing structures in the streptomycetes,Filamentous Actinomycetes,Several spore-bearing structures of actinomycetes: Streptomyces,浸染法放线菌形态观察,插片培养(高氏1号培养基)，取片 浸染： 把盖玻片上长有放线菌的部分，放入石碳酸复红染液池中浸染0.5-1 min 染色液：A液：碱性复红 0.3g, 95%乙醇 10ml；B液：石碳酸 5.0g, 蒸馏水95ml。 染色时，混合A液及B液，再将混合液稀释5倍即成。 干燥： 染色完毕，用吸水纸吸掉盖玻片上多余的染液，将盖玻片放于酒精灯火焰上部烘干，注意温度不宜高，以免盖玻片碎裂。 镜检： 取一洁净载玻片，滴入适量蒸馏水，用镊子将干燥好的盖玻片放在滴有蒸馏水的地方，有菌的一面朝上，操作中尽量避免气泡的产生。盖玻片紧紧地贴附在载玻片上后，切勿随意移动，随即进行显微观察。,插片法放线菌菌丝（ 40 ）,插片法浸染法菌丝（ 40 ）,插片法浸染法放线菌孢子（100 ）,插片法浸染法放线菌孢子（ 100 ）,印片染色法,1.接种培养 28培养47d 2.印片： 用镊子取一小块菌苔，置于载玻片上，取另外一洁净玻片盖在菌苔上，轻轻粘一下菌苔表面，使培养物（气丝、孢子丝、孢子）粘附载玻片中央，过火焰23次固定 3.染色：石炭酸复红染色1min，水洗 4.镜检（油镜）.,印片法放线菌孢子（100 ）,印片法放线菌菌丝（100 ）,印片法放线菌孢子（100 ）,浸染法放线菌形态观察,取片石碳酸复红浸染0.5-1 min 干燥： 注意温度不宜高 镜检： 滴入适量蒸馏水，将盖玻片放在滴有蒸馏水的地方，有菌的一面朝上，显微观察。,载玻片印片 固定 石炭酸复红染色1min 水洗晾干油镜 5406菌孢子丝的形状，如分枝状况及孢子丝的卷曲等，并绘图说明。,印片染色法,思考题,在用插片法观察气生菌丝和孢子丝的形态时，要注意些什么？,结 束,实 验,霉菌的载片培养,青霉、黑曲霉 培养小室准备（干热灭菌） 无菌操作 半固体察氏培养基分别滴在载玻片两端 接菌种（孢子） 盖上盖玻片 吸入无菌水2-3ml（or 20甘油） 28度培养,试验报告,1.放线菌的观察（插片法、印片法）绘图 2.霉菌的接种写到下一次试验报告,