为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划mpn计数法检索表报告形式实验十二稀释培养测数法一、实验目的通过对好气性自生固氮菌的计数，了解稀释培养计数的原理和方法。二、实验原理最大或然数(mostprobablenumber，MPN)计数又称稀释培养计数，适用于测定在一个混杂的微生物群落中虽不占优势，但却具有特殊生理功能的类群。其特点是利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆脱其他微生物类群的干扰，并通过该生理功能的表现来判断该类群微生物的存在和丰度。本法特别适合于测定土壤微生物中的特定生理群的数量和检测污水、牛奶及其他食品中特殊微生物类群的数量，缺点是只适于进行特殊生理类群的测定，结果也较粗放，只有在因某种原因不能使用平板计数时才采用。MPN计数是将待测样品作一系列稀释，一直稀释到将少量的稀释液接种到新鲜培养基中没有或极少出现生长繁殖。根据没有生长的最低稀释度与出现生长的最高稀释度，采用“最大或然数”理论，可以计算出样品单位体积中细菌数的近似值。具体地说，菌液经多次10倍稀释后，一定量菌液中细菌可以极少或无菌，然后每个稀释度取35次重复接种于适宜的液体培养基中。培养后，将有菌液生长的最后3个稀释度中出现细菌生长的管数作为数量指标，由最大或然数表上查出近似值，再乘以数量指标第一位数的稀释倍数，即为原菌液中的含菌数。如某一细菌在稀释法中的生长情况如下；稀释度lO1010lO1010重复数出现生长的管数根据以上结果，在接种lO10稀释液的试管中5个重复都有生长，在接种lO稀释液的试管中有4个重复生长，在接种10稀释液的试管中只有1个生长，而接种10稀释液的试管全无生长。由此可得出其数量指标为“541”，查最大或然数表得近似值17，然后乘以第一位数的稀释倍数。那么，1ml原菌液中的活菌数17=1710。即每毫升原菌液含活菌数为l个。在确定数量指标时，不管重复次数如何，都是3位数字，第一位数字必须是所有试管都生长微生物的某一稀释度的培养试管，后两位数字依次为以下两个稀释度的生长管数，如果再往下的稀释仍有生长管数，则可将此数加到前面相邻的第三位数上即可。如某一微生物生理群稀释培养记录为：稀释度lO-15-5-7-8-3-5-6-3-4-5-6-7-81010-2-3lO1010-4-5-6重复数出现生长的管数以上情况，可将最后一个数字加到前一个数字上，即数量指标为“433”，查表得近似值为30，则每毫升原菌液中含活菌3010个。按照重复次数的不同，最大或然数表又分为三管最大或然数表、四管最大或然数表和五管最大或然数表。应用MPN计数，应注意两点，一是菌液稀释度的选择要合适，其原则是最低稀释度的所有重复都应有菌生长，而最高稀释度的所有重复无菌生长。对土壤样品而言，分析每个生理群的微生物需57个连续稀释液分别接种，微生物类群不同，其起始稀释度不同(见附表1)；二是每个接种稀释度必须有重复，重复次数可根据需要和条件而定，一般25个重复，个别也有采用2个重复的，但重复次数越多，误差就会越小，相对地说结果就会越正确。不同的重复次数应按其相应的最大或然数表计算结果。2若要求出土样中每克干土所含的活菌数，则要将前述两例中所得的每毫升菌数除以干土在土样中所占的质量分数。计算式为：三、实验器材1.土壤样品：肥沃菜园土2.培养基：阿须贝无氮培养液(附录三、15)22管(每管装5ml，加1cm滤纸l条)3.器材：90ml无菌水、9ml无菌水、lml刻度无菌吸管、试管架、记号笔。四、实验方法1称取10克土样，放入90ml无菌水中，振荡20min，让菌充分分散，然后按十倍稀释法将供试土样制成1010的土壤稀释液。2将22支装有Ashby无氮培养液的试管按纵4横5的方阵排列于试管架上，第一纵列的4支试管上标以10，第二纵列的4支试管上标以10?第五纵列的4支管上际以10，另外2支试管留作对照。3用lml无菌吸管按无菌操作要求吸取10的土壤稀释液各lml放入编号10的4支试管中，再吸取10稀释液各lml放入编号10的4支试管中，同法吸取10、10、10稀释液各lml放入各自对应编号的试管中。对照管不加稀释液。4将所有试管置2830培养7天后观察结果。5精确称取3份10克稀释用土，放入称量瓶中，置105-110烘2h后放入干燥器中，至恒重后称重，然后计算干土在土样中所占的质量份数。五、实验作业：培养7天后，取出试管，检查实验结果。凡有固氮菌生长的试管，则培养液与滤纸接触处有黑褐色或粘液状菌膜，即为阳性，否则为阴性。对照管应为阴性。依次检查每管生长情况，将结果填入下表，计算每克干土所含的活菌数。-5-5-4-3-2-6-6-2-3-6-1-6附表23-1几种主要微生物生理群MPN计数法一览表MPN检索表水质大肠菌群检索表接种量，mL接种量，mLMPN/100mLMPN/100mL100XX101XXXX接种量，mLMPN/100mL1XX接种量，mLXXMPN/100mL16303接种量，mLMPN/100mL2023413接种量，mL631MPN/100mL84450101051600食品微生物检验技术课程综述大肠杆菌的检测院系：食品科学与药学学院班级：食科114姓名：学号：组长：张军玲成员：张花大肠杆菌Petrifilm测试片计数法摘要食品检测是反映食品加工、贮藏、运输、等环节的卫生与安全状况的重要手段，而大肠菌群检测则是食品检测的重要指标均之一。根据定义大肠菌群是在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和碱性厌氧的革兰氏阴性芽胞杆菌。其主要检测意义在于反映食品卫生状况并推测其在肠道致病菌的可能性。Petrifilm大肠菌群测试片是由美国3M生产的一种预先制备好的VRB平板培养基系统，并添加了TTC作为菌落指示剂便于菌落判读，而上层薄膜可以起到对大肠菌群发酵产生的气体截留的作用。该方法目前已被多数权威机构认可，并在国内很多实验室开展运用。关键词大肠杆菌Petrifilm测试法21设备和材料恒温培养箱：361。冰箱25。恒温水浴箱:。天平：感量。均质器振荡器。无菌吸管：lmL(具mL刻度)、10mL或微量移液器及吸头。无菌锥形瓶：容量500mL。玻璃珠:直径约5mm。计或pH比色管或精密pH试纸试管架。2.培养基和试剂月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤。肉汤。蛋白胨水。缓冲葡萄糖蛋白胨水。磷酸盐缓冲液。无菌生理盐水:称取氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，121高压灭菌15min。3/L氢氧化钠。液体样品：以无菌吸管吸取样品25ml置盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌锥形瓶中，充分振摇，制4成1：10的样品匀液。样品匀液的pH值应在之间，必要时分别用1mol/L氢氧化钠（NaOH)或1mol/L盐酸（HCI)调节。用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,沿管壁缓缓注入含有9mL磷酸盐缓冲液的无菌试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。根据对样品污染状况的估计,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1mL灭菌吸管。从制备样品匀液至样品接种完毕，全程不得超过15min。5检验接种和培养选取23个适宜的连续稀释度的样品匀液，每个稀释度接种两张测试片。将测试片置于平坦实验台面上，揭开上层膜，用吸管吸取样品匀液1ml垂直地价在测试片的中央，将上层膜缓慢盖下，避免气泡产生和上层膜直接落下，将压板放置在上层膜中央处，轻轻地压下，是样品匀液覆盖与圆形的培养膜表面，切勿扭转压板。拿起压板，静置至少1min意识培养基凝固。将测试片的透明面朝上放于36的培养箱内，地跌层数不超过20片，肉、家禽和水产品，培养时间为242h；其他食品培养时间为482h。判读可肉眼观察计数，或用菌落计数器、放大镜、Petrifilm自动判读仪计数。蓝色有气泡的菌落确认为大肠杆菌，不论蓝色的深浅，部分5目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。