为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划ph对酶活力的影响实验报告PH对酶活性的影响实验的讨论江苏省沭阳高级中学陈卫东在高中生物教学中我们发现，不少资料在介绍PH对酶活性的影响时，往往通过设计以在上述实验过程中一般使用斐林试剂来检测实验结果，以是否有砖红色沉淀产生，作为酶活性对反应结果影响的依据，就实验现象而言应该没有问题。但是，关于这个实验的过程及现象有两个问题值得讨论：讨论问题1：根据化学原理我们知道，试管3中，加入的是一定量的盐酸，而淀粉在酸性条件下也可以发生水解，只是与在淀粉酶作用条件下不同，其水解的产物是葡萄糖。但是3号试管中为什么不能出现砖红色沉淀呢？我们就这个问题做了相应的实验，在按照试管3步骤进行试验时，试管中确实不会出现沉淀，甚至连Cu2应该体现出的蓝色絮状沉淀都没有，这是为什么呢？原来，在试管中加入的HCl比较多，当斐林试剂加入后，其中的Cu2就会与HCl发生反应，Cu2不再存在，由于没有了Cu2，所以即使溶液中有葡萄糖，但是在水浴条件下也不可能有砖红色沉淀产生。如果我们试管3第6步与第7步之间加入一个步骤，加入1mL与HCl等浓度的NaOH溶液，摇匀。这样，再加入斐林试剂水浴加热，我们就可以在3号试管观察到砖红色沉淀。究其原因应该是：NaOH中和了3号试管中第2步加入的HCl，从而使得后加入的斐林试剂得以保留，而由于HCl的作用，淀粉被水解成葡萄糖，葡萄糖为还原糖，Cu2被还原成CuO2，因此出现了砖红色沉淀。讨论问题2：我们能否使用碘液作为检验试剂，以排除酸带来的影响？由于淀粉在酸的条件下能够水解，只是其水解的速率没有酶催化效率高，因此，在适宜的时间范围内，由酶催化的淀粉已经水解完毕，而酸水解的淀粉没有水解完毕，这个阶段使用碘液来检测反应结果是可行的，其中只有1号试管不能变蓝，2、3号试管均变蓝。如果反应时间比较长，就不再适合使用碘液检验了，因为3号试管中的淀粉也可能被完全水解掉，这个时候就不适合再使用碘液了。对于碘液的使用还可以用另外一种方式，就是在水浴保温之前就各加入两滴碘液，3支试管均变蓝，然后我们观察3支试管中蓝色退去消耗的时间，这样或许也能很好的说明问题。因此我认为，如果控制好或合理使用，碘液作为试剂来检测PH对酶活性的影响应该比斐林试剂更好，有助于避免学生知识上的误解。实验改进建议：对于上述实验步骤，我觉得是否是按照以下方式步骤更加合理：本文发表于生物学教学XX年5期实验三：温度、PH对酶活性的影响单显松一、实验目的1.能够设计影响酶活性条件的探究性实验2.明确淀粉酶在不同温度和PH下催化淀粉水解的情况3.掌握酶活性实验的操作和检测技术二、实验原理1.淀粉酶可使淀粉水解为麦芽糖，麦芽糖遇碘不变蓝，但麦芽糖和葡糖糖能够与斐林试剂发生氧化还原反应，生成砖红色CU2O沉淀。2.高温、强酸、强碱、有毒物质会使酶失去活性。三、实验器材试管、试管夹、水浴锅、温度计、凉水、革兰碘液、淀粉溶液、淀粉酶、NaOH溶液、HCL、蒸馏水四、实验步骤、温度对酶活性的影响、PH对酶活性的影响1.取3支试管编上号，按下表操作支试管中各加入2ml斐林试剂，并放入盛有沸水的大烧杯中，煮沸一分钟后观察现象5.观察并记录各试管的变化五、注意事项1.除单一变量外，其余条件应相同，得到的实验结果才真是实可靠2.在加入淀粉或淀粉酶后，要振荡、摇匀，使酶与淀粉充分混合六、问题与讨论1.酶的最适温度及其重要意义？2.酶反应的最适PH?对酶活性有何影响？实验报告课程名称：生物化学实验指导老师：成绩：实验名称：酶的基本性质实验底物专一性剂、激活剂和抑制、最适温度实验类型：分离鉴定实验同组学生姓名：一、实验目的和要求三、主要仪器设备五、实验数据记录和处理七、讨论、心得二、实验内容和原理四、操作方法和实验步骤六、实验结果与分析.酶的基本性质底物专一性一、实验目的和要求1.了解酶的专一性。2.掌握验证酶的专一性的基本原理及方法。3.学会排除干扰因素，设计酶学实验。二、实验基本原理酶是一种具有催化功能的蛋白质。酶蛋白结构决定了酶的功能酶的高效性，酶催化的反应要比相应的没有催化剂的反应快103-1017倍。酶催化作用的一个重要特点是具有高度的底物专一性，即一种酶只能对某一种底物或一类底物起催化作用，对其他底物无催化反应。根据各种酶对底物的选择程度不同，它们的专一性可以分为下列几种：1.相对专一性一种酶能够催化一类具有相同化学键或基团的物质进行某种类型的反应。2.绝对专一性：有些酶对底物的要求非常严格只作用于一种底物，而不作用于任何其他物质。如脲酶只能催化尿素进行水解而生成二氧化碳和氨。如麦芽糖酶只作用于麦芽糖而不作用其它双糖，淀粉酶只作用于淀粉，而不作用于纤维素。3.立体异构专一性有些酶只有作用于底物的立体异构物中的一种，而对另一种则全无作用。如酵母中的糖酶类只作用于D-型糖而不能作用于L-型的糖。本实验以唾液淀粉酶、蔗糖酶对淀粉、蔗糖水解反应的催化作用来观察酶的专一性。采用Benedict试剂检测反应产物。Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成砖红色氧化亚铜沉淀。Na2CO3+2H2O2NaOH+H2CO3CuSO4+2+Na2SO4还原糖(CHOorC=O)+2Cu(OH)2Cu2O(砖红色或黄色)+2H2与Benedict试剂无呈色反应。淀粉被淀粉酶水解，产物为葡萄糖；蔗糖和棉子糖被蔗糖酶水解，其产物为果糖和葡萄糖，它们都为具有自由半缩醛羟基的还原糖，与Benedict试剂共热，即产生红棕色Cu2O沉淀。本实验以此颜色反应观察淀粉酶、蔗糖酶对淀粉和蔗糖的水解作用。三、实验材料与试剂1、实验材料蔗糖酶(样品）；新鲜唾液；2、实验试剂蔗糖酶液蔗糖酶液(样品）加蒸馏水适当稀释，备用；唾液淀粉酶液取唾液至25ml量筒中，用蒸馏水到25ml，用棉花过滤备用。唾液稀倍数因人而异，可稀释50400倍，甚至更高；5%蔗糖溶液；%淀粉溶液；Benedict试剂；四、实验器材与仪器1.漏斗，2.脱脂棉花；3.恒温水浴；4.量筒；5.试管；6.烧杯；7.吸量管。五、实验操作方法和步骤检查试剂取3支试管，按下表操作：注：1、检查目的：试剂是否有干扰因素存在。2、也可对蔗糖酶液、唾液淀粉酶液进行检查是否也有干扰因素存在，请自己设计。淀粉酶的专一性取三支试管，按下表操作：注：可增加一组唾液淀粉酶液经100加热3min处理后的样品对照组。蔗糖酶的专一性取三支试管，按下表操作：注：可增加一组蔗糖酶液经100加热3min处理后的样品对照组。六、结果分析讨论各试管观察结果依次是：1号蓝绿色，2号蓝色，3号蓝色Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成砖红色氧化亚铜沉淀。3只试管都为蓝色说明几只试管中都没有果糖和葡萄糖，说明在不加酶时，淀粉和蔗糖不易水解。试剂无干扰因素的存在。：1号土黄色，2号黄绿色，3号蓝色加入唾液淀粉酶，1号试管底物是淀粉，所以很容易水解成葡萄糖，与Benedict试剂共热，即产生红棕色Cu2O沉淀。所以1号颜色变化比较大。总的来看可以看出唾液淀粉酶只对淀粉有催化活性，不能催化蔗糖水解，具有对淀粉的底物专一性。3号是对照。：1号蓝色，2号红棕色，3号蓝色加入蔗糖酶，2号试管底物是蔗糖，所以很容易水解成果糖和葡萄糖，与Benedict试剂共热，即产生红棕色Cu2O沉淀。所以2号颜色变化比较大。从这三支试管看出蔗糖酶只对蔗糖的水解有催化作用，对淀粉无催化作用，具有对蔗糖的底物专一性。3号是对照。七、思考题1观察酶专一性实验为什么要设计这3组实验？每组各有何意义？蒸馏水有何用？第一组作为整个实验的空白对照组，检测Benedict试剂对实验结果的颜色有何影响，排除干扰因素的存在。第二组作为检测淀粉酶的专一性实验组，第三组作为检测蔗糖酶的专一性的实验组。蒸馏水作为每一个组中的空白对照，与组内其余两组进行对照。2将酶液煮沸10min后，重做二、三的操作，观察有何结果？各试管都为蓝色，因为酶在煮沸过程中已经变性，失去催化活性，故不能催化各自对应底物的水解反应。3在此实验中，为什么要用%淀粉(%NaCl)溶液？%NaCl的作用是什么？%NaCl中的Cl是作为激活剂激活唾液淀粉酶的活性，使实验结果不至于因为唾液淀粉酶的活性不足而导致不同。八、注意事项1.试管要干净，所有试剂加量准确，加好试剂后要摇匀。2.使用试剂时不要人为造成试剂间的互相污染；试剂用好瓶盖要立即盖好，防止试剂间的互相污染。以免实验结果的错误。-.影响酶活性的因素激活剂和抑制剂一、实验目的和要求1.了解激活剂和抑制剂对酶促反应速度的影响。2.学习检定激活剂和抑制剂影响酶促反应速度的原理和方法。二、实验基本原理在酶促反应过程中，酶的活性常受某些物质的影响，有些物质能使酶的活性增加，称为激活剂；某些物质它们并不引起酶蛋白变性，但能使酶分子上的某些必需基团发生变化，因而引起酶活力下降，甚至丧失，致使酶反应速度降低，称为酶的抑制剂。酶的激活剂种类：1、一些简单的无机离子，如Mg2+、Cl-等；2、一些中等大小的有机分子，如抗坏血酸等也是激活剂，它们对某些含巯基的酶具有激活作用；3、有些酶的催化作用易受某些抑制剂的影响，因而能除去抑制剂的物质也可称为激活剂，如EDTA能除去重金属，因而能解除重金属对酶的抑制作用。4、具有蛋白质性质的大分子物质，这些激活剂是指可对某些无活性的酶原起作用的酶。酶的抑制剂有许多种：如重金属离子、CO、氯化物、H2S、砷化物、氟化物、生物碱、有机磷农药等都是抑制剂。少量的激活剂或抑制剂就能影响酶的活性，而且常具有特异性。值得注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的，各种激活剂对酶的作用是不同的。本实验利用淀粉被水解的不同阶段产物与碘有不同颜色反应，定性观察唾液淀粉酶在酶促反应中激活或抑制现象。淀粉经酶促水解为葡萄糖的不同阶段的产物与碘作用的颜色反应如下：本实验中，Cl-为唾液淀粉酶的激活剂；Cu2+为唾液淀粉酶的抑制剂。利用淀粉被水解的不同阶段产物与碘有不同的呈色反应，定性观察唾液淀粉酶在酶促反应中激活和抑制现象。淀粉+碘蓝色淀粉+淀粉酶水解产物+颜色变化水解的程度是通过水解混合物遇碘溶液所呈现的颜色之变化来判断的。三、实验材料与试剂1、实验材料新鲜唾液2、实验试剂唾液淀粉酶取唾液1ml至25ml量筒中，用蒸馏水稀释至25ml，用棉花过滤备用。唾液稀释倍数因人而异，可稀释50400倍，甚至更高。%淀粉溶液%氯化钠溶液%硫酸铜溶液%硫酸钠溶液碘化钾-碘液四、实验器材与仪器1.试管及试管架2.量筒3.漏斗4.脱脂棉花5.点滴板6.吸量管7.恒温水浴五、实验操作方法和步骤取试管4支，按下表操作：注意：找出准确的保温时间，是本实验是实验能否成功的关键步骤之一，唾液淀粉酶液浓度可根据个人情况而定，通过37水浴溶保温计时，反应时间最好在815min以内，只有确定准确的保温时间才能进行实验。