为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划酶的竞争性抑制实验报告实验十六:丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用【实验名称】：丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用09救援一班第三大组李岚宇XX室温：25实验目的：1、学习和掌握竞争性抑制作用的特点。2、观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用。实验原理：化学结构与酶作用的底物结构相似的物质，可与底物竞争结合酶的活性中心，使酶的活性降低甚至丧失，这种抑制作用称为竞争性抑制作用。琥珀酸脱氢酶是机体内参与三羧酸循环的一种重要的脱氢酶，其辅基为FAD，如心肌中的琥珀酸脱氢酶在缺氧的情况下，可使琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下之氢可将蓝色的甲烯蓝还原成无色的甲烯白。这样，便可以显示琥珀酸脱氢酶的作用。丙二酸的化学结构与琥珀酸相似，它能与琥珀酸竞争而和琥珀酸脱氢酶结合。若琥珀酸脱氢酶已与丙二酸结合，则不能再催化琥珀酸脱氢，这种现象称为竞争性抑制。如相对地增加琥珀酸的浓度，则可减轻丙二酸的抑制作用。实验材料与仪器：1器材大白鼠、手术剪、镊子、磁盘、匀浆器、量筒、烧杯、纱布、滤纸、试管及试管架、恒温水箱、电热水浴锅2试剂/L琥珀酸溶液、/L琥珀酸溶液、/L丙二酸溶液、/L丙二酸溶液、1/15mol/L磷酸缓冲液、甲烯蓝、液体石蜡。实验步骤:1、酶提取液的制备：去大白鼠的肝脏、心脏、肾脏，用冷水洗3次，加入1/15mol/L磷酸缓冲液pH在。在匀浆器中进行匀浆，然后用纱布过滤，用干净的烧杯收集过滤的备用。2、取试管6支，编号，在按图步骤操作，各管溶液立即混均匀，沿试管壁加入液体石蜡，约，各管置于37的水浴中保温，切勿摇动试管，随时观察比较各试管颜色的变化，记录褪色时间。实验结果记录：表1实验讨论：1、酶提取液中有琥珀酸脱氢酶活性，表1所示，在试管1中没有抑制剂，但琥珀酸依然能脱氢，使得甲烯蓝反应得甲烯白。2、各管的褪色有明显的时间差别，褪色时间随I/S逐渐增大，而增大(转载于:写论文网:酶的竞争性抑制实验报告)。3、丙二酸对琥珀酸脱氢酶抑制作用的类型是竞争性抑制，其特点：最大反应速率Vmax不变，米氏常数Km增大，竞争性抑制可以通过增大底物浓度来减轻抑制程度。4、本实验中5号、6号试管的作用是做对照，5号试管和1号试管做对照，说明酶提取液中有琥珀酸脱氢酶的存在，6号试管中的酶提取液在100的水浴加热煮沸过，所以琥珀酸脱氢酶是失活的。【注意事项】：1、酶提取液的制备应操作迅速，以防止酶活性降低。2、加入液体石蜡的作用是隔绝空气，以避免空气中的氧气对实验造成影响，因此加石蜡时试管壁要倾斜，注意不要产生气泡。3、37水浴保温过程中，不能摇动试管，避免空气中的氧气接触反应溶液，使得还原型的甲烯白重新氧化成蓝色。4.、37水浴保温过程中，要注意随时观察各试管的褪色情况。5、实验结果结束后，一定要洗干净试管内的液体石蜡。XX年10月9号说明：本实验由四个小实验组成，其中第一个实验必做，其他三个小实验选做写实验报告时，可以只写需要做的实验内容！实验四酶的特性实验一、实验目的酶是生物催化剂，生物体内化学反应基本上都是在酶的催化下进行的。通过本实验了解酶催化的特异性、温度对酶活力的影响、PH对酶活力的影响、激活剂和抑制剂对酶活力的影响，对于进一步掌握代谢反应及其调控机理具有十分重要的意义。二、实验内容本实验由酶的专一性实验、温度对酶活力的影响、PH对酶活力的影响、激活剂和抑制剂对酶活力的影响4个小实验组成。酶的专一性1、实验原理本实验以唾液淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用为例，来说明酶的专一性。淀粉和蔗糖无还原性，唾液淀粉酶水解淀粉生成有还原性二糖的麦芽糖，但不能催化蔗糖的水解。用班氏试剂检查糖的还原性。班氏试剂为碱性硫酸铜，能氧化具还原性的糖，生成砖红色沉淀氧化亚铜。2、材料、仪器与试剂(1)材料：新鲜配制的唾液及其稀释液(2)仪器：恒温水浴；沸水浴；试管及试管架；(3)试剂：2%蔗糖溶液；溶于%NaCl的%淀粉溶液；班氏试剂。3、实验操作稀释唾液的制备唾液的获取用一次性杯取一定量的饮用水，漱口以清洁口腔，然后在嘴中含10-20ml饮用水，轻漱2min左右时间，即可获得唾液的原液，内含唾液淀粉酶。不同稀释度唾液的制备本实验需制备1：1、1：5、1：20、1：50、1：200等五个不同浓度的稀释唾液。举例说明：1:5指的是稀释了5倍的唾液，制备方法为1份原液+4份蒸馏水。1：20指的是稀释了20倍的唾液，制备方法为1份1：5的稀释液+3分蒸馏水。唾液淀粉酶最佳稀释度的确定表1唾液淀粉酶稀释度的确定淀粉酶的专一性表2淀粉酶专一性实验温度对酶活力的影响1、实验原理酶的催化作用受温度的影响。在最适温度下，酶的反应速度最高。淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色，糊精按其分子的大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单的糊精遇碘不呈颜色，麦芽糖遇碘也不呈色，在不同温度下，淀粉被唾液淀粉酶水的程度可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断。2、材料、仪器与试剂材料：新鲜配制的唾液及其稀释液仪器：试管及试管架；恒温水浴；冰浴；沸水浴；试剂：溶于%NaCl的%淀粉溶液；KII2碘溶液；3、实验操作取4支干燥的试管，编号后按下表加入试剂：表3温度对酶活力影响实验加样顺序摇匀后，将1、3号试管放入37恒温水浴中，2号试管放入冰水中。10分钟后1、2、3管均取出，用KII2溶液来检验1、2、3号管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。记录并解释结果。将2号管剩下的一半溶液放入37水浴中继续保温10分钟后，再用KII2液实验，记录实验结果。PH对酶活力的影响1、实验原理酶的活力受环境PH值的影响极为显著。不同酶的最适PH不同。本实验观察PH对唾液淀粉酶活性的影响。唾液淀粉酶的最适PH约为。2、材料、仪器与试剂材料：新配制的溶于%NaCl的%淀粉溶液仪器：试管及试管架；吸管；滴管；恒温水浴试剂：PH为、的缓冲溶液；KII2碘溶液；PH试纸3、实验操作表4PH对酶活性的影响实验为了更好的理解表格内容，下面对实验过程进行说明：各取缓冲液3ml，分别注入4支带有号码的试管，随后于各个试管中添加%淀粉溶液1ml和最佳稀释度的唾液1ml。向各试管中加入稀释唾液的时间间隔为1分钟。将各试管中物质混匀，并依次置于37恒温水浴中保温。待向第4管加入唾液2ml后，每隔1分钟由第3管取出一滴混合液，置于白瓷板上，加1小滴KII2溶液。添加KII2溶液，检验淀粉的水解程度。待混合变为淡棕黄色后，向所有试管依次添加1-2滴KII2溶液。添加滴KII2溶液的时间间隔，从第1管起，亦均为1分钟。观察各试管中物质呈现的颜色，分析pH对唾液淀粉酶活性的影响。唾液淀粉酶的活化及抑制1、实验原理酶的活性受活化剂或抑制剂的影响，氯离子为唾液淀粉酶的活化剂，铜离子为其抑制剂。2、材料、仪器与试剂材料：%淀粉溶液；最佳稀释度的唾液仪器：试管及试管架；恒温水浴试剂：1%NaCl溶液；1%CuSO4溶液；KII2碘溶液；1%Na2SO4溶液3、实验操作表4唾液淀粉酶活化及抑制实验三、注意事项各人唾液中淀粉酶活力不同，故本实验需要先做一个唾液淀粉酶稀释度的确定实验，以确定最佳稀释度。四、思考题1、何谓酶的最适pH和最适温度？2、说明底物浓度、酶浓度、温度和pH对酶反应速度的影响。3、作为一种生物催化剂，酶有哪些催化特点？丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用竞争性抑制作用是指，当抑制剂在结构上与底物类似，能与底物竞争酶分子活性中心的结合基团，从而阻碍酶与底物结合。它是可逆的，抑制作用的强弱取决于抑制剂与底物的相对浓度。丙二酸对琥珀酸脱氢酶有竞争性抑制作用。丙二酸的结构和琥珀酸非常相似，可竞争性地与酶的活性中心结合，使其不能与琥珀酸结合。因此可通过研究不同浓度比例的丙二酸和琥珀酸，观察其对琥珀酸脱氢酶活性的影响。1实验材料酶提取液实验室提供仪器滴管；玻璃棒；试管6支试剂/L琥珀酸；/L琥珀酸；/L丙二酸；/L丙二酸；甲烯蓝；液体石蜡；蒸馏水2实验方法实验原理琥珀酸经琥珀酸脱氢酶催化，脱氢生成延胡索酸。在体外隔绝空气条件下，从琥珀酸上脱下的一对氢可由人工受氢体甲烯蓝接受后，被还原成甲烯白。抑制剂丙二酸竞争琥珀酸脱氢酶的活性中心，阻碍底物与该酶的结合和催化反应，使甲烯蓝褪色的速度变慢。丙二酸对该酶的抑制程度取决于其与琥珀酸的相对浓度比例。实验设计竞争性抑制作用鉴定取6支试管，按下表操作：试剂管号酶提取液-/L琥珀酸-10/L琥珀酸-1010-/L丙二酸-10-10-/L丙二酸-10-10-蒸馏水10-25甲烯蓝各管混匀液体石蜡5放置室温不断观察各管甲烯蓝褪色置甲烯白的时间，比较各管顺序。3实验结果记录各管褪色顺序，得下表：管号顺序1号管中无抑制剂，所以琥珀酸在酶的催化下脱氢，使甲烯蓝褪色速度最快。3号管中底物与抑制剂比例为10:1，所以褪色速度次之。2号管和5号管中比例为1:1，速度排第3与第4。4号管浓度比为1:10，速度排第5。6号管为对照管。底物与抑制剂相对浓度比例决定了竞争性抑制的程度，也决定了甲烯蓝褪色的速度。4讨论通过本实验，可以证实，丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制性作用，取决于底物与抑制剂的相对浓度比例。底物浓度增加，抑制作用减弱。抑制剂浓度增加，抑制作用加强。在实验过程中要注意实验的同步性。正确计算反应时，得出正确的褪色顺序，是定性实验的关键点。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。