新基因克隆方法-－金锄头文库

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新基因克隆方法,以候选基因所对应的人和小鼠的cDNA序列为信息探针，在NCBI的EST数据库中搜寻与之同源的牛EST序列http:/www.ncbi.nlm.nih.gov/genome/seq/BlastGen/BlastGen.cgi?taxid=9913)。取长度在200 bp以上、同源性大于80%的牛的EST序列，用SeqMan软件构建EST连接群(contig)，得到连接群的一致序列(consensus)；将此一致序列再作为信息探针，再次与牛的EST数据库进行搜索比对，寻找新的EST序列，用同样的方法进行拼接，直到不能再延长为止，将最后得到的一致序列与牛的基因组比对，以确定得到的一致序列在牛基因组上的位置及其对应的基因的结构信息，结合人、小鼠和大鼠的基因结构信息，选取可靠的一致序列作为设计引物的靶序列，用Primer3在线引物基因特异的引物，进行候选基因的cDNA克隆。,