1 目目 录录 中文摘要3 英文摘要4 前言5 材料方法6 结果7 讨论7 参考文献10 综述11 致谢14 中文摘要中文摘要 2 三种肺炎支原体检测法的临床应用分析三种肺炎支原体检测法的临床应用分析 【摘摘 要要】 目的 探讨肺炎支原体（MP）咽拭子快速液体培养法、咽拭子聚 合酶链反应（PCR）法和血清 MP 被动凝集法（MP-Ab）等方法在儿童 MP 感染诊断治疗过程中的敏感性方法 采用 3MP 检测法对 362 例临 床拟诊呼吸道（非细菌性）感染的患儿的咽拭子和血清标本进行配 对研究，每患儿取咽拭子做快速培养和 PCR，同时取血清做 MP-Ab 检测，对 3 种方法的检测结果与临床诊断治疗病例进行回顾性分析。 结果 回顾临床病例诊断 MP 感染患儿 152 例。MP 快速培养法检出阳 性 78 例，阳性率为 51.3%，病程为（4.52.6）天；PCR 法检测出 阳性 103 例，阳性率为 67.8%，病程为（6.23.5）天；MP-Ab 法检 测出阳性 127 例，阳性率 83.5%，病程（8.14.5）天。结论 3 种 MP 检测法的敏感性与病程有相关性，临床医生应根据患儿病程选取 检测方法，以提高阳性检出率和敏感性。 【关键词关键词】 肺炎支原体，快速培养法，咽拭子聚合酶链反应， 血清抗体，配对研究 英文摘要英文摘要 3 Analysis of the clinical application of three kinds of mycoplasma detection method 【ABSTRACT 】 Objective to investigate Mycoplasma pneumoniae (MP) pharynx swab rapid liquid culture method, throat swab polymerase chain reaction (PCR) method and serum MP passive agglutination assay (MP-Ab) method in the diagnosis and the therapy for MP infection in children with sensitivity of 362 cases clinically suspected respiratory tract detected by 3MP method (non bacterial) infection in childrens throat swab and serum specimens were paired study, every children from throat swab do fast culture and PCR, at the same time serum MP-Ab detection, the detection results of 3 kinds of methods and clinical diagnosis and treatment were retrospectively analyzed. Results review the clinical diagnosis of MP infection in 152 cases. MP rapid culture method were positive in 78 cases, the positive rate was 51.3%, course of diseases is (4.5 + 2.6) days; PCR method to detect 103 cases were positive, the positive rate was 67.8%, course of diseases is (6.2 + 3.5) days; MP-Ab method to detect positive in 127 cases, the positive rate was 83.5%, the course of the disease (8.1 + 4.5) days. There is a correlation between the course of detection sensitivity and conclusion of 3 kinds of MP, clinicians should be based on children with disease detection method is selected, in order to improve the positive rate and sensitivity. 【key words】Mycoplasma pneumoniae quick cultivation Pharyngeal swab polymerase chain reaction serum antibody Paired design 前言前言 4 前前 言言 肺炎支原体（mycoplasma pneumoniae,MP）是婴幼儿、青少年 急道感染的主要病原体之，临床上表现为呼吸道感染综合征，其中 约 3%10%可发展为支原体肺炎。但只根据临床症状很难鉴别由 MP 或病毒、细菌等病原体引起的儿童呼吸道感染，给临床治疗带来一 定的困难。笔者采用 3 种 MP 检测法对 362 例临床拟诊为呼吸道（非 细菌性）感染患儿的咽拭子和血清标本进行配对研究，通过病例回 顾来探索对支原体肺炎敏感的实验室诊断方法，以协助临床准确做 出诊治。 研究研究论论文文 5 材料和方法材料和方法 2.1 样本 收集黄河中心医院检验科 2013 年 1 月 1 日8 月 6 日在儿科就 诊住院患儿病例，有呼吸道感染症状，已经初诊为非细菌性感染的 患儿 362 例作为研究对象，其中男 175 例，女 187 例；年龄为 2 个 月12 岁，病程为 190 天。 2.2 方法 具体方法有：（1）用 MP 快速培养法、PCR 法和 MP-Ab 法等 3 种 MP 检测法对 362 例研究对象同时进行检测，记录结果。 （2）通过 研究对象病历回顾统计 MP 感染的例数，并按年龄、病程和 3 种 MP 检测法结果进行统计学分析。 2.3 临床诊断 MP 感染的诊断标准 按文献1 、临床症状、体征标准，包括回顾性诊断即患 儿经红霉素治疗有效，经青霉素、头孢菌素治疗无效者等；以及实 验室检查 3 种检测法至少有一种阳性。病程计算方法：以病历本记 录为准，即在患儿开始有症状或体征时开始计算，到患儿来就诊检 测时为止进行计算。 2.4 MP 快速培养法 支原体分离鉴别培养液由珠海市浪峰生物技术有限公司提供。 清晨患儿未洗漱用咽拭子取咽部分泌物，严格按说明书进行，将咽 拭子用无菌生理盐水处理，接种到预温的培养基中，37 培养；培 养基液体颜色由紫红色变为草绿色或嫩绿色且清亮，并且在静置时， 瓶底有蓝色颗粒或物质沉淀为阳性，5 天后培养基颜色不变或无蓝 色颗粒或物质沉淀为阴性。PCR 法：试剂由中山大学达安基因股份 有限公司提供。应用 PCR 法检测 MP-DNA，严格按试剂盒说明书进行， 以在紫外灯下出现 180 bp 扩增带结果判为阳性。每次试验均设阳性、 阴性对照（阳性对照为 MP 质粒，阴性对照为无菌生理盐水） ，由专 人进行操作，质量控制。MP-Ab 法：试剂为日本瑞必欧株式会社 MP- Ab 检测试剂 SERODIA-MYCO凝集试验试剂盒，严格按试剂盒说明书 操作，抽取患儿静脉血 3 ml，采用明胶颗粒被动凝集法，用血清检 测，结果以140 判断为阳性。每次试验均设未致敏明胶颗粒、 研究研究论论文文 6 致敏明胶颗粒和阳性、阴性血清进行测定。 2.5 统计学方法 计量资料用均数标准差（xs）表示，各年龄组与 3 种检测 方法结果比较用 Spearman 检验；各年龄组间确诊病例的阳性率比较 用 2 检验；3 种检测方法阳性结果与病程之间的比较用 q 检验。 结结 果果 3.1 阳性样本 经过回顾性诊断，在配对研究组 362 例研究对象中有 152 例符 合 MP 感染的诊断标准，即有 152 例确诊病例，其中肺炎 45 例，支 气管炎 56 例，上呼吸感染 49 例，支气管哮喘 2 例。MP 快速培养法 检测出 78 例阳性，PCR 法检测出 103 例阳性，MP-Ab 法检测出 127 例阳性。 3.2 结果分析 各确诊病例的年龄分布，见表 1。表 1 显示儿童 MP 感染的年龄 以 34 岁年龄段的病例最多，为 46 例，阳性率最高，为 70.77%， 与其余年龄组段比较 P0.05。 不同病程患儿 3 种检测法的检测结果，见表 2，表 2 显示 MP 快速培 养法为阳性的患儿病程均值较短为（4.52.6）天，PCR 法为阳性 的患儿病程均值为（6.23.5）天，MP-Ab 法为阳性的患儿病程均 值较长为（8.14.5）天。3 组之间两两比较，差异有统计学意义 （P0.05） 。表 1 不同年龄组 MP 感染确诊病例和 3 种检测方法结果 对比分析注：代表与年龄组 34 岁组段比较结果表 2 不同病 程患儿 3 种检测方法阳性结果对比分析注：代表三组之间的两两 比较 讨讨 论论 1 MP 感染的临床表现常无特异性，临床的实际工作中，容易与 一般病毒性感冒相混淆。在临床上患儿有下列症状：（1）发热呈弛 张热或不规则热。刺激性咳嗽非脓性痰，偶带血丝。 （2）可有咽痛、 头痛、胸痛，全身症状比体征明显。 （3）肺部体征不典型而胸片炎 研究研究论论文文 7 症显著，可见云雾状大片阴影。 （4）WBC 正常或升高。 （5）青霉素 类、磺胺类抗生素治疗无效，改用或一开始用大环内酯类抗生素有 效。 （6）实验室 MP 检验有 1 项或 1 项以上阳性具备以上 2 个条件或 以上者可初步诊断为 MP 感染。多时候，临床医生为了尽快缓解患儿 的症状，需根据患儿的症状、体征和病史做 MP 感染的诊断性治疗， 但应与肺结核相互鉴别。 2 近年来由于诊断技术的提高，MP 感染报道日渐增多，一般认 为 MP 感染以年长儿发病较多，本文表 1 资料显示，28 岁年龄段 是发病的高峰期2 。占同期呼吸免疫科住院患儿的 9.3%，比有关 文献报道各年龄组支原体肺炎占肺炎发病的 10%20%低。说明 MP 感染的发病年龄有提前，且年龄越小，临床表现愈不典型。 3 临床实验室检测 MP 的方法很多，过去所用的冷凝集试验法诊 断 MP 感染缺乏特异性，敏感性也差，易受病程的影响3 。本文采 用配对资料研究，对疑为 MP 感染的患儿进行 3 种 MP 检测法，以探 讨 MP 快速培养法、PCR 法和 MP-Ab 法等方法在儿童支原体肺炎诊断 治疗过程中的敏感性。提示临床医生根据患儿不同的病程选取不同 的检测方法，以提高实验室的阳性检出率。 4 MP 快速培养法是利用 MP 生长代谢产物使培养基液体中指示 剂颜色发生改变来判断 MP 生长；标本中的其他支原体和细菌则因培 养基中加入了青霉素和醋酸陀均被抑制。该法阳性结果可 48 h 检出。 结果显示，培养法阳性率为 51.3%（78/152） ，低于另外两种方法的 阳性率。可能与