人类淋巴细胞染色体制备、G显带及核型分析,淋巴细胞染色体制备,一、常用设备 无菌工作台 隔水式电热恒温培养箱 电热式水浴箱 电热干燥箱 光学显微镜 离心机,二、常用试剂 培养基（1640） 新生小牛血清 植物血球凝集素（PHA） 双抗（青、链霉素） 抗凝剂（肝素，EDTA） 秋水仙碱（胺） 甲醇、冰乙酸 胰蛋白酶 Giemsa染液,三、常用易耗品 玻璃培养瓶 刻度玻璃离心管 翻口胶塞 玻璃滴管 载玻片,四、细胞培养和G显带染色体制备 1 细胞培养 1640+10%牛血清+PHA 种全血0.5ml 37 培养70h 加秋水仙碱 2h 2 染色体制备 培养物 离心（2000转/分钟） 去上清 加 0.075M KCL 低渗处理 加1ml 3:1甲醇、冰乙酸 离心 甲醇、冰乙酸 固定二次 滴片 60 烤片2h,3 G显带 0.025%胰蛋白酶 染色体玻片 处理30-90秒 2-5%Giemsa染色5-10分钟 自来水 蒸馏水冲洗 干燥 显微镜观察 4 染色体计数和核型分析 染色体计数：一般情况下计数30个分裂相，遇 嵌合体或性畸型时计数100个分裂相 核型分析：一般分析3个分裂相,G显带染色体识别,1 2 3,4 5 6 7,8 9 10 11,12 13 14 15,16 17 18 19,X,20 21 22 Y,