血糖浓度测定,生物化学实验 CQMU,P、105 生物化学与分子生物学实验室 2008.09,实验目的 1学习用葡萄糖氧化酶法测定 血糖浓度的原理和方法。 2掌握分光光度计的原理和操作。,实验原理 本实验用GOD-POD试剂盒测定血糖，其原理为：葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）利用氧和水将血清中葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢。,葡萄糖 + O2 + H2O 葡萄糖酸 + H2O2,GOD,过氧化物酶（peroxidase，POD）将H2O2分解为水和氧，产生的氧使4 - 氨基安替比林和酚缩合为红色醌类化合物:,红色的深浅与G成正比,可用比色法测定样品和标准G溶液的A值,计算出样品的G mmol/L。,实验步骤,（一）动物准备及取血： 取饥饿16小时正常家兔一只（2 kg 3 kg） ，以耳缘静脉取血，先仔细剪去放血部位耳毛，勿剪破皮肤，用湿棉球反复拭净耳部，再用二甲苯擦拭兔耳朵皮肤，使其血管充血，再用棉球擦干，在放血部位涂一薄层凡士林，再用三菱针刺破耳沿静脉放血，取完后用干棉球压迫血管止血。分离血清。,（二）测定血糖浓度 1取试管4支，按下表操作：,混匀各管，放37水浴中保温15min，取出冷却,在波长505nm以空白管调零读取标准管和测定管光吸收值。,正常参考值： 3.9-6.1mmol/L,2. 计算,分生理性或病理性升高和降低 1生理性或暂时性高血糖： 餐后12h、注射葡萄糖、输葡萄糖液后、情绪紧张时。 2生理性或暂时性低血糖： 运动后、饥饿时、注射胰岛素后、妊娠、哺乳期、服降糖药后。,临床意义,3病理性高血糖： (1)糖尿病：因胰岛素分泌不足。当空腹血糖水平达7.2-11mmolL(130-200mgdl)时可疑为糖尿病；当血糖水平超过11mmolL(200mgdl)时可诊断为糖尿病。 (2)使血糖升高的激素分泌增加： 如垂体前叶机能亢进、肾上腺皮 质机能亢进、甲亢,嗜铬细胞瘤等,(3)脑外伤、脑出血、脑膜炎等使 颅内压增高，刺激血糖中枢，引 起血糖升高。 (4)脱水：如呕吐、腹泻、发高烧等，引起血糖轻度增高(7.27.8mmolL)。 (5)麻醉、窒息、肺炎、急性传染病、癫痫、紫痫等疾病可加速肝糖原分解，使血糖增高,4病理性低血糖： (1)胰岛素分泌过多：如胰岛细胞瘤。 (2)升高血糖激素分泌减少：如垂体机能减退、肾上腺机能减退、甲状腺机能减退。 (3)血糖来源减少,肝糖原贮存不足 如长期营养不良、肝炎、肝坏死、 肝癌、糖原累积病等。,实验材料与仪器 1仪器 721-分光光度计，电炉，水浴锅。 2血糖试剂盒包括 酶试剂： 葡萄糖氧化酶 过氧化物酶 磷酸盐缓冲液（pH7.0） 4-氨基安替比林 酚试剂： 酚,思考题 1为什么要在饥饿条件下采血？ 2为什么阿狄森氏病会出现低血糖？ 3在实验操作过程中有哪些因素可造成 血糖测定结果准确？如何纠正？,Lets begin！,